干擾素α1b聯(lián)合孟魯司特鈉治療小兒嗜酸性粒細(xì)胞支氣管炎的療效及對(duì)氧化應(yīng)激反應(yīng)、外周血FOXP3 mRNA水平的影響

趙利娟，馬 敏，王學(xué)增

1.河南省鄭州瑞祥醫(yī)院兒科，河南鄭州 450100；2.河南省第二人民醫(yī)院兒科，河南鄭州 450000

嗜酸性粒細(xì)胞(Eos)支氣管炎(EB)是引發(fā)慢性咳嗽的常見病因之一，是以呼吸道Eos增多為主要病理變化，而患者由于呼吸道梗阻致喘憋，影響患者生活質(zhì)量[1]。調(diào)查結(jié)果指出，EB是引起慢性咳嗽的一個(gè)重要原因，占慢性咳嗽的10%～30%[2]。既往研究指出，EB和哮喘免疫病理學(xué)特征接近[3]。EB對(duì)于激素反應(yīng)較好，吸入性糖皮質(zhì)激素是2006年美國(guó)胸科醫(yī)師協(xié)會(huì)建議的一線治療藥物，多數(shù)EB患者經(jīng)治療后具有良好預(yù)后，少數(shù)患者在停藥后反復(fù)發(fā)作[4]。因此仍需尋找更為有效的治療方案。干擾素α1b具有抗病毒、抗細(xì)胞增殖、免疫調(diào)節(jié)等作用[5]，對(duì)傳染性單核細(xì)胞增多癥等具有良好效果[6]。孟魯司特鈉為白三烯受體拮抗劑，在支氣管炎治療中效果良好[7]。既往研究表明，支氣管炎患兒體內(nèi)多具有明顯的氧化應(yīng)激反應(yīng)，在病情發(fā)生、發(fā)展中起到重要作用[8]。鑒于此，本研究選取EB患兒128例，分析干擾素α1b聯(lián)合孟魯司特鈉的療效及對(duì)氧化應(yīng)激反應(yīng)的影響，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料和方法

1.1一般資料 選取2019年5月至2021年5月鄭州瑞祥醫(yī)院收治的128例EB患兒為研究對(duì)象，采用隨機(jī)數(shù)字表法將患兒分為對(duì)照組和觀察組，每組64例。觀察組：男33例，女31例；年齡5～11歲，平均(7.85±1.16)歲；病程8～18 d，平均(13.06±2.09)d。對(duì)照組：男29例，女35例；年齡5～11歲，平均(8.03±1.34)歲；病程9～17 d，平均(12.95±1.83)d。兩組一般資料比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

診斷標(biāo)準(zhǔn)：符合《咳嗽的診斷與治療指南：2009版》[9]中的EB診斷標(biāo)準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn)：EB首次發(fā)病。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)入組前接受支氣管擴(kuò)張劑、糖皮質(zhì)激素等藥物治療；(2)存在嚴(yán)重腎肝功能異常；(3)伴消化道病變；(4)過敏體質(zhì)；(5)中途自愿退出研究；(6)同期接受其他研究。所有患兒家屬對(duì)本研究知情同意并簽署知情同意書。本研究通過鄭州瑞祥醫(yī)院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。

1.2方法

1.2.1治療方法 所有患兒入院之后均予以吸氧、化痰、止咳等基礎(chǔ)治療。

對(duì)照組采用孟魯司特鈉(Merck Sharp & Dohme Ltd，批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字J20130054)治療，睡前口服，5 毫克/次，1次/日。觀察組采用干擾素α1b(深圳科興藥業(yè)有限公司，批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字S20033035)聯(lián)合孟魯司特鈉治療。孟魯司特鈉具體用法同對(duì)照組；干擾素α1b進(jìn)行霧化吸入，2 μg/kg，2次/日。兩組持續(xù)用藥2周。

1.2.2觀察指標(biāo) (1)對(duì)比兩組臨床療效。臨床控制：咳嗽消失，Eos比例恢復(fù)正常；顯效：偶有咳嗽，Eos比例恢復(fù)正常；有效：咳嗽頻繁，但未影響日常生活，Eos比例接近正常；無效：尚未達(dá)到上述標(biāo)準(zhǔn)[10]?？傆行?(總例數(shù)-無效例數(shù))/總例數(shù)×100%。

(2)對(duì)比兩組臨床癥狀消失時(shí)間，臨床癥狀包括發(fā)熱、咳嗽、咳痰、喘息、哮鳴音。

(3)對(duì)比治療前后兩組外周血Eos計(jì)數(shù)及誘導(dǎo)痰EOS分類。收集所有患兒晨起空腹靜脈血，采用XS-500i型號(hào)全自動(dòng)血液分析儀(日本希森美康)進(jìn)行Eos計(jì)數(shù)。所有患者晨起收集痰液前先清水漱口，然后深咳，咳痰到已消毒的培養(yǎng)皿內(nèi)，將痰液處理后作痰涂片，由專業(yè)醫(yī)務(wù)人員利用光學(xué)顯微鏡進(jìn)行細(xì)胞分類。

(4)對(duì)比治療前后兩組外周血FOXP3 mRNA水平及T淋巴細(xì)胞亞群水平。收集全部研究對(duì)象晨起空腹靜脈外周血5 mL，通過ZE5型號(hào)流式細(xì)胞儀(美國(guó)Bio-Rad公司)檢測(cè)CD3+、CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞百分比，計(jì)算CD4+T淋巴細(xì)胞/CD8+T淋巴細(xì)胞比值。靜脈血經(jīng)RNA提取與反轉(zhuǎn)錄試劑盒反轉(zhuǎn)錄cDNA第1鏈，采用熒光定量PCR檢測(cè)FOXP3 mRNA基因表達(dá)，用2-ΔΔCt計(jì)算FOXP3 mRNA水平。

(5)對(duì)比治療前后兩組外周血氧化應(yīng)激指標(biāo)水平。檢測(cè)的氧化應(yīng)激指標(biāo)包括超氧化物歧化酶(SOD)、總抗氧化能力(T-AOC)、晚期蛋白氧化產(chǎn)物(AOPPs)、脂質(zhì)過氧化氫(LHP)。收集晨起空腹外周靜脈血5 mL，以3 000 r/min離心5 min，離心半徑12 cm，取血清，采用比色法測(cè)定T-AOC水平；采用黃嘌呤氧化酶法測(cè)定SOD水平；采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)測(cè)定AOPPs、LHP水平。

2 結(jié) 果

2.1兩組臨床療效比較 觀察組臨床總有效率(95.31%)高于對(duì)照組(79.69%)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=7.143，P=0.008)。見表1。

表1 兩組臨床療效比較[n(%)]

2.2兩組臨床癥狀消失時(shí)間比較 觀察組發(fā)熱、咳嗽、咳痰、喘息、哮鳴音消失時(shí)間均短于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 兩組臨床癥狀消失時(shí)間比較

2.3治療前后兩組外周血Eos計(jì)數(shù)及誘導(dǎo)痰Eos分類比較 治療前兩組外周血Eos計(jì)數(shù)及誘導(dǎo)痰Eos分類比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。治療后兩組外周血Eos計(jì)數(shù)及誘導(dǎo)痰Eos分類均較治療前減少(P<0.05)，且治療后觀察組外周血Eos計(jì)數(shù)及誘導(dǎo)痰Eos分類少于對(duì)照組(P<0.05)。見表3。

表3 治療前后兩組外周血Eos計(jì)數(shù)及誘導(dǎo)痰Eos分類比較

2.4治療前后兩組外周血FOXP3 mRNA水平及T淋巴細(xì)胞亞群分析 治療前兩組外周血FOXP3 mRNA水平、CD3+T淋巴細(xì)胞百分比、CD4+T淋巴細(xì)胞百分比、CD8+T淋巴細(xì)胞百分比、CD4+T淋巴細(xì)胞/CD8+T淋巴細(xì)胞比值相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。治療后兩組外周血FOXP3 mRNA水平、CD3+T淋巴細(xì)胞百分比、CD4+T淋巴細(xì)胞百分比、CD4+T淋巴細(xì)胞/CD8+T淋巴細(xì)胞比值均較治療前升高(P<0.05)，CD8+T淋巴細(xì)胞百分比較治療前下降(P<0.05)；且治療后觀察組外周血FOXP3 mRNA水平、CD3+T淋巴細(xì)胞百分比、CD4+T淋巴細(xì)胞百分比、CD4+T淋巴細(xì)胞/CD8+T淋巴細(xì)胞比值均高于對(duì)照組(P<0.05)，CD8+T淋巴細(xì)胞百分比低于對(duì)照組(P<0.05)。見表4。

表4 治療前后兩組外周血FOXP3 mRNA水平及T淋巴細(xì)胞亞群分析

組別nCD3+ T淋巴細(xì)胞百分比(%)治療前治療后FOXP3 mRNA治療前治療后觀察組6445.15±6.3759.78±6.32a2.14±0.314.03±0.75a對(duì)照組6446.21±7.0652.42±6.17a2.16±0.333.64±0.53at0.3533.3970.8926.666P0.7240.0010.374<0.001

2.5治療前后兩組外周血氧化應(yīng)激指標(biāo)水平比較 治療前兩組外周血SOD、T-AOC、AOPPs、LHP水平相比，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。治療后兩組外周血SOD、T-AOC水平較治療前升高(P<0.05)，且治療后觀察組外周血SOD、T-AOC水平均高于對(duì)照組(P<0.05)。治療后兩組外周血AOPPs、LHP水平較治療前降低(P<0.05)，且治療后觀察組外周血AOPPs、LHP水平均低于對(duì)照組(P<0.05)。見表5。

表5 治療前后兩組外周血氧化應(yīng)激指標(biāo)水平比較

3 討 論

EB是一類以氣道Eos浸潤(rùn)為特征的非哮喘支氣管炎，2006年被美國(guó)《咳嗽的診斷與治療指南》作為獨(dú)立疾病納入慢性咳嗽的常見病因。EB病因可能和吸入變應(yīng)原與接觸職業(yè)性過敏原等因素有關(guān)，屬于嗜酸性氣道炎癥，臨床表現(xiàn)是特應(yīng)性干咳、慢性咳嗽等狀況，影響患者日常生活。近幾年，EB發(fā)病率呈逐年升高趨勢(shì)[11]。臨床上關(guān)于EB發(fā)病機(jī)制尚未闡明，常用糖皮質(zhì)激素吸入治療，部分患者效果欠佳，故需尋找更為有效的治療方案。

孟魯司特鈉可競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合半胱氨酸受體，下調(diào)白三烯活性，起到降低氣道炎癥反應(yīng)的效果，有利于減輕氣道阻塞，以改善臨床癥狀。干擾素α1b具有免疫調(diào)節(jié)和廣譜抗病毒等作用，可促進(jìn)基因產(chǎn)物形成，阻滯DNA及RNA生長(zhǎng)、病毒蛋白翻譯，激活巨噬細(xì)胞、NK細(xì)胞等，增強(qiáng)細(xì)胞吞噬能力，提高機(jī)體自身抵抗力。干擾素α1b能阻滯Eos、T淋巴細(xì)胞，減少炎癥因子釋放與合成，減輕炎癥反應(yīng)，改善臨床癥狀，且霧化吸入便于痰液稀釋，可快速減輕咳痰癥狀，并增強(qiáng)患兒治療依從性。本研究結(jié)果中觀察組臨床總有效率達(dá)95.31%，發(fā)熱、咳嗽、咳痰、喘息、哮鳴音消失時(shí)間明顯縮短，Eos計(jì)數(shù)及誘導(dǎo)痰Eos分類得到改善，說明干擾素α1b聯(lián)合孟魯司特鈉治療可提高治療效果，減輕臨床癥狀。

EB患兒伴細(xì)胞免疫功能異常。CD3+T淋巴細(xì)胞反映T淋巴細(xì)胞總數(shù)；CD4+T淋巴細(xì)胞越少，細(xì)胞免疫應(yīng)答越差；CD4+T淋巴細(xì)胞/CD8+T淋巴細(xì)胞比值下降說明細(xì)胞免疫功能減弱[12]；CD8+T淋巴細(xì)胞殺傷能力因FOXP3 mRNA表達(dá)減少而增強(qiáng)[13]。本研究結(jié)果顯示，治療后觀察組外周血FOXP3 mRNA水平、CD3+T淋巴細(xì)胞百分比、CD4+T淋巴細(xì)胞百分比、CD4+T淋巴細(xì)胞/CD8+T淋巴細(xì)胞比值高于對(duì)照組，說明干擾素α1b聯(lián)合孟魯司特鈉治療可改善免疫功能，促進(jìn)病情好轉(zhuǎn)，原因可能為干擾素α1b存在免疫調(diào)節(jié)功能。

呼吸道Eos增多后，可導(dǎo)致呼吸道產(chǎn)生炎癥反應(yīng)，過度釋放脂質(zhì)過氧化、活性氧，損傷組織細(xì)胞，破壞機(jī)體內(nèi)氧化與抗氧化之間的動(dòng)態(tài)平衡，導(dǎo)致患兒產(chǎn)生氧化應(yīng)激反應(yīng)；AOPPs與LHP為氧化代謝產(chǎn)物，其水平和氧化應(yīng)激度呈正比；SOD反映了抗氧化能力，由于疾病機(jī)體增加了SOD消耗，使SOD呈低表達(dá)[14]。本研究顯示，經(jīng)干擾素α1b、孟魯司特鈉聯(lián)合治療2周后，外周血SOD、T-AOC水平升高，AOPPs、LHP水平下降，說明EB患兒體內(nèi)氧化應(yīng)激反應(yīng)得到改善，其原因可能是干擾素α1b能減少Eos分泌，阻滯炎癥因子分泌，減輕炎癥反應(yīng)，降低脂質(zhì)過氧化與活性氧的過度釋放，有利于氧化與抗氧化之間的平衡恢復(fù)。

綜上所述，干擾素α1b與孟魯司特鈉聯(lián)合治療EB患兒效果顯著，可減輕臨床癥狀，下調(diào)Eos計(jì)數(shù)、痰Eos分類，增強(qiáng)免疫功能，調(diào)節(jié)氧化應(yīng)激。