• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    靈仙新苷對(duì)膝骨關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞凋亡和自噬的影響

    2023-03-11 09:19:18李納平涂杜鑫鄺高艷劉鑫譚旭儀曾凡盧敏
    關(guān)鍵詞:威靈仙貨號(hào)軟骨

    李納平 ,涂杜鑫 ,鄺高艷 ,劉鑫 ,譚旭儀 ,曾凡 ,盧敏

    1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院,湖南 長(zhǎng)沙 410011; 2.湖南中醫(yī)藥大學(xué),湖南 長(zhǎng)沙 410208;3.湖南中醫(yī)藥研究院附屬醫(yī)院,湖南 長(zhǎng)沙 410006

    骨關(guān)節(jié)炎(osteoarthritis,OA)是中老年人群常見的慢性退行性關(guān)節(jié)疾病,其病理特征主要包括關(guān)節(jié)軟骨退變、滑膜炎癥、軟骨下骨硬化、大量骨贅生成等[1-2]。在OA好發(fā)部位中,膝骨關(guān)節(jié)炎(knee osteoarthritis,KOA)發(fā)病率最高,其次是手關(guān)節(jié)炎和髖關(guān)節(jié)炎,我國(guó)中老年人群KOA發(fā)病率為8.1%,且有不斷升高趨勢(shì)[3-4]。

    關(guān)節(jié)軟骨退變被認(rèn)為是KOA發(fā)病最關(guān)鍵的機(jī)制,軟骨細(xì)胞通過維持細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)合成與降解的動(dòng)態(tài)平衡,從而在潤(rùn)滑關(guān)節(jié)、維持關(guān)節(jié)軟骨機(jī)械形態(tài)方面發(fā)揮重要作用[5],軟骨細(xì)胞凋亡會(huì)打破關(guān)節(jié)軟骨合成與降解的穩(wěn)態(tài)平衡。自噬是細(xì)胞維持內(nèi)穩(wěn)態(tài)的關(guān)鍵機(jī)制,細(xì)胞通過自噬降解和再利用細(xì)胞中衰老的細(xì)胞器和大分子物質(zhì),從而避免直接死亡。研究發(fā)現(xiàn),軟骨細(xì)胞自噬和KOA發(fā)生密切相關(guān),通過激活自噬可以減少軟骨細(xì)胞凋亡,延緩關(guān)節(jié)軟骨退變[6-7]。中醫(yī)藥治療KOA具有多途徑、多靶點(diǎn)的特點(diǎn),且不良反應(yīng)少,能有效緩解KOA癥狀,延緩軟骨退變[8]。

    中藥威靈仙為毛茛科植物威靈仙Clematis chinensisOsbeck、棉團(tuán)鐵線蓮Clematis hexapetalaPall.或東北鐵線蓮Clematis manshuricaRupr.的干燥根和根莖,具有祛風(fēng)濕、通經(jīng)絡(luò)、止痹痛作用[9],其三萜皂苷類成分在治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎和KOA方面具有一定療效[10],能通過抑制軟骨細(xì)胞凋亡[11],維持ECM穩(wěn)定[12],從而延緩KOA關(guān)節(jié)軟骨退變。靈仙新苷(clematichinenoside AR,C-AR)是從威靈仙中提取的一種三萜皂苷,具有抗炎鎮(zhèn)痛作用,能將關(guān)節(jié)炎大鼠血清和尿液24種類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎相關(guān)標(biāo)志物調(diào)至正常水平,緩解關(guān)節(jié)炎癥狀[13],并可通過激活自噬減輕氧化型低密度脂蛋白誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞炎癥[14]。但其能否治療KOA目前尚無報(bào)道。基于此,本研究觀察C-AR對(duì)KOA軟骨細(xì)胞凋亡和自噬的影響,為KOA治療提供新思路。

    1 材料與方法

    1.1 樣本來源

    KOA關(guān)節(jié)軟骨樣本來自湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院四肢關(guān)節(jié)科2021年1月-2021年12月接受全膝關(guān)節(jié)置換術(shù)的KOA患者。共14名患者,其中女性11名,男性3名,平均年齡(69.71±6.28)歲。本研究經(jīng)湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院倫理審查委員會(huì)批準(zhǔn)(HNLL-2021-006-01),并獲得所有患者書面知情同意。

    1.2 主要試劑與儀器

    靈仙新苷,貨號(hào)L-151,成都瑞思芬;DEME/F12、胎牛血清(FBS),貨號(hào)分別為11330032、10099,美國(guó)Gibco公司;活性氧(ROS)試劑盒、胰蛋白酶,貨號(hào)分別為S0033S、C0201,上海碧云天;Ⅱ型膠原酶,貨號(hào)9001-12-1,美國(guó)Sigma公司;白細(xì)胞介素(IL)-1β,貨號(hào)200-01B,美國(guó)Peprotech公司;IL-6、IL-8 ELISA檢測(cè)試劑盒,貨號(hào)分別為CSBE04638h、CSB-E04641h,武漢華美生物工程;BCA蛋白定量試劑盒,貨號(hào)10030908,長(zhǎng)沙艾碧維;PBS、RIPA裂解液,貨號(hào)分別為G4202、G2002,武漢賽維爾;CCK8試劑盒,貨號(hào)NU679,日本同仁;Trizol總RNA提取試劑,貨號(hào)15596026,美國(guó)Thermo;HiFiScript cDNA Synthesis Kit,貨號(hào)CW2569,北京康為生物;甲苯胺藍(lán)染液,貨號(hào)BL539A,北京索萊寶;DAPI染色液,貨號(hào)C02-04002,北京Bioss;Ⅱ型膠原一抗,貨號(hào)AF0135,美國(guó)Affinity Biosciences;Bax、Caspase-3、Beclin1、LC3B一抗,貨號(hào)分別為50599-2-Ig、19677-1-AP、11306-1-AP、18725-1-AP,美國(guó)Proteintech;Bcl-2一抗,貨號(hào)ab59348,英國(guó)Abcam;HRP-goat anti-mouse IgG、HRP-goat antirabbit IgG,貨號(hào)分別為SA00001-1、SA00001-2,美國(guó)Proteintech。SW-CJ-2FD超凈工作臺(tái),江蘇蘇凈;HERAcell2401二氧化碳培養(yǎng)箱,美國(guó)Thermo;XDS-3倒置生物顯微鏡,上海奧顯;Enspire多功能酶標(biāo)儀,美國(guó)Perkinelmer;LSM800激光掃描共聚焦顯微鏡,德國(guó)蔡司;Aria Ⅱ流式細(xì)胞儀,美國(guó)BD;MB-530酶標(biāo)儀,深圳匯松。

    1.3 細(xì)胞分離、培養(yǎng)及鑒定

    參考文獻(xiàn)[15]采用二步酶消化法提取軟骨細(xì)胞,將軟骨組織剪碎,加入0.25%胰蛋白酶,放入37 ℃、5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱消化30 min,加入完全培養(yǎng)基(79% DMEM/F12+20% FBS+1%雙抗)終止消化。將軟骨組織轉(zhuǎn)移至離心管,1 200 r/min離心5 min,棄上清液,加入與軟骨組織等體積的0.2% Ⅱ型膠原酶,轉(zhuǎn)移至無菌玻璃瓶,置于培養(yǎng)箱消化20 h。用70 μm細(xì)胞過濾器過濾,濾液1 200 r/min離心5 min,去除上清液,沉淀即為軟骨細(xì)胞。用完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,接種至培養(yǎng)瓶,3~5 d換液1次,待細(xì)胞鋪滿瓶底80%以上后進(jìn)行傳代。取P1代細(xì)胞進(jìn)行甲苯胺藍(lán)及Ⅱ型膠原免疫熒光染色鑒定。

    1.4 分組、造模及給藥

    將軟骨細(xì)胞按1×105個(gè)/孔接種至6孔板,加入完全培養(yǎng)基,置于培養(yǎng)箱培養(yǎng)過夜。將細(xì)胞分為對(duì)照組、模型組和C-AR組,每組4個(gè)復(fù)孔,對(duì)照組正常培養(yǎng),模型組參考課題組前期方法[16]加入10 ng/mL IL-1β處理24 h,C-AR組參照文獻(xiàn)[17]方法,先加入30 μmol/L C-AR預(yù)處理1 h,然后加入10 ng/mL IL-1β處理24 h。

    1.5 CCK8法檢測(cè)細(xì)胞活力

    將軟骨細(xì)胞以1×104個(gè)/孔接種至96孔板,使用完全培養(yǎng)基置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h,然后換成無血清培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)12 h,按“1.4”項(xiàng)下方法分組并進(jìn)行干預(yù),吸去培養(yǎng)基,每孔加入100 μL CCK8工作液(用PBS按1∶9稀釋),放入培養(yǎng)箱避光孵育2 h,酶標(biāo)儀波長(zhǎng)450 nm處檢測(cè)各孔吸光度(OD值)。

    1.6 ELISA檢測(cè)

    將細(xì)胞按“1.4”項(xiàng)下方法處理后,吸去培養(yǎng)基,加入預(yù)冷PBS洗滌細(xì)胞,將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至離心管中,加入PBS,超聲破碎細(xì)胞,4 ℃、3 000 r/min離心5 min,取上清液,根據(jù)ELISA試劑盒說明書檢測(cè)細(xì)胞IL-6和IL-8含量。

    1.7 流式細(xì)胞儀檢測(cè)活性氧含量

    按“1.4”項(xiàng)下方法處理細(xì)胞后,PBS洗滌細(xì)胞2次,加入10 μmol/L DCFH-DA,37 ℃孵育20 min,無血清培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞3次,收集細(xì)胞,使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)ROS含量。

    1.8 流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率

    按“1.4”項(xiàng)下方法處理細(xì)胞后,胰蛋白酶消化細(xì)胞,將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至離心管,2 000 r/min離心5 min,沉淀用PBS洗滌2次,每次洗滌后2 000 r/min離心5 min,向樣品中加入結(jié)合緩沖液490 μL、Annexin V-FITC 5 μL和碘化丙啶5 μL,室溫避光反應(yīng)10 min,流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率。

    1.9 Western blot檢測(cè)

    將細(xì)胞按“1.4”項(xiàng)下方法處理后,吸去培養(yǎng)基,加入RIPA裂解液提取蛋白,使用BCA蛋白試劑盒測(cè)定蛋白濃度。蛋白進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳,將蛋白轉(zhuǎn)移至PVDF膜,5%脫脂奶粉室溫封閉2 h,加入Bax一抗(1∶5 000)、Caspase-3一抗(1∶1 000)、Bcl-2一抗(1∶500)、Beclin1一抗(1∶1 000)、LC3B一抗(1∶500),4 ℃孵育過夜。加相應(yīng)二抗,室溫孵育90 min,ECL發(fā)光液顯影,凝膠成像系統(tǒng)成像。用Image-Pro Plus 6.0軟件對(duì)條帶進(jìn)行灰度分析,以β-actin為內(nèi)參,計(jì)算蛋白相對(duì)表達(dá)量。

    1.10 qRT-PCR檢測(cè)

    將細(xì)胞按“1.4”項(xiàng)下方法處理后,吸去培養(yǎng)基,用總RNA提取試劑盒提取總RNA,根據(jù)HiFiScript cDNA Synthesis Kit,以總RNA為模板反轉(zhuǎn)錄合成cDNA,SYBR法對(duì)樣品進(jìn)行qRT-PCR。以β-actin為內(nèi)參,采用2-ΔΔCt法進(jìn)行相對(duì)定量分析。引物序列見表1。

    表1 各基因PCR引物序列

    1.11 免疫熒光檢測(cè)

    將爬片放入6孔板中,以1×105個(gè)/孔接種細(xì)胞,按“1.4”項(xiàng)下方法處理。4%多聚甲醛固定30 min,加入0.3%Triton X-100,37 ℃通透15 min,5% BSA 37 ℃封閉10 min,加入LC3B一抗(1∶100),4 ℃孵育過夜。滴加山羊抗兔IgG(1∶100),室溫避光孵育20 min,DAPI工作溶液染細(xì)胞核,抗熒光淬滅封片劑封片,熒光顯微鏡下觀察并拍照,用Image-Pro Plus 6.0軟件計(jì)算熒光強(qiáng)度。

    1.12 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    采用Graphpad Prism 8.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以±s表示,多組間比較采用方差分析。P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 軟骨細(xì)胞鑒定

    初期軟骨細(xì)胞呈不規(guī)則多角形或短梭形,隨著培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng),形態(tài)多呈長(zhǎng)梭形,細(xì)胞核呈圓形或橢圓形,細(xì)胞間有偽足相連,形態(tài)似成纖維細(xì)胞。甲苯胺藍(lán)染色可見胞漿呈淺藍(lán)色,細(xì)胞核為深藍(lán)色。Ⅱ型膠原免疫熒光染色顯示,胞漿及胞膜呈綠色熒光,表明培養(yǎng)的細(xì)胞表達(dá)特征性Ⅱ型膠原,細(xì)胞核被DAPI復(fù)染,呈藍(lán)色。見圖1。

    圖1 人KOA軟骨細(xì)胞形態(tài)觀察及鑒定(×200)

    2.2 靈仙新苷對(duì)軟骨細(xì)胞活力的影響

    與對(duì)照組比較,模型組細(xì)胞活力顯著降低(P<0.01);與模型組比較,C-AR組細(xì)胞活力顯著升高(P<0.05)。結(jié)果見表2。

    表2 各組軟骨細(xì)胞細(xì)胞活力比較(±s)

    表2 各組軟骨細(xì)胞細(xì)胞活力比較(±s)

    注:與對(duì)照組比較,**P<0.01;與模型組比較,#P<0.05

    組別對(duì)照組模型組C-AR組n 4 4 4細(xì)胞活力1.60±0.07 0.97±0.04**1.31±0.04#

    2.3 靈仙新苷對(duì)軟骨細(xì)胞白細(xì)胞介素-6和白細(xì)胞介素-8表達(dá)的影響

    與對(duì)照組比較,模型組細(xì)胞IL-6和IL-8含量顯著增加(P<0.01);與模型組比較,C-AR組細(xì)胞IL-6和IL-8含量顯著減少(P<0.05)。結(jié)果見表3。

    表3 各組軟骨細(xì)胞IL-6和IL-8含量比較(±s,pg/mL)

    表3 各組軟骨細(xì)胞IL-6和IL-8含量比較(±s,pg/mL)

    注:與對(duì)照組比較,**P<0.01;與模型組比較,#P<0.05

    組別對(duì)照組模型組C-AR組n4 4 4 IL-6 23.87±4.62 44.01±3.68**33.25±6.10#IL-8 57.79±5.48 97.10±6.26**83.92±3.68#

    2.4 靈仙新苷對(duì)軟骨細(xì)胞活性氧含量及凋亡率的影響

    與對(duì)照組比較,模型組細(xì)胞ROS含量顯著增加,凋亡率顯著升高(P<0.01);與模型組比較,C-AR組細(xì)胞ROS含量顯著減少,凋亡率顯著降低(P<0.01)。結(jié)果見圖2、圖3、表4。

    圖2 各組軟骨細(xì)胞ROS檢測(cè)

    圖3 各組軟骨細(xì)胞凋亡率檢測(cè)

    表4 各組軟骨細(xì)胞ROS含量和凋亡率比較(±s)

    表4 各組軟骨細(xì)胞ROS含量和凋亡率比較(±s)

    注:與對(duì)照組比較,**P<0.01;與模型組比較,##P<0.01

    組別對(duì)照組模型組C-AR組n4 4 4 ROS熒光強(qiáng)度1 292±241.7 6 197±154.3**3 410±135.7##凋亡率/%4.19±0.26 25.86±0.59**17.35±0.97##

    2.5 靈仙新苷對(duì)軟骨細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響

    與對(duì)照組比較,模型組細(xì)胞Bax和Caspase-3蛋白表達(dá)顯著升高(P<0.01),Bcl-2蛋白表達(dá)顯著降低(P<0.01);與模型組比較,C-AR組細(xì)胞Bax和Caspase-3蛋白表達(dá)顯著降低(P<0.01),Bcl-2蛋白表達(dá)顯著升高(P<0.01)。結(jié)果見圖4、表5。

    表5 各組軟骨細(xì)胞Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白表達(dá)比較(±s)

    表5 各組軟骨細(xì)胞Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白表達(dá)比較(±s)

    注:與對(duì)照組比較,**P<0.01;與模型組比較,##P<0.01

    組別對(duì)照組模型組C-AR組n 4 4 4 Bax/β-actin 0.24±0.03 0.57±0.03**0.32±0.03##Bcl-2/β-actin 0.55±0.03 0.15±0.03**0.30±0.03##Caspase-3/β-actin 0.19±0.02 0.54±0.06**0.32±0.05##

    圖4 各組軟骨細(xì)胞Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白免疫印跡

    2.6 靈仙新苷對(duì)軟骨細(xì)胞凋亡相關(guān)mRNA表達(dá)的影響

    與對(duì)照組比較,模型組細(xì)胞Bax和Caspase-3 mRNA表達(dá)顯著升高(P<0.01),Bcl-2 mRNA表達(dá)顯著降低(P<0.01);與模型組比較,C-AR組細(xì)胞Bax和Caspase3 mRNA表達(dá)顯著降低(P<0.01),Bcl-2 mRNA表達(dá)顯著升高(P<0.01)。結(jié)果見表6。

    表6 各組軟骨細(xì)胞Bax、Bcl-2、Caspase-3 mRNA表達(dá)比較(±s)

    表6 各組軟骨細(xì)胞Bax、Bcl-2、Caspase-3 mRNA表達(dá)比較(±s)

    注:與對(duì)照組比較,**P<0.01;與模型組比較,##P<0.01

    組別對(duì)照組模型組C-AR組n 4 4 4 Bax 1.00±0.06 5.33±0.29**2.84±0.35##Bcl-2 1.00±0.06 0.26±0.01**0.55±0.06##Caspase-3 1.00±0.07 3.49±0.21**2.12±0.21##

    2.7 靈仙新苷對(duì)軟骨細(xì)胞自噬相關(guān)蛋白表達(dá)的影響

    Western blot結(jié)果顯示,與對(duì)照組比較,模型組細(xì)胞Beclin1蛋白表達(dá)和LC3BⅡ/LC3BⅠ比值顯著降低(P<0.01);與模型組比較,C-AR組細(xì)胞Beclin1蛋白表達(dá)和LC3BⅡ/LC3BⅠ比值顯著升高(P<0.01)。免疫熒光結(jié)果顯示,與對(duì)照組比較,模型組細(xì)胞LC3B表達(dá)顯著降低(P<0.01);與模型組比較,C-AR組細(xì)胞LC3B蛋白表達(dá)顯著升高(P<0.01)。結(jié)果見圖5、圖6、表7。

    圖5 各組軟骨細(xì)胞Beclin1、LC3B蛋白免疫印跡

    圖6 各組軟骨細(xì)胞LC3B陽(yáng)性表達(dá)(免疫熒光染色,標(biāo)尺=25 μm)

    表7 各組軟骨細(xì)胞Beclin1、LC3B蛋白表達(dá)比較(±s)

    表7 各組軟骨細(xì)胞Beclin1、LC3B蛋白表達(dá)比較(±s)

    注:與對(duì)照組比較,**P<0.01,與模型組比較,##P<0.01

    組別對(duì)照組模型組C-AR組Beclin1/β-actin 0.43±0.04 0.24±0.03**0.38±0.02##LC3BⅡ/LC3BⅠ2.22±0.06 0.42±0.03**0.93±0.04##LC3B熒光強(qiáng)度67 452±2 138 44 023±2 371**57 225±1 563##

    3 討論

    威靈仙是治療風(fēng)濕痹痛的要藥。現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn),威靈仙提取物及有效成分在治療KOA方面均能發(fā)揮積極作用[18]。馬勇等[19]運(yùn)用威靈仙提取物對(duì)體外培養(yǎng)的兔膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞進(jìn)行干預(yù),發(fā)現(xiàn)其能促進(jìn)軟骨細(xì)胞增殖及轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1 mRNA的表達(dá),對(duì)關(guān)節(jié)軟骨產(chǎn)生保護(hù)作用,從而延緩KOA發(fā)展。此外,威靈仙提取物還能促進(jìn)軟骨細(xì)胞ECM合成,維持軟骨細(xì)胞表型穩(wěn)定[20]。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn),在獨(dú)活寄生湯基礎(chǔ)上加入威靈仙、黃芩等藥物能降低KOA兔血清及關(guān)節(jié)液炎癥因子表達(dá),緩解軟骨退變[21]。體外實(shí)驗(yàn)?zāi)芡ㄟ^調(diào)控Wnt/β-catenin信號(hào)通路抑制膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞凋亡[22]。

    C-AR作為威靈仙中一種三萜皂苷類成分,在抗炎、抗氧化應(yīng)激方面具有一定作用。炎癥反應(yīng)貫穿KOA發(fā)病過程,促炎因子如IL-1β、腫瘤壞死因子(TNF)-α等在KOA發(fā)病過程中大量釋放,導(dǎo)致產(chǎn)生疼痛。軟骨細(xì)胞異常的氧化應(yīng)激狀態(tài)也會(huì)誘發(fā)炎癥因子產(chǎn)生[10],從而進(jìn)一步加速軟骨細(xì)胞凋亡。研究發(fā)現(xiàn),C-AR能降低TNF-α刺激下MH7A細(xì)胞IL-6和IL-8分泌,減少基質(zhì)金屬蛋白酶產(chǎn)生,有效拮抗TNF-α誘導(dǎo)的炎癥和細(xì)胞毒性[17]。本研究發(fā)現(xiàn),IL-1β刺激導(dǎo)致軟骨細(xì)胞活力降低,細(xì)胞IL-6和IL-8含量明顯增加,氧化應(yīng)激水平也隨之升高,細(xì)胞凋亡率明顯升高。C-AR處理后,軟骨細(xì)胞活力升高,細(xì)胞IL-6和IL-8含量明顯減少,氧化應(yīng)激水平和細(xì)胞凋亡率明顯降低,促凋亡Bax、Caspase-3基因和蛋白表達(dá)下調(diào),抗凋亡Bcl-2基因和蛋白表達(dá)上調(diào)。提示C-AR可減輕體外培養(yǎng)的KOA軟骨細(xì)胞炎癥和氧化應(yīng)激反應(yīng),抑制細(xì)胞凋亡。

    自噬可恢復(fù)受損軟骨細(xì)胞功能,減少軟骨細(xì)胞凋亡,延緩KOA發(fā)生發(fā)展[23]。課題組前期研究發(fā)現(xiàn),牛膝多糖能促進(jìn)軟骨細(xì)胞自噬相關(guān)蛋白Beclin1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表達(dá),抑制凋亡相關(guān)蛋白Fadd、Caspase-3/9表達(dá),降低軟骨細(xì)胞凋亡率[24-25],提示可通過促進(jìn)軟骨細(xì)胞自噬抑制軟骨細(xì)胞凋亡。本研究結(jié)果顯示,C-AR組軟骨細(xì)胞自噬相關(guān)蛋白Beclin1、LC3B表達(dá)及LC3BⅡ/LC3BⅠ比值升高,表明C-AR能促進(jìn)自噬發(fā)生。結(jié)合細(xì)胞凋亡率可見,軟骨細(xì)胞凋亡與自噬水平呈負(fù)相關(guān),隨著自噬增強(qiáng),凋亡進(jìn)一步減弱。

    綜上所述,C-AR可減輕體外培養(yǎng)的KOA軟骨細(xì)胞炎癥和氧化應(yīng)激反應(yīng),抑制軟骨細(xì)胞凋亡,其機(jī)制可能與激活自噬有關(guān)。本研究初步觀察了C-AR對(duì)KOA軟骨細(xì)胞自噬和凋亡的影響,對(duì)其通過哪些途徑激活自噬、抑制細(xì)胞凋亡及量效關(guān)系尚未明確,今后我們將繼續(xù)深入研究,為防治KOA提供更多依據(jù)。

    猜你喜歡
    威靈仙貨號(hào)軟骨
    威靈仙炮制歷史沿革研究
    威靈仙治手足不遂
    保健與生活(2022年4期)2022-02-13 10:43:05
    鞋品牌新品爆單“故事匯”
    鞍區(qū)軟骨黏液纖維瘤1例
    作者更正致歉說明
    原發(fā)肺軟骨瘤1例報(bào)告并文獻(xiàn)復(fù)習(xí)
    威靈仙與鐵絲威靈仙的鑒別
    市售威靈仙飲片的質(zhì)量分析
    大學(xué)生網(wǎng)球裝備推薦
    骨科英漢詞匯
    五月伊人婷婷丁香| 日韩av不卡免费在线播放| 看十八女毛片水多多多| 国产高清不卡午夜福利| 日韩精品有码人妻一区| 91在线精品国自产拍蜜月| 在线免费观看不下载黄p国产| 亚洲人成网站高清观看| 高清午夜精品一区二区三区| 日韩制服骚丝袜av| 一区二区三区四区激情视频| 欧美极品一区二区三区四区| 一个人看视频在线观看www免费| 亚洲精品视频女| 国产亚洲91精品色在线| 五月天丁香电影| 欧美高清性xxxxhd video| 18+在线观看网站| 日本免费在线观看一区| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 欧美3d第一页| 国产一级毛片在线| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| av国产免费在线观看| 亚洲欧美精品专区久久| 久久久亚洲精品成人影院| 人体艺术视频欧美日本| 两个人的视频大全免费| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 欧美日韩视频精品一区| 亚洲av成人精品一二三区| 啦啦啦在线观看免费高清www| 丰满乱子伦码专区| 亚洲国产精品一区三区| 免费观看无遮挡的男女| 一本久久精品| 秋霞在线观看毛片| av线在线观看网站| av专区在线播放| kizo精华| 国产精品国产av在线观看| 97超碰精品成人国产| 国产又色又爽无遮挡免| 亚洲在久久综合| 国产有黄有色有爽视频| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 少妇人妻 视频| xxx大片免费视频| 中国国产av一级| 嫩草影院入口| 在现免费观看毛片| 干丝袜人妻中文字幕| 老女人水多毛片| 久久av网站| 欧美xxⅹ黑人| 国产精品人妻久久久影院| 97热精品久久久久久| 中文字幕免费在线视频6| 99国产精品免费福利视频| 国产亚洲5aaaaa淫片| 国产亚洲最大av| 水蜜桃什么品种好| 国产午夜精品一二区理论片| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 亚洲国产欧美人成| 51国产日韩欧美| 在线观看免费视频网站a站| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 日日撸夜夜添| 日韩成人av中文字幕在线观看| 毛片女人毛片| 久久精品国产亚洲av天美| 国产一区有黄有色的免费视频| 最近中文字幕2019免费版| 日韩精品有码人妻一区| 最近手机中文字幕大全| 亚洲av成人精品一区久久| 国产av码专区亚洲av| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 美女cb高潮喷水在线观看| 国产日韩欧美在线精品| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 激情五月婷婷亚洲| 干丝袜人妻中文字幕| 亚洲最大成人中文| 亚洲欧洲国产日韩| 我要看黄色一级片免费的| 国产成人a区在线观看| 亚洲欧美精品自产自拍| 精品久久久久久久久av| 天堂俺去俺来也www色官网| 国产毛片在线视频| 视频区图区小说| 嫩草影院入口| 少妇精品久久久久久久| 国产永久视频网站| 色视频在线一区二区三区| 欧美日韩亚洲高清精品| av.在线天堂| 青春草国产在线视频| tube8黄色片| 成人毛片60女人毛片免费| 亚洲欧洲日产国产| 嘟嘟电影网在线观看| 看免费成人av毛片| 又大又黄又爽视频免费| 亚洲va在线va天堂va国产| 日本欧美视频一区| 永久免费av网站大全| 国产精品欧美亚洲77777| 国产人妻一区二区三区在| 国产久久久一区二区三区| 熟妇人妻不卡中文字幕| 免费人成在线观看视频色| 亚洲国产日韩一区二区| 亚洲精品亚洲一区二区| 97超视频在线观看视频| 日日摸夜夜添夜夜爱| 久久人人爽人人片av| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 亚洲激情五月婷婷啪啪| xxx大片免费视频| 男男h啪啪无遮挡| 建设人人有责人人尽责人人享有的 | 中文精品一卡2卡3卡4更新| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 国产在视频线精品| 亚洲美女视频黄频| 97超视频在线观看视频| 中国三级夫妇交换| 视频中文字幕在线观看| av国产精品久久久久影院| 青春草亚洲视频在线观看| 精华霜和精华液先用哪个| 国产成人91sexporn| 国产亚洲欧美精品永久| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 在线 av 中文字幕| 黄色视频在线播放观看不卡| 国产一区有黄有色的免费视频| 欧美变态另类bdsm刘玥| 亚洲电影在线观看av| 久久久久久伊人网av| 最近手机中文字幕大全| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 大话2 男鬼变身卡| 久久人人爽人人爽人人片va| 国产片特级美女逼逼视频| 国产伦精品一区二区三区四那| 国产精品久久久久久久电影| 亚洲自偷自拍三级| 五月天丁香电影| 免费看不卡的av| 久久国产精品大桥未久av | 中文在线观看免费www的网站| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 欧美激情极品国产一区二区三区 | 日本-黄色视频高清免费观看| 欧美三级亚洲精品| 三级国产精品欧美在线观看| 亚洲国产av新网站| 国国产精品蜜臀av免费| 一本一本综合久久| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 99国产精品免费福利视频| 蜜臀久久99精品久久宅男| 丰满乱子伦码专区| 国产精品久久久久久精品古装| .国产精品久久| 日本wwww免费看| 免费观看性生交大片5| 又爽又黄a免费视频| 国产精品久久久久久久电影| 日韩强制内射视频| 少妇熟女欧美另类| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 免费观看av网站的网址| 高清av免费在线| 韩国高清视频一区二区三区| 久久久久国产网址| 国产男人的电影天堂91| 久久久久国产精品人妻一区二区| 网址你懂的国产日韩在线| 久久精品国产自在天天线| 一级毛片我不卡| av在线app专区| 日韩欧美 国产精品| 有码 亚洲区| 18禁动态无遮挡网站| 女人久久www免费人成看片| 美女主播在线视频| av女优亚洲男人天堂| 亚洲不卡免费看| 久久久久久久久久久免费av| 亚洲伊人久久精品综合| 免费观看无遮挡的男女| 51国产日韩欧美| 91精品一卡2卡3卡4卡| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 激情 狠狠 欧美| 色视频www国产| 国产精品不卡视频一区二区| 亚洲美女黄色视频免费看| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 少妇熟女欧美另类| 久久精品国产亚洲av涩爱| 最近最新中文字幕免费大全7| 一本久久精品| 另类亚洲欧美激情| 日本与韩国留学比较| 在线观看国产h片| 99热6这里只有精品| 黄色日韩在线| 97超视频在线观看视频| 国产成人aa在线观看| 国产一区有黄有色的免费视频| 国产高清不卡午夜福利| 日韩中文字幕视频在线看片 | 日韩国内少妇激情av| 亚洲精品日本国产第一区| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 免费观看a级毛片全部| videossex国产| 亚洲三级黄色毛片| 少妇人妻久久综合中文| 国产精品99久久99久久久不卡 | 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 日本欧美视频一区| 国产黄色免费在线视频| 男人和女人高潮做爰伦理| 成人美女网站在线观看视频| 亚洲一区二区三区欧美精品| 一本色道久久久久久精品综合| 春色校园在线视频观看| 97精品久久久久久久久久精品| 国产91av在线免费观看| 少妇的逼水好多| 性高湖久久久久久久久免费观看| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 七月丁香在线播放| 午夜老司机福利剧场| 晚上一个人看的免费电影| 一级爰片在线观看| 中文字幕免费在线视频6| 国产成人a区在线观看| h日本视频在线播放| 一级毛片 在线播放| 亚洲精品久久午夜乱码| 国产黄色视频一区二区在线观看| 伊人久久国产一区二区| 男女啪啪激烈高潮av片| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 国产成人午夜福利电影在线观看| 深夜a级毛片| 国产亚洲最大av| 春色校园在线视频观看| 妹子高潮喷水视频| 免费黄频网站在线观看国产| 看免费成人av毛片| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 哪个播放器可以免费观看大片| 日本vs欧美在线观看视频 | 干丝袜人妻中文字幕| 国产乱来视频区| 99热这里只有是精品50| 中国美白少妇内射xxxbb| 亚洲成人av在线免费| 亚洲av中文av极速乱| 欧美日韩精品成人综合77777| 久久久国产一区二区| 嫩草影院新地址| 亚洲精品中文字幕在线视频 | 高清欧美精品videossex| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 免费av不卡在线播放| 国产精品无大码| 免费av中文字幕在线| 日本黄色片子视频| 成人美女网站在线观看视频| 国产成人精品久久久久久| 婷婷色麻豆天堂久久| 亚洲伊人久久精品综合| 国产高清国产精品国产三级 | 亚洲丝袜综合中文字幕| 最近2019中文字幕mv第一页| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 久久久精品94久久精品| 亚洲成人手机| av在线老鸭窝| 大话2 男鬼变身卡| 18禁在线播放成人免费| 晚上一个人看的免费电影| 女人久久www免费人成看片| 免费高清在线观看视频在线观看| 2018国产大陆天天弄谢| 97精品久久久久久久久久精品| 亚洲在久久综合| 亚洲精品视频女| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 亚洲va在线va天堂va国产| 少妇精品久久久久久久| 日韩成人伦理影院| 国产av码专区亚洲av| 3wmmmm亚洲av在线观看| 五月玫瑰六月丁香| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 秋霞在线观看毛片| 韩国高清视频一区二区三区| 午夜免费男女啪啪视频观看| 日本-黄色视频高清免费观看| 男女下面进入的视频免费午夜| 丰满乱子伦码专区| av国产久精品久网站免费入址| 极品教师在线视频| 精品少妇黑人巨大在线播放| 欧美日韩在线观看h| 国精品久久久久久国模美| 欧美丝袜亚洲另类| 免费人成在线观看视频色| 99精国产麻豆久久婷婷| 日韩制服骚丝袜av| 色婷婷久久久亚洲欧美| 97在线人人人人妻| 黄色配什么色好看| 3wmmmm亚洲av在线观看| 国产黄色视频一区二区在线观看| 黄色日韩在线| 能在线免费看毛片的网站| 女性生殖器流出的白浆| 99九九线精品视频在线观看视频| 久久毛片免费看一区二区三区| 在线观看一区二区三区| 如何舔出高潮| 久久热精品热| 久久精品久久精品一区二区三区| 一级二级三级毛片免费看| 精品一区二区三卡| 少妇丰满av| 如何舔出高潮| 亚洲av日韩在线播放| 国产精品久久久久成人av| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 婷婷色综合大香蕉| 亚洲精品第二区| 三级国产精品欧美在线观看| 美女内射精品一级片tv| 少妇高潮的动态图| 黄色怎么调成土黄色| 精品一区二区三卡| 亚洲国产av新网站| 99久久人妻综合| 在线观看一区二区三区| 免费看av在线观看网站| 亚洲精品日韩av片在线观看| 少妇 在线观看| 成年美女黄网站色视频大全免费 | 丰满人妻一区二区三区视频av| av不卡在线播放| 久久久久久久亚洲中文字幕| 一个人看视频在线观看www免费| 国产成人免费观看mmmm| 99久久综合免费| 日韩电影二区| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 国产成人精品婷婷| 久久久色成人| 亚洲国产精品999| 久久国产乱子免费精品| 国产视频首页在线观看| 少妇 在线观看| 亚洲性久久影院| 国产爱豆传媒在线观看| 免费av中文字幕在线| 成年免费大片在线观看| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 久久国产乱子免费精品| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 晚上一个人看的免费电影| 国产精品一区二区在线观看99| 久久久久久伊人网av| 午夜福利视频精品| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 最近中文字幕2019免费版| 精品一区二区免费观看| 久久久久国产精品人妻一区二区| 一级爰片在线观看| 国产乱人视频| 天天躁日日操中文字幕| 新久久久久国产一级毛片| 亚洲欧美精品自产自拍| 国产综合精华液| 中文字幕亚洲精品专区| 成人亚洲精品一区在线观看 | 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| tube8黄色片| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 精品久久久久久久久av| 日韩 亚洲 欧美在线| 夫妻性生交免费视频一级片| 国产精品一及| 秋霞在线观看毛片| 国产成人一区二区在线| 男女免费视频国产| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 欧美zozozo另类| 国产精品一二三区在线看| 欧美变态另类bdsm刘玥| 男女啪啪激烈高潮av片| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 色婷婷久久久亚洲欧美| 最近最新中文字幕大全电影3| 欧美人与善性xxx| 国产黄频视频在线观看| 国模一区二区三区四区视频| 久久久a久久爽久久v久久| 午夜福利网站1000一区二区三区| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 亚洲人与动物交配视频| 午夜视频国产福利| 一区二区av电影网| 精品少妇久久久久久888优播| 中文在线观看免费www的网站| 一个人看的www免费观看视频| 七月丁香在线播放| 男人爽女人下面视频在线观看| 久久精品国产亚洲av涩爱| 国产黄色免费在线视频| 天美传媒精品一区二区| 欧美 日韩 精品 国产| 高清视频免费观看一区二区| 亚洲国产日韩一区二区| 亚洲熟女精品中文字幕| 一区二区三区四区激情视频| 亚洲精品国产av蜜桃| 日韩人妻高清精品专区| 97在线视频观看| 性色av一级| 大香蕉久久网| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 爱豆传媒免费全集在线观看| 国产精品国产三级国产专区5o| 三级经典国产精品| 综合色丁香网| 亚洲国产日韩一区二区| 午夜激情久久久久久久| 男女下面进入的视频免费午夜| 51国产日韩欧美| 欧美精品一区二区免费开放| 性色av一级| 国内揄拍国产精品人妻在线| 成年av动漫网址| 各种免费的搞黄视频| 精品亚洲成国产av| 男女国产视频网站| 美女中出高潮动态图| 亚洲国产精品一区三区| 亚洲无线观看免费| 一区二区三区免费毛片| www.av在线官网国产| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 老司机影院毛片| 亚洲国产色片| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 99久久综合免费| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| av一本久久久久| 久久久精品免费免费高清| 亚洲av福利一区| 欧美日本视频| 成人特级av手机在线观看| 在线观看一区二区三区激情| 草草在线视频免费看| 亚洲三级黄色毛片| 久久99热这里只有精品18| 亚洲国产精品成人久久小说| 国产成人精品久久久久久| 美女中出高潮动态图| 国产精品女同一区二区软件| 一个人看的www免费观看视频| xxx大片免费视频| 成年av动漫网址| 91aial.com中文字幕在线观看| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 青春草国产在线视频| 国产日韩欧美亚洲二区| 制服丝袜香蕉在线| 国产免费视频播放在线视频| 亚洲丝袜综合中文字幕| 边亲边吃奶的免费视频| 欧美日韩国产mv在线观看视频 | 久久国产精品大桥未久av | 99视频精品全部免费 在线| 美女福利国产在线 | 欧美精品亚洲一区二区| 插逼视频在线观看| 深爱激情五月婷婷| 欧美高清性xxxxhd video| 人体艺术视频欧美日本| 91久久精品国产一区二区三区| 超碰97精品在线观看| 亚洲av二区三区四区| 久久人人爽人人爽人人片va| videos熟女内射| av在线观看视频网站免费| 毛片女人毛片| 看免费成人av毛片| 97在线视频观看| 建设人人有责人人尽责人人享有的 | 在线免费观看不下载黄p国产| 99国产精品免费福利视频| 欧美性感艳星| 日日啪夜夜爽| 国产精品福利在线免费观看| 下体分泌物呈黄色| 欧美激情极品国产一区二区三区 | 少妇的逼水好多| av在线蜜桃| 嫩草影院入口| 看免费成人av毛片| 综合色丁香网| 人妻 亚洲 视频| 亚洲成人中文字幕在线播放| 欧美日韩亚洲高清精品| 精品人妻偷拍中文字幕| 大话2 男鬼变身卡| 97在线人人人人妻| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 久久6这里有精品| www.av在线官网国产| 高清av免费在线| 久久精品国产a三级三级三级| 久久人妻熟女aⅴ| 久久久久人妻精品一区果冻| 国产成人a区在线观看| 日本av免费视频播放| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 国产一级毛片在线| 日本黄大片高清| 青春草亚洲视频在线观看| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 精品国产乱码久久久久久小说| 中文字幕精品免费在线观看视频 | 欧美+日韩+精品| 各种免费的搞黄视频| 国产视频内射| 老司机影院毛片| av在线播放精品| tube8黄色片| 精品人妻偷拍中文字幕| 精品少妇久久久久久888优播| 国产伦精品一区二区三区四那| 免费av中文字幕在线| 久久久a久久爽久久v久久| 少妇的逼好多水| 久久久欧美国产精品| 午夜日本视频在线| 国产在视频线精品| 99re6热这里在线精品视频| 在线观看美女被高潮喷水网站| 欧美变态另类bdsm刘玥| 少妇人妻久久综合中文| 国产精品伦人一区二区| 久久久久久九九精品二区国产| 91精品伊人久久大香线蕉| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频 | 老女人水多毛片| 色婷婷av一区二区三区视频| 老女人水多毛片| 婷婷色综合大香蕉| 国产免费视频播放在线视频| videossex国产| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 久久99热这里只有精品18| 在线免费十八禁| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 色婷婷久久久亚洲欧美| 黄色日韩在线| 一区二区三区四区激情视频| a级一级毛片免费在线观看| 少妇丰满av| 久久精品国产a三级三级三级| 国产 一区精品| 超碰97精品在线观看| 国产高潮美女av| 久久青草综合色| 少妇的逼水好多| 国产亚洲最大av| 国产日韩欧美亚洲二区| 蜜臀久久99精品久久宅男| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜 | 中文字幕精品免费在线观看视频 | 蜜桃在线观看..| 成人影院久久| 51国产日韩欧美| 精品人妻视频免费看| 香蕉精品网在线| 91aial.com中文字幕在线观看| 中文字幕亚洲精品专区| 国产黄色免费在线视频| 国产淫片久久久久久久久| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 91久久精品国产一区二区成人| 精品久久久噜噜| av一本久久久久| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 高清视频免费观看一区二区| 精华霜和精华液先用哪个| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 深夜a级毛片|