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    葉面噴施不同濃度腐胺復(fù)配劑對(duì)黃瓜幼苗高溫抗性的影響

    2023-01-31 03:13:46劉宏運(yùn)林威柱郭世榮
    中國(guó)蔬菜 2023年1期
    關(guān)鍵詞:配劑腐胺抗性

    劉宏運(yùn) 林威柱 王 健 孫 錦 束 勝 郭世榮 王 玉

    (南京農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝學(xué)院,江蘇南京 210095)

    腐胺(Put)廣泛存在于植物體內(nèi),是一種含氮化合物,在植物生長(zhǎng)發(fā)育和逆境脅迫響應(yīng)中具有重要的作用。短期高溫處理會(huì)增加植物葉片中Put 的含量,外源噴施Put 能夠通過(guò)調(diào)節(jié)NO 合成提高植物耐熱性(Kolupaev et al.,2021)。此外,在短期高溫脅迫前葉面噴施Put 可提高甜瓜的果實(shí)品質(zhì)(María et al.,2020)。褪黑素(MT)是一種生物調(diào)節(jié)劑,可以抑制ROS 產(chǎn)生,保護(hù)質(zhì)膜結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定,提高黃瓜幼苗對(duì)高溫環(huán)境的適應(yīng)性(徐向東 等,2010;Imran et al.,2021)。高溫脅迫誘導(dǎo)MT 積累,外源葉面噴施100 μmol·L-1MT 可有效提高番茄的耐熱性(Jahan et al.,2019,2021)。脯氨酸(Pro)是一種有效的滲透調(diào)節(jié)物質(zhì),通過(guò)保護(hù)生物大分子的功能結(jié)構(gòu),為生理生化反應(yīng)提供充足的自由水和活性物質(zhì),從而提高植物對(duì)脅迫的適應(yīng)性。外源施用Pro 能夠顯著提高植物抗氧化酶活性,減少高溫造成的氧化脅迫,增強(qiáng)植物的光合作用能力(蘇貝貝 等,2015)。高溫脅迫下,葉面噴施3 mmol·L-1的Pro 明顯促進(jìn)了黃瓜幼苗的生長(zhǎng),降低細(xì)胞滲透勢(shì),緩解了滲透脅迫對(duì)植株生長(zhǎng)的抑制作用(劉書(shū)仁 等,2010)。黃腐酸鉀(MFA)是一種黃腐酸肥料,具有分子量小、易于生物吸收利用、生理活性強(qiáng)、易溶于水等特點(diǎn);MFA 不僅可以調(diào)節(jié)作物生長(zhǎng),還可以補(bǔ)充作物生長(zhǎng)發(fā)育所需的鉀元素(van Oosten et al.,2017)。MFA 也能夠提高植物中多種抗氧化酶的活性,降低電解質(zhì)滲透率和MDA 含量,提高根系活力,促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)吸收和植物生長(zhǎng),從而增強(qiáng)植株耐熱性(林梅桂,2013;沈偉 等,2022)。

    近年來(lái),單獨(dú)施用Put、MT、Pro 和MFA 緩解逆境脅迫的研究報(bào)道較多,但對(duì)其復(fù)合效果的研究較少。本試驗(yàn)以Put 為主,配合施用MT、Pro 和MFA,研究不同濃度組合對(duì)黃瓜幼苗高溫抗性、光合速率和抗氧化酶活性的影響,以期篩選出緩解高溫脅迫最優(yōu)的配方,為指導(dǎo)設(shè)施黃瓜耐熱栽培提供理論依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

    供試黃瓜品種為津春4 號(hào),購(gòu)自天津科潤(rùn)農(nóng)業(yè)科技股份有限公司。試驗(yàn)于2020 年10—12 月在南京農(nóng)業(yè)大學(xué)人工氣候室進(jìn)行。選擇飽滿、整齊一致的種子,溫湯浸種后于28 ℃催芽,發(fā)芽后播于15 孔穴盤,育苗基質(zhì)購(gòu)自江蘇興農(nóng)基質(zhì)科技有限公司。育苗在人工氣候室內(nèi)進(jìn)行,白天溫度控制在25~28 ℃,夜間溫度為18~20 ℃,14 h/10 h(晝/夜),相對(duì)濕度保持在75%~80%。試驗(yàn)處理采用L9(34)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)(表1),在第2 片真葉完全展開(kāi)時(shí),各處理選擇長(zhǎng)勢(shì)一致的幼苗15 株,葉面噴施不同濃度的Put 復(fù)配劑后放置于42 ℃光照培養(yǎng)箱中進(jìn)行高溫處理,以葉片噴施等量蒸餾水為對(duì)照,3 次重復(fù)。高溫處理48 h 后隨機(jī)選擇3 株取樣,測(cè)定各項(xiàng)生理指標(biāo)。

    表1 腐胺復(fù)配劑濃度篩選處理

    1.2 測(cè)定指標(biāo)及方法

    1.2.1 光合及葉綠素?zé)晒鈪?shù)測(cè)定 高溫處理結(jié)束后,將黃瓜幼苗移至25 ℃人工氣候室恢復(fù)1 h,選擇生長(zhǎng)點(diǎn)往下完全展開(kāi)的第2 片真葉,采用LI-6400 便攜式光合儀(美國(guó)LI-COR 公司)測(cè)定凈光合速率(Pn)、胞間CO2濃度(Ci)、氣孔導(dǎo)度(Gs)和蒸騰速率(Tr)等光合參數(shù)。測(cè)量時(shí)儀器的參數(shù)設(shè)定如下:光照強(qiáng)度為800 μmol·m-2·s-1,葉室內(nèi)溫度控制在25 ℃,葉室內(nèi)CO2濃度為380 μmol ·mol-1,相對(duì)濕度為60%~70%。

    高溫處理48 h、葉片暗適應(yīng)30 min 后,采用PAM-2100 便攜式調(diào)制熒光儀(德國(guó)Walz 公司)測(cè)定生長(zhǎng)點(diǎn)往下完全展開(kāi)的第2 片真葉的PSⅡ最大光化學(xué)效率(Fv/Fm)和PSⅡ?qū)嶋H光化學(xué)效率〔Y(Ⅱ)〕。

    1.2.2 生理生化指標(biāo)測(cè)定 葉綠素含量采用乙醇浸提法測(cè)定(Wellburn,1994),相對(duì)電導(dǎo)率采用型號(hào)為DDS-11C 的電導(dǎo)率儀進(jìn)行測(cè)定(Hong et al.,2003),MDA 含量采用硫代巴比妥酸法測(cè)定(Hodges et al.,1999),可溶性蛋白含量采用考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定(Bradford,1976),H2O2含量采用紫外分光光度法測(cè)定(Velikova et al.,2000),超氧化物歧化酶(SOD)活性采用氮藍(lán)四唑(NBT)光還原法測(cè)定(Dhindsa et al.,1981),過(guò)氧化物酶(POD)活性采用愈創(chuàng)木酚法測(cè)定(Kochba et al.,1977),過(guò)氧化氫酶(CAT)活性采用紫外分光光度法測(cè)定(Dhindsa et al.,1981)。

    1.3 數(shù)據(jù)處理

    利用模糊數(shù)學(xué)中隸屬函數(shù)的方法,綜合評(píng)價(jià)不同處理的高溫抗性。挑選測(cè)定指標(biāo)中對(duì)植物高溫抗性正相關(guān)的指標(biāo),并計(jì)算其指標(biāo)的隸屬函數(shù)值,計(jì)算公式為:

    X(mz)=(X-Xmin)/(Xmax-Xmin)

    結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)調(diào)查我們發(fā)現(xiàn)在發(fā)生CRE感染的科室中,急診科、ICU和手術(shù)科室是感染的“重災(zāi)區(qū)”,這可能是由于以上科室的患者大多病情危重,機(jī)體免疫力較差,大多會(huì)接受抗生素治療,與醫(yī)護(hù)人員接觸更加密切等,因而更容易發(fā)生感染。多數(shù)學(xué)者都將既往接受過(guò)抗生素治療,老齡患者,機(jī)械通氣或其他有創(chuàng)支持治療,慢性疾病,曾接受過(guò)移植或進(jìn)行免疫抑制相關(guān)治療等列為危險(xiǎn)因素。還有研究者提出感染CRE為患者死亡的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,而這也促使我們?cè)谄綍r(shí)的工作中將更加關(guān)注具有相關(guān)危險(xiǎn)因素的患者。

    挑選測(cè)定指標(biāo)中對(duì)植物高溫抗性負(fù)相關(guān)的指標(biāo),計(jì)算其指標(biāo)的反隸屬函數(shù)值,計(jì)算公式為:

    X(mf)=1-(X-Xmin)/(Xmax-Xmin)

    式中,X為該指標(biāo)的測(cè)量值,Xmax為測(cè)量指標(biāo)的最大值,Xmin為測(cè)量指標(biāo)的最小值。

    將指標(biāo)的隸屬函數(shù)值和反隸屬函數(shù)值進(jìn)行累計(jì)相加,求平均值,平均值越大,則該處理的綜合高溫抗性越強(qiáng),此配方效果越優(yōu)。

    使用直觀分析法對(duì)正交試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析(董如何 等,2004)。試驗(yàn)數(shù)據(jù)使用Excel 2017 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)整理并作圖,采用SPSS 18.0 軟件Duncan法進(jìn)行多重比較(P<0.05),使用Pearson 分析各指標(biāo)相關(guān)性。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 腐胺復(fù)配劑對(duì)高溫脅迫下黃瓜幼苗表型及高溫抗性指標(biāo)的影響

    如圖1 所示,黃瓜幼苗對(duì)高溫脅迫比較敏感,高溫脅迫下對(duì)照幼苗葉片發(fā)黃、失水、萎蔫;T3、T4 和T6 處理效果較差,雖有一定緩解高溫脅迫的作用,但并不明顯;T7、T8 和T9 處理幼苗僅葉緣失水卷曲,植株形態(tài)較為正常,受高溫影響較小。

    圖1 高溫脅迫下腐胺復(fù)配劑處理48 h 的黃瓜幼苗表型

    從表2 可以看出,與對(duì)照相比,T1、T2、T5、T7、T8 和T9 處理顯著抑制了高溫誘導(dǎo)下黃瓜幼苗葉片相對(duì)電導(dǎo)率升高,其中T8 處理的效果最優(yōu),降低了57.50%。外源噴施Put 復(fù)配劑能夠顯著降低H2O2含量,其中T9 處理的H2O2含量下降最多,比對(duì)照降低了40.64%。MDA 含量與相對(duì)電導(dǎo)率的變化趨勢(shì)相同,T8 處理的效果最優(yōu),比對(duì)照降低了76.00%。此外,Put 復(fù)配劑噴施處理在不同程度上增加了幼苗葉片可溶性蛋白含量,其中T9 處理可溶性蛋白含量最高,比對(duì)照增加了126.92%。

    表2 腐胺復(fù)配劑對(duì)高溫脅迫下黃瓜幼苗高溫抗性指標(biāo)的影響 (FW)

    2.2 腐胺復(fù)配劑對(duì)高溫脅迫下黃瓜幼苗葉綠素含量及葉綠素?zé)晒鈪?shù)的影響

    如表3 所示,T7、T8 和T9 處理的黃瓜幼苗葉片葉綠素含量均顯著高于對(duì)照,分別比對(duì)照提高了21.90%、32.12% 和35.77%;T1、T7、T8 和T9處理的Fv/Fm 顯著高于對(duì)照,其中T9 處理最高,比對(duì)照增加了29.82%;T9 處理的Y(Ⅱ)亦最高,比對(duì)照增加了227.59%。

    表3 腐胺復(fù)配劑對(duì)高溫脅迫下黃瓜幼苗葉片葉綠素含量及葉綠素?zé)晒鈪?shù)的影響

    2.3 腐胺復(fù)配劑對(duì)高溫脅迫下黃瓜幼苗光合作用的影響

    如表4 所示,除T1、T4 和T5 處理外,其他處理的黃瓜幼苗葉片Pn 均顯著高于對(duì)照,其中T9處理最高,比對(duì)照提高了160.71%;此外,T2、T3、T6、T7 和T8 處理的Pn 分別比對(duì)照提高了81.92%、55.21%、65.03%、45.97% 和151.47%。T1、T2、T7、T8 和T9 處理的Ci 顯著高于對(duì)照,分別比對(duì)照提高了27.96%、93.45%、84.00%、63.48%和60.83%。與對(duì)照相比,外源噴施Put 復(fù)配劑能夠顯著提高高溫脅迫下黃瓜幼苗葉片的Tr,其中T9 處理Tr 最高,比對(duì)照提高了600.00%,效果最顯著;T1~T8 處理分別比對(duì)照提高了126.73%、164.36%、181.19%、121.78%、82.18%、169.31%、300.99%和111.88%。除T4 處理外,其他Put 復(fù)配劑處理的Gs 均顯著高于對(duì)照,其中T9處理Gs 最大,比對(duì)照提高了457.69%。

    表4 腐胺復(fù)配劑對(duì)高溫脅迫下黃瓜幼苗葉片光合參數(shù)的影響

    2.4 腐胺復(fù)配劑對(duì)高溫脅迫下黃瓜幼苗抗氧化酶活性的影響

    由表5 可知,T9 處理的黃瓜幼苗葉片抗氧化酶活性均高于其他處理,且均顯著高于對(duì)照,SOD、POD、CAT 活性分別比對(duì)照提高了29.32%、31.66%、52.16%。此外,T1、T2、T7 和T8 處理的SOD 活性也顯著高于對(duì)照,分別比對(duì)照提高了19.96%、20.37%、18.65% 和20.29%;T8 處理的POD 活性顯著高于對(duì)照,比對(duì)照提高了29.14%;T1、T2、T5、T7 和T8 處理的CAT 活性也顯著高于對(duì)照,分別比對(duì)照提高了33.84%、19.42%、12.77%、32.67%和38.44%。

    表5 腐胺復(fù)配劑對(duì)高溫脅迫下黃瓜幼苗抗氧化酶活性的影響(FW)

    2.5 腐胺復(fù)配劑處理下黃瓜幼苗各指標(biāo)的相關(guān)性分析

    將Put 復(fù)配劑處理下黃瓜幼苗的各項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行相關(guān)性分析。結(jié)果表明(圖2),各數(shù)據(jù)可分為兩組,Pn、Gs、Ci、Tr、Fv/Fm、Y(Ⅱ)、可溶性蛋白含量、SOD 活性、POD 活性和CAT 活性兩兩之間均成正相關(guān)關(guān)系,而與H2O2含量、MDA 含量、相對(duì)電導(dǎo)率均成負(fù)相關(guān)關(guān)系。Pn 與Gs、Fv/Fm、Y(Ⅱ)、SOD 活性和CAT 活性呈顯著正相關(guān)關(guān)系。H2O2含量、MDA 含量和相對(duì)電導(dǎo)率與3 種抗氧化酶活性呈顯著負(fù)相關(guān)關(guān)系。表明,Put 復(fù)配劑可能通過(guò)提高抗氧化酶活性清除H2O2,同時(shí)提高光合速率,進(jìn)而提高黃瓜幼苗的高溫抗性。

    圖2 腐胺復(fù)配劑處理下黃瓜幼苗各指標(biāo)的相關(guān)關(guān)系

    2.6 腐胺復(fù)配劑處理下黃瓜幼苗高溫抗性綜合評(píng)價(jià)

    采用模糊隸屬函數(shù)法對(duì)不同濃度Put 復(fù)配劑處理的黃瓜幼苗葉片葉綠素含量、相對(duì)電導(dǎo)率、MDA 含量、H2O2含量、可溶性蛋白含量、SOD 活性、POD 活性和CAT 活性等8 項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行高溫抗性隸屬函數(shù)值計(jì)算,通過(guò)隸屬函數(shù)平均值進(jìn)行噴施效果的優(yōu)劣排名。結(jié)果表明(表6),T9 處理的隸屬函數(shù)平均值最高,為0.974,其次為T8 處理。表明,T9 處理黃瓜幼苗的高溫抗性最強(qiáng),即8 mmol·L-1Put 配合施用0.3 g·L-1MFA、1.5 mmol·L-1Pro和50 μmol·L-1MT 緩解高溫脅迫對(duì)黃瓜幼苗傷害的效果最好。

    表6 腐胺復(fù)配劑對(duì)高溫脅迫下黃瓜幼苗高溫抗性的影響

    2.7 正交試驗(yàn)結(jié)果分析

    采用直觀分析法對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析,結(jié)果表明(表7),影響黃瓜幼苗高溫抗性因素的主次順序?yàn)椋篋>B>C>A,即MT 的濃度對(duì)黃瓜幼苗高溫抗性的影響最大;比較各因素K1、K2、K3 大小,篩選出最優(yōu)的配方為A2B1C1D3。

    表7 正交試驗(yàn)結(jié)果分析

    3 討論與結(jié)論

    高溫脅迫會(huì)破壞植物光合作用系統(tǒng),導(dǎo)致光合效率下降,也會(huì)破壞抗氧化系統(tǒng),提高ROS 和MDA 含量,影響植物正常的生理生化反應(yīng)(孫勝楠 等,2017)。更重要的是,高溫脅迫導(dǎo)致果實(shí)畸形和脫落,嚴(yán)重影響黃瓜的產(chǎn)量和品質(zhì)(薛思嘉等,2017)。

    外源Put 通過(guò)調(diào)節(jié)H2O2和NO 合成提高植物抗氧化系統(tǒng)的功能,進(jìn)而增強(qiáng)植物的高溫脅迫抗性(Kolupaev et al.,2021;Jahan et al.,2022)。MT在植物耐熱方面有著重要的作用,外源施用MT 有效提高了甘藍(lán)、黃瓜、甜瓜和番茄等作物的耐熱性(徐向東 等,2010;曾慶棟 等,2017;Jahan et al.,2019;周永海 等,2020)。Pro 作為重要的滲透調(diào)節(jié)物質(zhì),通過(guò)提高植物的抗氧化和滲透調(diào)節(jié)能力增強(qiáng)高溫脅迫抗性(曹毅 等,2011)。MFA 可以促進(jìn)植物對(duì)K+的利用,提高營(yíng)養(yǎng)吸收能力,促進(jìn)植物生長(zhǎng),在提高辣椒植株的耐熱性方面也有一定的作用(林梅桂,2013)。受到逆境脅迫的植物,體內(nèi)ROS 增多,細(xì)胞膜遭到破壞,導(dǎo)致膜透性增大,從而使細(xì)胞內(nèi)的電解質(zhì)外滲,同時(shí)生成大量的MDA,而MDA 會(huì)進(jìn)一步加劇細(xì)胞生物膜的氧化反應(yīng),造成生物膜結(jié)構(gòu)破壞(徐松華,2021)。因此,植物細(xì)胞內(nèi)MDA 含量可以間接代表其受氧化脅迫的程度。本試驗(yàn)結(jié)果表明,合適配比的Put復(fù)配劑處理能夠顯著降低黃瓜葉片的相對(duì)電導(dǎo)率,減少H2O2和MDA 含量,提高植物體內(nèi)的可溶性蛋白含量。向玥如等(2014)研究表明,逆境脅迫下外源多胺能夠清除植物體內(nèi)自由基和ROS,提高保護(hù)酶活性,降低膜脂過(guò)氧化程度。本試驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)外源噴施合適配比的Put 復(fù)配劑后,黃瓜幼苗葉片中抗氧化酶的活性可得到不同程度的增強(qiáng)。因此,合適配比的Put 復(fù)配劑能夠減少植物質(zhì)膜的損傷,維持滲透平衡,減少氧化脅迫,提高植株抗性。

    Put 復(fù)配劑處理可以緩解高溫脅迫對(duì)植物光合作用的抑制。當(dāng)植物遇到非生物脅迫時(shí),可以通過(guò)調(diào)節(jié)葉片氣孔的分布、大小和數(shù)量來(lái)適應(yīng)逆境,提高光合作用能力,抵抗外部環(huán)境脅迫(Casson &Gray,2008)。高溫脅迫下植物Gs 減小伴隨著Ci的降低,光合速率的降低是由于氣孔限制引起的,外源Put 復(fù)配劑的使用可通過(guò)解除氣孔因素的限制改善高溫對(duì)光合作用的影響。在高溫脅迫下,植物的光合系統(tǒng)會(huì)受到一定程度的損傷,因此葉綠素?zé)晒鈪?shù)也會(huì)受到相應(yīng)的影響(崔慶梅 等,2021)。高溫脅迫也會(huì)影響葉綠素合成相關(guān)酶的活性,降低光合色素的含量。本試驗(yàn)結(jié)果表明,與對(duì)照相比,合適配比的外源Put 復(fù)配劑處理可以提高黃瓜幼苗葉片F(xiàn)v/Fm 和Y(Ⅱ),表明其能夠提高PSⅡ反應(yīng)中心內(nèi)的光能轉(zhuǎn)換效率,這可能與葉綠素含量的增加有關(guān)。

    本試驗(yàn)中,隸屬函數(shù)綜合評(píng)價(jià)各處理的高溫抗性排序?yàn)門9>T8>T1>T7>T2>T5>T6>T3>CK>T4。T9 處理的綜合排名最高,此配方可以在高溫脅迫下有效提高黃瓜幼苗光合作用,提高Fv/Fm 和Y(Ⅱ),降低相對(duì)電導(dǎo)率、H2O2和MDA 含量,提高可溶性蛋白含量及抗氧化酶SOD、POD、CAT 活性,有效緩解高溫脅迫引起的傷害。正交試驗(yàn)結(jié)果分析表明,4 mmol·L-1Put、0.3 g·L-1MFA、1.0 mmol·L-1Pro 和50 μmol·L-1MT 組成的腐胺復(fù)配制劑為最優(yōu)的配方。

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