烯蟲乙酯等農(nóng)藥的測定氣相色譜-串聯(lián)質譜法

唐俗，張文龍，袁智泉，陳毅哲，卓程梆，杜業(yè)剛*

1.深圳市計量質量檢測研究院（深圳 518100）；2.安捷倫科技（中國）有限公司（北京 100102）

烯蟲乙酯、戊硝酚、異丙噻菌胺、聯(lián)苯吡菌胺這4種為新型農(nóng)藥，隨著新的GB 2763—2021《食品安全國家標準食品中農(nóng)藥最大殘留限量》的發(fā)布實施，這些農(nóng)藥有限量值，但無檢測方法[1]。

烯蟲乙酯（hydroprene）是美國Zoecon公司開發(fā)的一種有效的具有保幼激素活性的昆蟲生長調節(jié)劑[2]，該藥劑對煙芽夜蛾、埃及伊蚊、大蠟螟、黃粉甲、家蠅、蟑螂等均有良好的防治效果[3]。戊硝酚（dinosam）是一種新型殺蟲劑、除草劑。異丙噻菌胺（isofetamid）是由日本石原產(chǎn)業(yè)開發(fā)用于防治各種作物灰霉病的酰胺類殺菌劑，屬琥珀酸脫氫抑制劑，為廣譜性殺菌劑，可有效防治由子囊菌和半知菌引起的病害[4]。聯(lián)苯吡菌胺（bixafen）是由拜耳作物科學公司開發(fā)的含吡唑酰胺結構的琥珀酸脫氫抑制劑（SDHI）類殺菌劑，可有效防治由子囊菌、擔子菌和半知菌引起的病害，具有廣譜性和內(nèi)吸性，可用于葉面噴霧，是近年來農(nóng)藥應用市場中一類重要殺菌劑[5-6]。

趙樹春等[7]開發(fā)一種聯(lián)苯吡菌胺原藥含量測定的高效液相色譜分析方法。異丙噻菌胺和聯(lián)苯吡菌胺在龔雷等[8]QuEChERS-UPLC-MS/MS測定果蔬中18種琥珀酸脫氫酶抑制劑類殺菌劑有相關報道。烯蟲乙酯、戊硝酚未見相關檢測報道。

試驗旨在建立一種氣相色譜-串聯(lián)質譜法檢測果蔬中烯蟲乙酯、戊硝酚、異丙噻菌胺和聯(lián)苯吡菌胺的方法。通過優(yōu)化前處理凈化方法以及儀器采集方法如碰撞離子對選取、碰撞能量優(yōu)化，最大程度排除基質的雜質干擾，以期為更準確地對果蔬中烯蟲乙酯、戊硝酚、異丙噻菌胺和聯(lián)苯吡菌胺進行定量分析及對污染水平評估提供技術支持。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

氣相色譜-串聯(lián)質譜聯(lián)用儀（美國，Agilent）；KS4000i空氣控溫搖床（德國，IKA）；渦旋振蕩儀（德國，IKA）；高速離心機（美國，Sigma）；氮吹儀（瑞典，Biotage）；分析天平（德國，SARTORIUS）。

乙二胺-N-丙基硅烷化硅膠（PSA，粒徑40～60 μm）；十八烷基硅烷鍵合硅膠（C18，粒徑40～60 μm）；石墨化炭黑（GCB，粒徑40～120 μm）；乙腈（色譜純）；丙酮（色譜純）；烯蟲乙酯（hydroprene）、戊硝酚（dinosam）、異丙噻菌胺（isofetamid）和聯(lián)苯吡菌胺（bixafen）標準品（純度＞90%）。

1.2 儀器條件

1.2.1 色譜條件

色譜柱，Agilent Technologies HP-5MS UI（30 m×0.25 mm×0.25 μm）石英毛細管柱；進樣體積1.0 μL；進樣口溫度280 ℃；載氣采用高純氦氣，純度≥99.999%；流速采用恒流模式，1.0 mL/min；程序升溫見表1。

表1 氣相色譜升溫程序

1.2.2 質譜條件

離子源采用EI源；電離能量70 eV；掃描方式采用多反應監(jiān)測模式（multiple reaction monitoring，MRM）；碰撞氣采用高純氮；離子源溫度300 ℃；傳輸線溫度280 ℃；溶劑延遲4.0 min，各化合物的離子對信息見表2。

表2 MRM監(jiān)測模式下的參數(shù)

1.3 測定步驟

1.3.1 標準溶液配制

稱取100 mg（精確至0.1 mg）烯蟲乙酯、戊硝酚、異丙噻菌胺和聯(lián)苯吡菌胺標準品于100 mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，搖勻，配制1 000 mg/L標準儲備液，于-18 ℃冰箱中儲存。將標準儲備液配制成1 000 μg/L的標準溶液，備用。

1.3.2 樣品提取

黃瓜、圣女果、菜心、橙子、胡蘿卜、火龍果樣品處理：用粉碎機粉碎后，稱取10 g（精確至0.01 g），置于50.0 mL離心管中，加入10.0 mL乙腈，在搖床振蕩提取30 min，在9 500 r/min條件下，離心5 min，取上4.00 mL清液，待凈化。

1.3.3 樣品凈化

稱取0.2 g PSA于10.0 mL離心管中，加入上述待凈化液，渦旋振蕩30 s后，在9 500 r/min條件下，離心5 min，取上清2.00 mL液于40 ℃水浴中氮吹濃縮至近干，殘留物加入1 mL丙酮復溶，渦旋混勻1 min，經(jīng)0.22 μm微孔濾膜過濾后，供GC-MS/MS檢測。

1.3.4 測定

試驗方法中氣相色譜-串聯(lián)質譜采用外標-標準曲線法定量測定。為減少基質對定量測定的影響，標準溶液應采用基質混合標準工作溶液繪制標準曲線；并且保證所測樣品中農(nóng)藥及相關化學品的響應值均在儀器線性范圍內(nèi)。為烯蟲乙酯、戊硝酚、異丙噻菌胺和聯(lián)苯吡菌胺樣品加標MRM色譜圖如圖1～圖4所示。

圖1 質量濃度0.05 mg/L的烯蟲乙酯MRM模式色譜圖

圖3 質量濃度0.05 mg/L的異丙噻菌胺MRM模式色譜圖

圖4 質量濃度0.05 mg/L的聯(lián)苯吡菌胺MRM模式色譜

2 結果與討論

2.1 樣品的選擇

4種物質中烯蟲乙酯、戊硝酚在GB 2763—2021果蔬臨時限量相對比較廣，所以選取葉菜類、瓜類、根莖類蔬菜作為代表，選取漿果類、柑橘類、熱帶和亞熱帶類水果作為代表。

2.2 分散固相萃取條件的優(yōu)化

由于食品基質復雜、形態(tài)多樣，為降低基質效應的影響，采用固相萃取對目標樣品進行凈化。試驗采用GCB粉、C18粉、PSA粉對樣品提取液進行凈化，選擇果蔬類黃瓜作為基質，黃瓜中添加烯蟲乙酯、戊硝酚、異丙噻菌胺和聯(lián)苯吡菌胺質量分數(shù)均為0.05 mg/kg，考察GCB粉、C18粉、PSA粉不同固相萃取劑的凈化效果。GCB粉回收率只有56.0%～67.3%，C18粉回收率在81.0%～90.0%，PSA粉回收率在93.0%～101%；因此，前處理過程采用PSA粉凈化。試驗結果見圖2。

圖5 不同固相萃取劑的試驗回收率

2.3 線性范圍及檢出限

將烯蟲乙酯、戊硝酚、異丙噻菌胺和聯(lián)苯吡菌胺標準儲備液配制成0.01，0.02，0.05，0.10，0.20和0.50 mg/L系列質量濃度的溶液，按上述儀器條件檢測，以質量濃度為橫坐標，以峰面積為縱坐標，繪制標準曲線。結果表明，樣品峰面積與質量濃度呈良好線性關系，相關系數(shù)r均大于0.995；線性范圍為0.01～0.5 mg/L。采用空白基質中添加烯蟲乙酯、戊硝酚、異丙噻菌胺和聯(lián)苯吡菌胺的方式，測定添加質量分數(shù)0.01 mg/kg時，4種物質信噪比均大于10。

2.4 方法驗證

在黃瓜、圣女果、菜心、橙子、胡蘿卜、火龍果樣品中，分別添加標準溶液，平行測定6次，計算平均回收率和相對標準偏差（SRSD），結果見表3。在黃瓜中添加低、中、高三水平加標溶液，結果見表4。結果顯示，烯蟲乙酯、戊硝酚、異丙噻菌胺和聯(lián)苯吡菌胺回收率在80.8%～106%，相對標準偏差均小于5%，均能滿足果蔬農(nóng)藥殘留回收率的要求。

表3 方法回收率和精密度

表4 黃瓜中低、中、高三水平加標回收

3 結論

試驗建立氣相色譜-串聯(lián)質譜法測定果蔬中烯蟲乙酯、戊硝酚、異丙噻菌胺和聯(lián)苯吡菌胺的分析方法，該方法重現(xiàn)性好、準確度高、簡便、快速，檢出限低，適用于果蔬中烯蟲乙酯、戊硝酚、異丙噻菌胺和聯(lián)苯吡菌胺等農(nóng)藥殘留檢測，對這4種農(nóng)藥在果蔬中的風險評估有一定應用價值。該試驗為相關檢測標準的制定及產(chǎn)品安全生產(chǎn)和市場監(jiān)管提供重要檢測依據(jù)。