烏藥葉化學(xué)成分的研究

孫崇魯， 俞松林， 李士敏， 袁莉霞， 王芙蓉， 彭 昕

(1.浙江醫(yī)藥高等專(zhuān)科學(xué)校，浙江 寧波 315100；2.浙江大學(xué)寧波研究院，浙江 寧波 315100)

烏藥Linderaaggregate(Sims) Kosterm系樟科山胡椒屬植物，又名矮樟、香桂樟、銅錢(qián)柴，主產(chǎn)于浙江、湖南、廣西、安徽、廣東等地，以浙江省天臺(tái)縣較為著名，稱(chēng)天臺(tái)烏藥，2018年入選新“浙八味”[1]。烏藥性溫味辛，具有行氣止痛、溫腎散寒之功效[2]?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明烏藥不僅具有抗炎鎮(zhèn)痛、抗氧化、抗腫瘤等廣泛的藥理活性，還對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)以及消化系統(tǒng)等方面有顯著的調(diào)節(jié)作用[3]。但烏藥的入藥部位生長(zhǎng)緩慢，需要8～10年才能達(dá)到商品藥材的要求，在漫長(zhǎng)的生長(zhǎng)周期中，其莖葉部分均被丟棄，資源利用率極低。烏藥葉在民間常用來(lái)治療急性蜂窩組織炎、臀癰、胃炎以及風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等。浙江民間也常用烏藥葉入茶飲，用于降脂、護(hù)肝等保健功效。也有研究表明烏藥葉提取物具有一定的降脂作用[4]。

為了解該植物的藥用物質(zhì)基礎(chǔ)，發(fā)掘?yàn)跛幦~的新用途和功能，本實(shí)驗(yàn)對(duì)烏藥葉70%乙醇提取物進(jìn)行研究，從中分離得到13個(gè)化合物，包括5個(gè)倍半萜內(nèi)酯、1個(gè)木脂素、7個(gè)黃酮類(lèi)，其中化合物2～6、12～13為首次從烏藥葉中分離得到。

1 材料

AM-400核磁共振儀(德國(guó)布魯克公司)；Waters ZQ2000液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(美國(guó)沃特斯公司)；AB204-N電子天平(瑞士梅特勒托利多公司)；RE-52B旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器有限公司)；SHB-Ⅲ型循環(huán)水式多用真空泵(鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司)；DHG-9070A型電熱鼓風(fēng)干燥箱(寧波江南儀器廠)；數(shù)顯恒溫水浴鍋(常州朗越儀器制造有限公司)。

柱色譜用硅膠(青島海洋化工廠)；薄層色譜硅膠板GF254(煙臺(tái)化學(xué)工業(yè)研究所)；柱色譜用聚酰胺(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)；柱色譜用C18反相填料(天津博納艾杰爾科技有限公司)；凝膠柱色譜材料Sephadex LH-20(美國(guó)Pharmacia公司)。氘代二甲亞砜購(gòu)于百靈威科技有限公司，其他化學(xué)試劑均為市售的分析純。

烏藥葉采自于浙江省臺(tái)州市天臺(tái)縣，經(jīng)浙江大學(xué)新藥開(kāi)發(fā)研究中心彭昕教授鑒定為烏藥葉。

2 提取和分離

取干燥的烏藥葉2.5 kg，粉碎后用70%乙醇加熱回流提取3次，每次3 h，合并提取液，減壓濃縮得浸膏746 g。浸膏加入適量的水混懸，分別用乙酸乙酯和正丁醇進(jìn)行萃取，得到乙酸乙酯萃取部分162 g，正丁醇萃取部分233 g。

乙酸乙酯萃取部分(162 g)上硅膠柱色譜，用石油醚-乙酸乙酯 (50∶1～0∶1) 系統(tǒng)進(jìn)行梯度洗脫，用薄層色譜法跟蹤檢測(cè)，紫外燈下監(jiān)視(254 nm或365 nm)，5%香草醛-濃硫酸溶液顯色，合并相同組分，得到4個(gè)主要餾分Fr.1～Fr.4。Fr.1和Fr.2繼續(xù)經(jīng)過(guò)硅膠柱色譜分離，以石油醚-乙酸乙酯(30∶1～1∶1)進(jìn)行梯度洗脫，用薄層色譜法跟蹤檢測(cè)，分離得到化合物1(257 mg)、2(54 mg)。Fr.3經(jīng)過(guò)中壓制備色譜(甲醇-水，10%～80%梯度洗脫，檢測(cè)波長(zhǎng)為220 nm)分離得化合物4(37 mg)、6(104 mg)。Fr.4 經(jīng)過(guò)中壓制備色譜(甲醇-水，30%～90%梯度洗脫)分離得到化合物3(62 mg)、5(77 mg)。正丁醇萃取部分(233 g)經(jīng)常壓硅膠柱色譜分離，使用乙酸乙酯-甲醇 (25∶1～1∶1) 梯度洗脫，用薄層色譜法跟蹤檢測(cè)，得到3個(gè)主要餾分Fr.1～Fr.3。Fr.1經(jīng)Sephadex LH-20凝膠柱色譜(二氯甲烷-甲醇，1∶1) 以及硅膠柱色譜分離純化得到化合物7(87 mg)、8(95 mg)、9(171 mg)、10(113 mg)。Fr.2和Fr.3分別經(jīng)聚酰胺柱色譜分離，用甲醇-水(6∶5)洗脫得到3個(gè)餾分Fr.4～6。 Fr.4～Fr.6利用中壓制備色譜(甲醇-水，5%～70%梯度洗脫，檢測(cè)波長(zhǎng)為254 nm)分別得到化合物11(107 mg)、12(48 mg)、13(73 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色針狀結(jié)晶，ESI-MSm/z: 246.3[M+H]+。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ: 7.30 (1H, s, 8-OH), 5.56 (1H, d,J=9.6 Hz, H-1), 5.47 (1H, m, H-2), 4.96 (1H, s, H-15α), 4.79 (1H, s, H-15β), 2.80 (1H, m, H-3α), 2.75 (1H, m, H-3β), 2.49 (1H, dd,J=13.2, 1.2 Hz, H-6α), 2.26 (1H, d,J=13.2 Hz, H-9β), 2.08 (1H, dd,J=13.2, 3.2 Hz, H-6β), 1.72 (3H, s, H-13), 1.46 (1H, d,J=13.2 Hz, H-9α), 0.99 (3H, s, H-14);13C-NMR (100 MHz, DMSO-d6)δ: 172.0 (C-12), 161.3 (C-7), 145.9 (C-4), 138.1 (C-1), 123.1 (C-11), 121.4 (C-2), 107.8 (C-15), 104.0 (C-8), 49.9 (C-5), 48.3 (C-9), 37.8 (C-10), 34.8 (C-3), 24.0 (C-6), 20.7 (C-14), 8.4 (C-13)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[5]報(bào)道的數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定為hydroxylinderstrenolide。

化合物2：黃色油狀液體，ESI-MSm/z: 249.3[M+H]+。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ: 5.62 (1H, d,J=12.4 Hz, H-6), 5.32 (1H, m, H-8), 5.01 (1H, s, H-15α), 4.72 (1H, s, H-15β), 2.85 (1H, d,J=12.4 Hz, H-5), 2.19 (3H, s, -OCH3), 2.07 (1H, d,J=3.2 Hz, H-9α), 1.95 (1H, m, H-3), 1.82 (1H, d,J=5.6 Hz, H-9β), 1.75 (3H, s, H-13), 1.42 (1H, m, H-1), 1.03 (1H, m, H-2α), 0.89 (1H, m, H-2β), 0.76 (3H, s, H-14);13C-NMR (100 MHz, DMSO-d6)δ: 173.7 (-OCO-), 170.7 (C-12), 159.6 (C-7), 148.2 (C-4), 120.4 (C-11), 108.8 (C-15), 79.6 (C-8), 69.0 (C-6), 66.0 (C-5), 43.0 (C-9), 38.6 (C-10), 27.1 (C-1), 23.8 (C-3), 20.9 (-OCH3), 18.3 (C-14), 16.5 (C-2), 8.8 (C-13)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6]報(bào)道的數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定為lindenanolide H。

化合物3：白色柱狀晶體，ESI-MSm/z: 249.3[M+H]+。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ: 5.59 (1H, d,J=10.4 Hz, H-6), 4.96 (1H, s, H-15α), 4.67 (1H, s, H-15β), 3.56 (1H, d,J=10.4 Hz, H-5), 2.73 (1H, d,J=14.4 Hz, H-9a), 2.40 (1H, d,J=14.8 Hz, H-9β), 2.04 (1H, m, H-3), 1.99 (3H, s, -OCH3), 1.84 (3H, s, H-13), 1.50 (1H, m, H-1), 0.87 (1H, m, H-2α), 0.71 (1H, m, H-2β), 0.40 (3H, s, H-14);13C-NMR (100 MHz, DMSO-d6)δ: 170.7 (-OCO-), 170.0 (C-12), 154.2 (C-7), 149.3 (C-4), 135.2 (C-8), 107.2 (C-15), 91.3 (C-11), 63.6 (C-6), 61.9 (C-5), 45.6 (C-9), 38.3 (C-10), 29.5 (C-1), 23.6 (C-3), 20.8 (-OCH3), 20.1 (C-14), 17.0 (C-2), 9.8 (C-13)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[7]報(bào)道的數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定為lindenanolide A。

化合物4：白色無(wú)定形粉末，ESI-MSm/z: 249.3[M+H]+。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ: 7.18 (1H, s, 8-OH), 4.84 (1H, s, H-15β), 4.62 (1H, s, H-15α), 2.62 (1H, dd,J=13.2, 3.2 Hz, H-6α), 2.43 (1H, dd,J=13.2, 1.6 Hz, H-3β), 2.37 (1H, m, H-3α), 2.26 (1H, d,J=13.6 Hz, H-9β), 1.97 (1H, dd,J=12.8, 7.2 Hz, H-2β), 1.82 (1H, m, H-5), 1.72 (3H, m, H-13), 1.70～1.53 (3H, m, H-1β, 6β, 9α), 1.25 (1H, m, H-1α), 1.03 (3H, s, H-14);13C-NMR (100 MHz, DMSO-d6)δ: 172.1 (C-12), 161.5 (C-7), 149.1 (C-4), 133.5 (C-1), 121.9 (C-11), 121.1 (C-2), 107.2 (C-15), 104.3 (C-8), 51.2 (C-5), 50.6 (C-9), 35.9 (C-10), 33.5 (C-3), 24.4 (C-6), 21.5 (C-14), 8.4 (C-13)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]報(bào)道的數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定為atractylenolide Ⅲ。

化合物5：白色無(wú)定形粉末，ESI-MSm/z: 249.3[M+H]+。1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6)δ: 7.18 (1H, S, 8-OH), 5.36 (1H, brs, H-3), 2.82 (1H, dd,J=13.2, 3.2 Hz, H-6α), 2.11 (1H, d,J=13.2 Hz, H-6β), 2.09 (1H, d,J=13.2 Hz, H-9α), 2.06 (1H, m, H-2α), 1.94 (1H, m, H-2β), 1.94 (1H, m, H-5), 1.72 (3H, s, H-13), 1.69 (3H, s, H-15), 1.38 (1H, m, H-1α), 1.33 (1H, d,J=13.2 Hz, H-9β), 1.27 (1H, m, H-1β), 0.93 (3H, s, H-14);13C-NMR (100 MHz, DMSO-d6)δ: 172.1 (C-12), 161.9 (C-7), 133.5 (C-4), 121.2 (C-3), 121.1 (C-11), 104.4 (C-8), 50.6 (C-9), 48.6 (C-5), 36.9 (C-1), 33.5 (C-10), 24.2 (C-6), 22.8 (C-2), 21.5 (C-15), 16.2 (C-14), 8.4 (C-13)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]報(bào)道的數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定為chlojaponilactone A。

化合物6：黃色粉末，ESI-MSm/z: 381.1[M+Na]+。1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6)δ: 6.88 (1H, dd,J=8.0, 1.2 Hz, H-6), 6.84 (1H, d,J=8.0, 1.2 Hz, H-2), 6.82 (1H, d,J=8.0 Hz, H-5), 6.69 (1H, s, H-2′), 6.68 (1H, s, H-6′), 6.00 (2H, d,J=1.6 Hz, -OCH2O-), 5.46 (1H, d,J=6.0 Hz, H-7), 5.06 (1H, s, 9-OH), 4.47 (1H, s, 9′-OH), 3.76 (3H, s, 3′-OCH3), 3.70 (2H, m, H-9), 3.59 (1H, m, H-8), 2.50 (2H, m, H-7′), 1.69 (2H, m, H-8′);13C-NMR (100 MHz, DMSO-d6)δ: 147.9(C-3), 147.2 (C-4′), 145.9 (C-4), 143.8 (C-3′), 136.4 (C-1), 135.7 (C-5′), 129.0 (C-1′), 119.5 (C-6), 117.0 (C-6′), 113.0 (C-2′), 108.6 (C-5), 106.5 (C-2), 101.5 (-OCH2O), 86.9 (C-7), 63.7 (C-9), 60.7 (C-9′), 56.2 (-OCH3), 54.2 (C-8), 35.1 (C-8′), 32.0 (C-7′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]報(bào)道的數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定為9,9′-dihydroxy-3,4-methylenedioxy-3′-methoxy[7-O-4′,8-5′] lignan。

化合物7：淡黃色粉末，ESI-MSm/z: 303.2[M+H]+。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ: 12.50 (1H, s, 5-OH), 10.81 (1H, s, 7-OH), 9.62 (1H, s, 4′-OH), 9.38 (1H, s, 3′-OH), 9.33 (1H, s, 3-OH), 7.68 (1H, d,J=2.0 Hz, H-2′), 7.55 (1H, dd,J=8.6, 2.0 Hz, H-6′), 6.89 (1H, d,J=8.8 Hz, H-5′), 6.42 (1H, d,J=2.0 Hz, H-8), 6.20 (1H, d,J=2.0 Hz, H-6);13C-NMR (100 MHz, DMSO-d6)δ: 176.3 (C-4), 164.3 (C-7), 161.2 (C-5), 156.6 (C-9), 148.1 (C-2), 147.2 (C-4′), 145.5 (C-3′), 136.2 (C-3), 122.4 (C-1′), 120.4 (C-6′), 116.1 (C-5′), 115.5 (C-2′), 103.5 (C-10), 98.6 (C-6), 93.8 (C-8)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]報(bào)道的數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定為槲皮素。

化合物8：淡黃色粉末，ESI-MSm/z: 287.0[M+H]+。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ: 12.50 (1H, s, 5-OH), 10.81 (1H, s, 7-OH), 10.13 (1H, s, 3′-OH), 9.41 (1H, s, 3-OH), 8.05 (2H, d,J=8.8 Hz, H-2′, 6′), 6.93 (2H, d,J=8.8 Hz, H-3′, 5′), 6.44 (1H, d,J=2.0 Hz, H-8), 6.19 (1H, d,J=2.0 Hz, H-6);13C-NMR (100 MHz, DMSO-d6)δ: 176.4 (C-4), 164.3 (C-7), 161.2 (C-4′), 159.6 (C-9), 156.6 (C-5), 147.3 (C-2), 136.1 (C-3), 130.0 (C-2′, 6′), 122.1 (C-1′), 115.9 (C-3′, 5′), 103.5 (C-10), 99.7 (C-6), 93.9 (C-8)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12]報(bào)道的數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定為山柰酚。

化合物9：黃色粉末，ESI-MSm/z: 435.1[M+H]+。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ: 12.62 (1H, s, 5-OH), 10.92 (1H, s, 7-OH), 9.73 (1H, s, 4′-OH), 9.34 (1H, s, 3′-OH), 7.57 (1H, d,J=2.4 Hz, H-2′), 7.55 (1H, dd,J=8.4, 2.0 Hz, H-6′), 6.85 (1H, d,J=8.4 Hz, H-5′), 6.41 (1H, d,J=2.0 Hz，H-8), 6.21 (1H, s, H-6), 5.35 (1H, d,J=7.6 Hz, H-1″);13C-NMR (100 MHz, DMSO-d6)δ: 177.8 (C-4), 164.7 (C-7), 161.7 (C-5), 156.7 (C-2), 156.7 (C-9), 149.1 (C-4′), 145.4 (C-3′), 133.6 (C-3), 121.9 (C-6′), 121.4 (C-1′), 116.6 (C-5′), 115.8 (C-2′), 104.3 (C-10), 102.2 (C-1″), 99.2 (C-6), 94.0 (C-8), 76.5 (C-3″), 74.0 (C-2″), 69.8 (C-4″), 66.5 (C-5″)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[13]報(bào)道的數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定為槲皮素-3-O-β-D-木糖苷。

化合物10：黃色粉末，ESI-MSm/z: 435.1[M+H]+。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ: 12.65 (1H, s, 5-OH), 10.92 (1H, s, 7-OH), 9.77 (1H, s, 4′-OH), 9.31 (1H, s, 3′-OH), 7.57 (1H, dd,J=8.4, 2.0 Hz, H-6′),7.49 (1H, d,J=2.0 Hz, H-2′), 6.86 (1H, d,J=8.4 Hz, H-5′), 6.42 (1H, d,J=1.6 Hz, H-8), 6.21 (1H, d,J=2.0 Hz, H-6), 5.59 (1H, s, H-1″);13C-NMR(100 MHz, DMSO-d6)δ: 178.2 (C-4), 164.7 (C-7), 161.7 (C-5), 157.4 (C-9), 156.8 (C-2), 148.9 (C-4′), 145.5 (C-3′), 133.8 (C-3), 122.2 (C-6′), 121.4 (C-1′), 116.0 (C-5′), 116.0 (C-2′), 108.3 (C-1″), 104.4 (C-10), 99.1 (C-6), 94.0 (C-8), 86.2 (C-4″), 82.6 (C-2″), 77.4 (C-3″), 61.0 (C-5″)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[14]報(bào)道的數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定為槲皮素-3-O-α-L-阿拉伯呋喃糖苷。

化合物11：黃色粉末，ESI-MSm/z: 433.3[M+H]+。1H-NMR (400 M Hz, DMSO-d6)δ:12.64 (1H, s, 5-OH), 10.91 (1H, s, 7-OH), 10.23 (1H, s, 3′-OH), 7.76 (2H, d,J=8.8 Hz, H-2′, 6′), 6.91 (2H, d,J=8.0 Hz, H-3′, 5′), 6.42 (1H, s, H-8), 6.22 (1H, s, H-6), 5.30 (1H, s, H-1″), 0.80 (3H, d,J=5.2 Hz, H-6″);13C-NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ: 178.2 (C-4), 164.7 (C-7), 161.7 (C-5), 160.4 (C-4′), 157.7 (C-9), 156.9 (C-2), 134.6 (C-3), 131.2 (C-2′, 6′), 121.0 (C-1′), 115.8 (C-3′, 5′), 104.6 (C-10), 102.2 (C-1″), 99.2 (C-6), 94.2 (C-8), 71.5 (C-4″), 71.1 (C-3″), 70.8 (C-2″), 70.5 (C-5″), 17.9 (C-6″)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[15]報(bào)道一致，故鑒定為山柰酚-3-O-α-L-鼠李糖苷。

化合物12黃色晶體，ESI-MSm/z: 579.2[M+H]+, 601.2[M+Na]+。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ: 12.54 (1H, s, 5-OH), 10.94 (1H, s, 7-OH), 10.23 (1H, s, 3′-OH), 7.79 (2H, d,J=8.8 Hz, H-2′, 6′), 6.94 (2H, d,J=8.8 Hz, H-3′, 4′), 6.43 (1H, s, H-8), 6.23 (1H, s, H-6), 5.49 (1H, s, H-1″), 5.07 (1H, t,J=10.0 Hz, H-4″), 4.22 (1H, dd,J=3.2, 1.6 Hz, H-2″), 4.02 (1H, dd,J=9.8, 3.2 Hz, H-3″), 0.86 (3H, d,J=6.4 Hz, H-6″); 4″-E-對(duì)香豆?；?10.03 (1H, s, 4?-OH), 7.65 (1H, d,J=16.0 Hz, H-7?), 7.58 (2H, d,J=8.8 Hz, H-2?, 6?), 6.79 (2H, d,J=8.8 Hz, H-3?, 4?), 6.39 (1H, d,J=16.0 Hz, H-8?);13C-NMR (100 MHz, DMSO-d6)δ: 178.3 (C-4), 163.9 (C-7), 162.1 (C-5), 159.8 (C-4′), 157.9(C-2), 156.8 (C-9), 134.1 (C-3), 131.0 (C-2′, 6′), 120.9(C-1′), 115.4 (C-3′, 5′), 104.6 (C-10), 101.1 (C-1″), 99.0 (C-6), 93.1(C-8), 73.1(C-4″), 70.3 (C-2″), 69.1 (C-3″), 67.9 (C-5″), 17.1 (C-6″); 4″-E-對(duì)香豆?；? 167.1 (C-9?), 160.2 (C-4?), 144.8 (C-7?), 130.1 (C-2?, 6?), 126.3 (C-1?), 114.8 (C-3?, 5?), 114.2(C-8?)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[16]報(bào)道基本一致，故鑒定為山柰酚-3-O-(4″-反式-對(duì)-香豆酰基)-α-L-鼠李糖苷。

化合物13：黃色粉末，ESI-MSm/z: 725.4[M+H]+。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ: 12.50 (1H, s, 5-OH), 10.97 (1H, s, 7-OH), 10.31 (1H, s, 3′-OH), 7.82 (2H, d,J=8.8 Hz, H-2′, 6′), 6.74 (2H, d,J=8.8 Hz, H-3′, 5′), 6.44 (1H, d,J=1.6 Hz, H-8), 6.23 (1H, d,J=1.6 Hz, H-6), 5.75 (1H, m, H-2″), 5.49 (1H, d,J=1.6 Hz, H-1″), 5.43 (1H, dd,J=9.6, 3.6 Hz, H-3″), 0.89 (3H, d,J=5.6 Hz, H-6″); 2″-E-對(duì)香豆?；? 7.51 (1H, d,J=16.0 Hz, H-7?), 7.47 (2H, d,J=8.4 Hz, H-2?, 6?), 6.78 (2H, d,J=8.4 Hz, H-3?, 5?), 6.29 (1H, d,J=16.0 Hz, H-8?); 4″-E-對(duì)香豆?；? 7.59 (1H, d,J=16.0 Hz, H-7″″), 7.57 (2H, d,J=8.4 Hz, H-2″″, 6″″), 6.95 (2H, d,J=8.4 Hz, H-3″″, 5″″), 6.47 (1H, d,J=16.0 Hz, H-8″″);13C-NMR (100 MHz, DMSO-d6)δ: 177.8 (C-4), 164.8 (C-7), 161.7 (C-5), 160.8 (C-4′), 158.1 (C-2), 157.0 (C-9), 133.9 (C-3), 131.1 (C-2′, 6′), 115.2 (C-3?, 5?), 120.6 (C-1′), 104.6 (C-10), 99.3 (C-1″), 98.7 (C-6), 94.3 (C-8), 73.0 (C-3″), 71.5 (C-5″), 70.0 (C-2″), 68.4 (C-4″), 17.5 (C-6″); 2″-4″-二-反式-對(duì)-香豆?；?165.5, 165.3 (C-9?, 9″″), 159.5 (C-4?, 4″″), 144.7 (C-7?, 7″″), 133.4, 133.3 (C-2?, 2″″), 130.1 (C-6?, 6″″), 125.8 (C-1?, 1″″), 116.0 (C-3?, 3″″), 115.2, 115.3 (C-8?, 8″″), 115.7 (C-5?, 5″″)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[17]報(bào)道基本一致，故鑒定為山柰酚-3-O-(2″-4″-二-反式-對(duì)-香豆?；?-α-L-鼠李糖苷。

4 討論

本實(shí)驗(yàn)從烏藥葉中分離得到13個(gè)化合物，包括5個(gè)倍半萜內(nèi)酯、1個(gè)木脂素和7個(gè)黃酮類(lèi)。由此可知，黃酮類(lèi)化合物和倍半萜內(nèi)酯為烏藥葉主要特征性化學(xué)成分結(jié)構(gòu)類(lèi)型。其中黃酮類(lèi)化合物的苷元為山柰酚和槲皮素，倍半萜內(nèi)酯的主要骨架結(jié)構(gòu)為釣樟烷型倍半萜和桉葉烷型倍半萜。

黃酮類(lèi)化合物具有豐富的生物活性，包括抗腫瘤、保肝、降血壓、抗炎殺菌、抑制血小板聚集、提高免疫力等作用[18]。倍半萜內(nèi)酯也有著豐富的生物活性，包括抗腫瘤、抗菌消炎、抗病毒、細(xì)胞毒、免疫抑制、昆蟲(chóng)激素、昆蟲(chóng)拒食等作用，也有一些具有神經(jīng)系統(tǒng)活性[19]。然而，目前對(duì)烏藥葉的研究主要集中在黃酮類(lèi)化合物的提取工藝及含量測(cè)定，對(duì)其藥效的研究也主要圍繞在總提取物上，而對(duì)烏藥葉中單體成分的生物活性及作用機(jī)制尚未見(jiàn)報(bào)道。本研究明確了烏藥葉中13種主要活性成分，可為其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究與臨床應(yīng)用考察提供參考。