雪白委陵菜化學(xué)成分的研究

高燕萍， 張亞梅， 劉 華

(江西中醫(yī)藥大學(xué)中藥資源與民族藥研究中心，江西 南昌 330000)

雪白委陵菜PotentillaniveaL.是薔薇科委陵菜屬植物，主要分布于山西、內(nèi)蒙古、新疆、吉林等地，生長于海拔2 500～3 200 m的地區(qū)，資源較為豐富，為藏藥“熱袞巴”主要來源品種之一。作為常用藏藥，“熱袞巴”可用于肝炎、髙血壓、月經(jīng)不調(diào)及關(guān)節(jié)炎等癥的治療。目前，從委陵菜屬植物分離鑒定的化學(xué)成分主要有黃酮類、單萜類、倍半萜類和三萜類，其中報道的三萜類有齊墩果烷型、烏蘇烷型、羽扇豆烷型以及A環(huán)為五元環(huán)的五環(huán)三萜、2, 3開環(huán)的烏蘇烷型三萜和骨架新穎的具有20, 28環(huán)氧片段的蒲公英烷型三萜類等[1-2]。但是，作為“熱袞巴”主要來源品種之一，有關(guān)雪白委陵菜化學(xué)成分的研究卻未見報道，其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)尚不明確?；诖耍緦嶒瀸ρ┌孜瓴?0%乙醇提取物進(jìn)行初步研究，從中分離得到12個化合物，所有化合物均為首次從該植物中分離得到。

1 材料

RY-2型熔點儀(天津分析儀器廠)；Vector 22紅外光譜儀、DRX-600 MHz型核磁共振儀(德國Bruker公司)；UV-2550紫外光譜儀、LC-2010AHT液相色譜儀器(日本島津公司)；MSD-Trap-XCT質(zhì)譜儀(美國安捷倫公司)；C605中壓制備液相色譜儀(瑞士Büchi公司)；硅膠色譜硅膠、柱層析硅膠(煙臺芝罘黃務(wù)硅膠開發(fā)試驗廠)；Sephadex LH-20 (美國Pharmacia公司)；反相硅膠C18(50 μm，日本富士公司)。提取用乙醇為工業(yè)試劑，其余化學(xué)試劑均為分析純；液相色譜用為色譜純。

雪白委陵菜藥材購自成都荷花池藥材市場，經(jīng)江西中醫(yī)藥大學(xué)鐘囯躍教授鑒定為薔薇科委陵菜屬植物雪白委陵菜PotentillaniveaL.的干燥全草。

2 提取與分離

雪白委陵菜藥材約10 kg，用80%乙醇冷浸提取3次，每次3 d，合并醇提液，減壓濃縮得浸膏約896 g。將浸膏加水混懸，然后依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇進(jìn)行萃取，得到石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水部位。乙酸乙酯部位約280 g經(jīng)硅膠柱層析，以石油醚-乙酸乙酯(100∶0～1∶1)梯度洗脫，各流分經(jīng)薄層色譜檢識、合并，得到10個組分Fr. 1～Fr. 10。Fr. 2(24.1 g)經(jīng)ODS反相柱層析分離，甲醇-水(30∶70～100∶0)梯度洗脫、Sephadex LH-20繼續(xù)純化，采用二氯甲烷-甲醇(1∶1)洗脫和制備薄層色譜(氯仿-甲醇=30∶1)分離純化得化合物1(11.5 mg)、2(16.1 mg)、12(8.3 mg)。Fr. 3(23.5 g)經(jīng)ODS反相中壓柱色譜，甲醇-水(20∶80～100∶0)梯度洗脫、Sephadex LH-20進(jìn)行分離，采用二氯甲烷-甲醇(1∶1)洗脫，然后用半制備HPLC甲醇-水(70∶30)進(jìn)行純化，得化合物3(18.2 mg)、5(9.5 mg)、8(11.0 mg)。Fr. 4(39.8 g)經(jīng)過ODS反相中壓柱色譜，甲醇-水(30∶70～100∶0)梯度洗脫、Sephadex LH-20分離，采用甲醇洗脫，再用半制備HPLC甲醇-水(45∶55)進(jìn)行純化得化合物4(8.3 mg)、6(11.2 mg)。Fr. 8(58.6 g)經(jīng)ODS反相中壓柱色譜，甲醇-水(30∶70～100∶0)梯度洗脫、Sephadex LH-20分離，采用甲醇洗脫，再用半制備HPLC甲醇-水(34∶66)進(jìn)行純化得到化合物7(30.0 mg)、9(16.6 mg)、10(10.6 mg)、11(15.3 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：無色油狀物。ESI-MSm/z: 457.0[M + H]+，分子式C30H48O3。1H-NMR(CDCl3，400 MHz)δ：3.19(1H，m, H-3)，0.74, 0.80, 0.88, 0.95, 0.96, 1.68(6×CH3，s)；13C-NMR(CDCl3, 100 MHz)δ：38.7(C-1)，27.5(C-2)，78.6(C-3)，38.8(C-4)，55.3(C-5)，18.5(C-6)，34.5(C-7)，40.5(C-8)，50.5(C-9)，37.3(C-10)，20.8(C-11)，25.5(C-12)，38.5(C-13)，42.5(C-14)，30.5(C-15)，32.3(C-16)，56.3(C-17)，47.0(C-18)，49.5(C-19)，150.5(C-20)，29.5(C-21)，37.2(C-22)，27.8(C-23)，15.3(C-24)，15.9(C-25)，16.3(C-26)，14.6(C-27)，178.8(C-28)，109.3(C-29)，19.3(C-30)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[3]報道基本一致，故鑒定為白樺酸。

化合物2：白色無定形粉末。ESI-MSm/z: 479.0[M + Na]+，分子式C30H48O3。1H-NMR(C5D5N，400 MHz)δ：11.98(1H，s)，5.13(1H，m)，3.15(1H，m, H-3)，0.89, 1.02, 1.05, 1.19, 1.24(5×CH3，s)，0.94, 1.00(2×CH3，d，J=5.2 Hz)；13C-NMR(C5D5N, 100 MHz)δ：38.7(C-1)，27.5(C-2)，78.6(C-3)，38.8(C-4)，55.3(C-5)，18.5(C-6)，34.5(C-7)，40.5(C-8)，48.5(C-9)，37.3(C-10)，23.8(C-11)，125.5(C-12)，139.3(C-13)，42.5(C-14)，28.5(C-15)，24.9(C-16)，48.1(C-17)，53.6(C-18)，39.5(C-19)，39.4(C-20)，31.1(C-21)，37.2(C-22)，28.8(C-23)，16.6(C-24)，17.4(C-25)，17.5(C-26)，23.7(C-27)，179.8(C-28)，15.6(C-29)，21.3(C-30)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[4-6]報道基本一致，故鑒定為熊果酸。

化合物3：白色無定形粉末。ESI-MSm/z: 479.0[M + Na]+，分子式C30H48O3。1H-NMR(CDCl3，400 MHz)δ：5.28(1H，s)，3.20(1H，m)，0.74，0.75，0.88，0.89，0.91，0.96，1.11(7×CH3，s)；13C-NMR(CDCl3, 100 MHz)δ：38.7(C-1)，27.8(C-2)，79.1(C-3)，38.8(C-4)，55.2(C-5)，18.3(C-6)，32.5(C-7)，39.5(C-8)，47.7(C-9)，37.1(C-10)，23.0(C-11)，122.5(C-12)，143.5(C-13)，41.6(C-14)，27.7(C-15)，23.3(C-16)，46.5(C-17)，41.0(C-18)，46.0(C-19)，30.5(C-20)，33.8(C-21)，32.5(C-22)，28.1(C-23)，15.5(C-24)，15.3(C-25)，17.1(C-26)，26.0(C-27)，183.1(C-28)，33.1(C-29)，23.6(C-30)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[7-9]報道基本一致，故鑒定為齊墩果酸。

化合物4：白色無定形粉末。ESI-MSm/z: 443.0[M + H]+，分子式C30H50O2。1H-NMR(CDCl3，400 MHz)δ：5.21(1H，t,J=4.2 Hz, H-12)，3.49(1H，d,J=11.2 Hz, H-18α)，3.21(1H，m, H-3)，3.17(1H，d,J=11.2 Hz, H-18β)，0.80, 0.87, 0.90, 0.94, 0.97, 1.01, 1.21(7×CH3，s)；13C-NMR(CDCl3, 100 MHz)δ：38.6(C-1)，27.2(C-2)，79.1(C-3)，38.9(C-4)，55.1(C-5)，18.3(C-6)，32.6(C-7)，40.3(C-8)，47.2(C-9)，37.0(C-10)，23.8(C-11)，122.1(C-12)，143.9(C-13)，41.8(C-14)，25.4(C-15)，22.0(C-16)，47.5(C-17)，42.5(C-18)，46.3(C-19)，30.9(C-20)，33.9(C-21)，30.8(C-22)，28.0(C-23)，16.0(C-24)，15.7(C-25)，17.0(C-26)，25.9(C-27)，69.9(C-28)，33.1(C-29)，23.6(C-30)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]報道基本一致，故鑒定為古柯二醇。

化合物5：白色形粉末。ESI-MSm/z: 489.0[M + H]+，分子式C30H48O5。1H-NMR(C5D5N，400 MHz)δ：5.28(1H，brs, H-12)，3.61(1H，m, H-3)，3.52(1H，d,J=12.8 Hz, H-24β)，3.30(1H，m, H-24α)，1.13(3H，d,J=6.8 Hz, H-30)，0.85, 1.07, 1.12, 1.47, 1.68(5×CH3，s)；13C-NMR(C5D5N, 100 MHz)δ：34.1(C-1)，26.5(C-2)，69.9(C-3)，44.0(C-4)，50.2(C-5)，19.3(C-6)，34.7(C-7)，40.6(C-8)，48.0(C-9)，37.5(C-10)，24.3(C-11)，128.1(C-12)，140.0(C-13)，42.4(C-14)，29.3(C-15)，26.4(C-16)，48.3(C-17)，54.7(C-18)，72.7(C-19)，42.4(C-20)，27.0(C-21)，38.5(C-22)，23.6(C-23)，65.7(C-24)，16.0(C-25)，17.2(C-26)，24.6(C-27)，180.7(C-28)，27.5(C-29)，16.6(C-30)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]報道基本一致，故鑒定為barbinervic acid。

化合物6：黃色粉末，鹽酸-鎂粉反應(yīng)陽性。ESI-MSm/z: 325.0[M+Na]+，分子式C15H10O7。1H-NMR(DMSO-d6，400 MHz)δ：7.61(1H，d，J=1.8 Hz, H-2′)，7.53(1H，dd，J=1.8，8.4 Hz, H-6′)，6.85(1H，d，J=8.4 Hz, H-5′)，6.41(1H，d，J=1.8 Hz, H-8)，6.15(1H，d，J=1.8 Hz, H-6)；13C-NMR(DMSO-d6, 100 MHz)δ：147.0(C-2)，135.6(C-3)，176.3(C-4)，160.9(C-5)，98.5(C-6)，164.1(C-7)，93.7(C-8)，156.0(C-9)，103.1(C-10)，121.7(C-1′)，114.9(C-2′)，145.2(C-3′)，147.9(C-4′)，115.0(C-5′)，120.2(C-6′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12]報道基本一致，故鑒定為槲皮素。

化合物7：淡黃色粉末，鹽酸-鎂粉反應(yīng)陽性。ESI-MSm/z: 463.0[M-H]-，分子式C21H20O12。1H-NMR(DMSO-d6，400 MHz)δ：7.71(1H, d,J=1.8 Hz, H-2′)，7.59(1H, dd,J=8.4, 1.8 Hz, H-6′)，6.87(1H, d,J=8.4 Hz, H-5′)，6.39(1H, d,J=2.4 Hz, H-8)，6.20 (1H, d,J=2.4 Hz, H-6)，5.27 (1H, d,J=7.8 Hz, H-1″)；13C-NMR(DMSO-d6, 100 MHz)δ：158.5(C-2)，135.3(C-3)，179.3(C-4)，162.9(C-5)，99.9(C-6)，166.0(C-7)，94.7(C-8)，159.2(C-9)，105.6(C-10)，123.0(C-1′)，116.2(C-2′)，146.0(C-3′)，149.7(C-4′)，117.8(C-5′)，123.3(C-6′)，104.2(C-1″)，75.7(C-2″)，78.3(C-3″)，71.2(C-4″)，78.0(C-5″)，62.3(C-6″)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[13]報道基本一致，故鑒定為槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物8：淡黃色粉末，鹽酸-鎂粉反應(yīng)陽性。ESI-MSm/z: 309.0[M + Na]+，分子式C15H10O6。1H-NMR(DMSO-d6，400 MHz)δ：7.98(2H，d，J=8.4 Hz, H-2′, 6′)，6.83(2H，d，J=8.4 Hz, H-3′, 5′)，6.43(1H，d，J=1.8 Hz, H-8)，6.16(1H，d，J=1.8 Hz, H-6)；13C-NMR(DMSO-d6, 100 MHz)δ：146.8(C-2)，135.7(C-3)，176.0(C-4)，160.9(C-5)，98.3(C-6)，164.2(C-7)，93.4(C-8)，155.9(C-9)，103.0(C-10)，122.1(C-1′)，129.9(C-2′, 6′)，115.6(C-3′, 5′)，159.5(C-4′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[14]報道基本一致，故鑒定為山柰酚。

化合物9：淡黃色粉末，鹽酸-鎂粉反應(yīng)陽性。ESI-MSm/z: 315.0[M-H]-，分子式C16H12O7。1H-NMR(DMSO-d6，400 MHz)δ：7.86(1H，d，J=1.8 Hz, H-2′)，7.78(1H，dd，J=1.8，8.4 Hz, H-6′)，7.03(1H，d，J=8.4 Hz, H-5′)，3.93 (3H, s, 3′-OCH3)；13C-NMR(DMSO-d6, 100 MHz)δ：156.5(C-2)，132.6(C-3)，176.5(C-4)，158.9(C-5)，99.5(C-6)，163.2(C-7)，95.9(C-8)，160.9(C-9)，106.5(C-10)，123.1(C-1′)，114.9(C-2′)，149.2(C-3′)，151.9(C-4′)，116.6(C-5′)，121.3(C-6′)，56.5 (3′-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[15]報道基本一致，故鑒定為異鼠李素。

化合物10：淡黃色粉末，鹽酸-鎂粉反應(yīng)陽性。ESI-MSm/z: 449.0[M + H]+，分子式C21H20O11。1H-NMR(DMSO-d6，400 MHz)δ：7.46(1H, dd,J=8.4, 2.4 Hz, H-6′)，7.42(1H, d,J=2.4 Hz, H-2′)，6.93(1H, d,J=8.4 Hz, H-5′)，6.79(1H, d,J=2.4 Hz, H-8)，6.75(1H, s, H-3)，6.45 (1H, d,J=2.4 Hz, H-6)，5.10 (1H, d,J=7.2 Hz, H-1″)；13C-NMR(DMSO-d6, 100 MHz)δ：164.7(C-2)，103.3(C-3)，182.1(C-4)，161.3(C-5)，99.9(C-6)，163.0(C-7)，94.9(C-8)，157.2(C-9)，105.5(C-10)，121.6(C-1′)，113.9(C-2′)，146.1(C-3′)，150.3(C-4′)，115.8(C-5′)，119.3(C-6′)，100.2(C-1″)，73.3(C-2″)，76.8(C-3″)，70.2(C-4″)，77.5(C-5″)，61.3(C-6″)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[16]報道基本一致，故鑒定為木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物11：淡黃色粉末，鹽酸-鎂粉反應(yīng)陽性。ESI-MSm/z: 433.0[M + H]+，分子式C21H20O10。1H-NMR(DMSO-d6，400 MHz)δ：7.76(2H, d,J=8.4 Hz, H-2′, 6′)，6.95(2H, d,J=8.4 Hz, H-3′, 5′)，6.36(1H, s, H-8)，6.19(1H, s, H-6)，5.36 (1H, d,J=1.6 Hz, H-1″)，0.95 (3H, d,J=7.2 Hz, H-6″)；13C-NMR(DMSO-d6, 100 MHz)δ：157.1(C-2)，134.8(C-3)，178.1(C-4)，161.8(C-5)，98.6(C-6)，164.2(C-7)，93.5(C-8)，160.2(C-9)，104.5(C-10)，121.5(C-1′)，130.8(C-2′，6′)，115.3(C-3′，5′)，157.8(C-4′)，102.2(C-1″)，70.6(C-2″)，70.8(C-3″)，71.5(C-4″)，70.4(C-5″)，16.3(C-6″)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[17]報道基本一致，故鑒定為山柰酚-3-O-α-L-鼠李糖苷。

化合物12：淡黃色粉末，鹽酸-鎂粉反應(yīng)陽性。ESI-MSm/z: 319.0[M + H]+，分子式C15H10O8。1H-NMR(DMSO-d6，400 MHz)δ：7.36(1H, s, H-2′, 6′)，6.38(1H, s, H-6)，6.17(1H, s, H-8)；13C-NMR(DMSO-d6, 100 MHz)δ：148.2(C-2)，137.3(C-3)，177.4(C-4)，162.5(C-5)，99.5(C-6)，166.0(C-7)，94.5(C-8)，158.2(C-9)，104.5(C-10)，123.3(C-1′)，108.8(C-2′，6′)，146.8(C-3′，5′)，137.6(C-4′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[18]報道基本一致，故鑒定為楊梅素。

4 討論

研究發(fā)現(xiàn)從委陵菜屬植物分離鑒定的化學(xué)成分主要有黃酮類、萜類、鞣質(zhì)類等，且黃酮及三萜類成分具有一定的抗炎活性[19-20]。本研究從雪白委陵菜藥材全草中分離鑒定了5個三萜和7個黃酮類化合物。本課題組將繼續(xù)對其化學(xué)成分進(jìn)行研究，并對其抗炎活性進(jìn)行篩選，以期闡明其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，為該藥材的開發(fā)及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究奠定基礎(chǔ)。