老年急性心肌梗死患者PCI前血清miR-503、Apelin-13水平與術(shù)后左心室重構(gòu)的關(guān)系

陳君，馬娜，顧明，彭洋

1天津市職業(yè)病防治院（天津市工人醫(yī)院）心血管內(nèi)科，天津 300011；2天津市職業(yè)病防治院（天津市工人醫(yī)院）中西醫(yī)結(jié)合科

急性心肌梗死（AMI）是臨床常見(jiàn)的急危重癥，其病理基礎(chǔ)為冠狀動(dòng)脈粥樣硬化引起的冠狀動(dòng)脈管腔狹窄或堵塞，造成心肌缺血缺氧損傷［1］。經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入治療（PCI）是治療AMI的常用方法，雖然PCI使得大部分患者能及時(shí)得到救治，但AMI患者PCI術(shù)后依舊可能發(fā)生左心室重構(gòu)（LVR）［2］。LVR是左心室對(duì)慢性容量和壓力超負(fù)荷的適應(yīng)性改變，AMI患者PCI術(shù)后LVR的發(fā)生不僅導(dǎo)致AMI患者心功能嚴(yán)重受損，還直接影響遠(yuǎn)期預(yù)后，使其死亡風(fēng)險(xiǎn)明顯增加，是影響遠(yuǎn)期預(yù)后的重要因素［3］。微小RNA是一類長(zhǎng)度為19～24個(gè)核苷酸的無(wú)蛋白質(zhì)編碼功能的內(nèi)源性RNA，并且在包括血管生成在內(nèi)的多種生理和病理過(guò)程中起重要作用［4-6］。研究發(fā)現(xiàn)，微小RNA-503（miR-503）與心肌細(xì)胞損傷密切相關(guān)，下調(diào)miR-503表達(dá)可提高缺氧環(huán)境下心肌細(xì)胞存活，抑制心肌細(xì)胞凋亡［7］。WEN等［8］研究顯示，miR-503可調(diào)控下游靶向基因孤獨(dú)G蛋白偶聯(lián)受體配體-13（Apelin-13），共同參與體外內(nèi)皮祖細(xì)胞增殖、遷移和血管形成過(guò)程，二者存在靶向調(diào)控關(guān)系。但miR-503和Apelin-13表達(dá) 與AMI患者PCI術(shù) 后LVR的關(guān)系鮮見(jiàn)研究報(bào)道。本研究我們檢測(cè)了老年AMI患者術(shù)前血清miR-503、Apelin-13水平，分析二者與PCI術(shù)后LVR的關(guān)系，以期為臨床防治LVR提供一定參考。

1 資料與方法

1.1 臨床資料選取2019年5月—2021年4月天津市職業(yè)病防治院收治的行PCI治療的老年AMI患者143例作為觀察組，男79例、女64例，年齡60～80（68.46±6.35）歲。有吸煙史63例，有早發(fā)心血管疾病家族史37例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合AMI的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)［9］；②首次確診，且均行PCI治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：①陳舊性心肌梗死；②曾進(jìn)行過(guò)冠狀動(dòng)脈支架置入術(shù)等心臟手術(shù)者；③合并各種惡性腫瘤者；④合并各種急、慢性感染病者；⑤水電解質(zhì)紊亂、出血、嚴(yán)重糖尿病并發(fā)癥者；⑥近期有腦血管事件或重大外傷。選取同期醫(yī)院體檢健康者140例作為對(duì)照組，男74例、女66例，年齡60～81（69.68±7.37）歲。有吸煙史49例，有早發(fā)心血管疾病家族史23例。兩組性別、年齡、吸煙史、早發(fā)心血管疾病家族史比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＞0.05）。所有受試者簽署知情同意書，本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（2019-倫審第21號(hào)）。

1.2 血清miR-503測(cè)定采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（RT-qPCR）法。觀察組于入院后PCI術(shù)前、對(duì)照組于體檢時(shí)，采集空腹外周靜脈血5 mL，靜置后離心，分離血清，于-70℃冰箱內(nèi)保存。取出血清樣本并解凍，按TRIzol試劑盒（北京拜爾迪生物技術(shù)有限公司，批號(hào)DEM201-47）說(shuō)明書提取血清總RNA，異丙醇沉淀濃縮后，用75%乙醇洗滌，干燥后加入100μL焦碳酸二乙酯水，檢測(cè)所得RNA的純度及完整度；然后將RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA，產(chǎn)物置于-20℃保存。正反向引物、內(nèi)參基因由上海恒斐生物科技有限公司設(shè)計(jì)并合成，miR-503以U6為內(nèi)參，U6正向引物：5＇-TACCCTGTCGAACCGAATTTGTG-3＇，反向引物：5＇-TGGTGTCGTGGAGTCG-3＇；miR-503正向引物：5＇-CCTATTTCCCATGATTCCTTCATA-3＇，反 向 引物：5＇-GTAATACGGTTATCCACGCG-3＇。RT-qPCR反應(yīng)（反應(yīng)體系25μL）：cDNA（50 ng/μL）模板2.5μL，熒光定量試劑（SYBR Premix Ex Taq）5μL，正反向引物各1μL，Taq酶0.3μL，水15.2μL，每個(gè)樣本設(shè)置3個(gè)平行。反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性3 min；95℃變性45 s、60℃退火30 s，72℃延伸40 s，30個(gè)循環(huán)。采用2-ΔΔCt法計(jì)算血清miR-503相對(duì)水平。

1.3 血清Apelin-13測(cè)定采用ELISA法。多功能酶標(biāo)儀（北京拜爾迪生物技術(shù)有限公司，型號(hào)Varioskan LUX）測(cè)定450 nm波長(zhǎng)處吸光度并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算標(biāo)本中Apelin-13水平，操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒（武漢華美生物工程有限公司，批號(hào)QS-1667）說(shuō)明書進(jìn)行。

1.4 隨訪和超聲心動(dòng)圖指標(biāo)觀察對(duì)老年AMI患者PCI術(shù)后隨訪1年，隨訪起始日期為術(shù)后第1天，術(shù)后1年對(duì)患者進(jìn)行超聲心動(dòng)圖檢查（彩色超聲心動(dòng)儀購(gòu)自荷蘭飛利浦公司，型號(hào)iE33）測(cè)量左心室舒張末期內(nèi)徑（LVEDD）、室間隔厚度（IVST）、左心室后壁厚度（LVPWT）、左室射血分?jǐn)?shù)（LVEF）。根據(jù)是否發(fā)生LVR［LVR判定標(biāo)準(zhǔn)：術(shù)后1年左心室收縮末期容積（LVESV）較出院時(shí)增加≥15%］［10］將患者分為L(zhǎng)VR組61例、非LVR組82例。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS24.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料符合正態(tài)分布以xˉ±s表示，比較行t檢驗(yàn)。Pearson法分析LVR患者術(shù)前血清miR-503、Apelin-13、術(shù)后1年超聲心動(dòng)圖指標(biāo)的相關(guān)性；多因素Logistic回歸分析影響老年AMI患者PCI術(shù)后1年發(fā)生LVR的因素。采用受試者工作特征（ROC）曲線分析術(shù)前血清miR-503、Apelin-13對(duì)老年AMI患者PCI術(shù)后1年發(fā)生LVR的預(yù)測(cè)價(jià)值，曲線下面積（AUC）比較采用Z檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 觀察組與對(duì)照組血清miR-503和Apelin-13水平比較觀察組與對(duì)照組血清miR-503水平分別為1.64±0.19、1.00±0.03，血清Apelin-13水平分別為（23.06±3.14）、（37.82±4.93）ng/mL，兩組血清miR-503和Apelin-13水平比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05）。

2.2 LVR組與非LVR組術(shù)前血清miR-503、Apelin-13水平和術(shù)后1年超聲心動(dòng)圖指標(biāo)比較與非LVR組比較，LVR組術(shù)前血清miR-503水平、術(shù)后1年LVEDD、IVST、LVPWT升高，術(shù)前Apelin-13水平、術(shù)后1年LVEF降低（P均＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 LVR組與非LVR組術(shù)前血清miR-503、Apelin-13水平和術(shù)后1年超聲心動(dòng)圖指標(biāo)比較（xˉ±s）

2.3 LVR患者術(shù)前血清miR-503、Apelin-13、術(shù)后1年超聲心動(dòng)圖指標(biāo)的相關(guān)性分析Pearson相關(guān)性分析顯示，LVR患者術(shù)前血清miR-503與Apelin-13呈負(fù)相關(guān)（r=-0.544，P＜0.05）。術(shù)前血清miR-503與術(shù)后1年LVEDD、IVST、LVPWT呈正相關(guān)（r分別為0.491、0.628、0.477，P均＜0.05），與LVEF呈負(fù)相關(guān)（r=-0.562，P＜0.05）；術(shù)前血清Apelin-13與術(shù)后1年LVEDD、IVST、LVPWT呈 負(fù) 相 關(guān)（r分 別 為-0.514、-0.583、-0.609，P均＜0.05），與LVEF呈正相關(guān)（r=0.465，P＜0.05）。

2.4 影響老年AMI患者PCI術(shù)后1年發(fā)生LVR的因素分析以PCI術(shù)后1年是否發(fā)生LVR為因變量，術(shù)前血清miR-503、Apelin-13水平及術(shù)后1年LVEDD、IVST、LVPWT、LVEF為自變量，進(jìn)行多因素Logistic回歸分析結(jié)果顯示，血清miR-503水平及LVEDD、IVST、LVPWT均是影響老年AMI患者PCI術(shù)后1年發(fā)生LVR的危險(xiǎn)因素，血清Apelin-13水平及LVEF則為其保護(hù)因素（P均＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 影響老年AMI患者PCI術(shù)后1年發(fā)生LVR的多因素Logistic回歸分析

2.5 術(shù)前 血清miR-503和Apelin-13對(duì)老 年AMI患者PCI術(shù)后1年發(fā)生LVR的預(yù)測(cè)價(jià)值ROC曲線分析顯示，術(shù)前血清miR-503、Apelin-13水平及二者聯(lián)合預(yù)測(cè)老年AMI患者PCI術(shù)后1年發(fā)生LVR的AUC分別為0.803、0.839、0.927。二者聯(lián)合AUC高于血清miR-503、Apelin-13單獨(dú)預(yù)測(cè)（Z分別為2.824、2.219，P均＜0.05）。見(jiàn)表3。

表3 術(shù)前血清miR-503和Apelin-13對(duì)老年AMI患者PCI術(shù)后1年發(fā)生LVR的預(yù)測(cè)價(jià)值

3 討論

AMI具有病情發(fā)展迅速、合并癥多、變化快等特點(diǎn)，及時(shí)發(fā)現(xiàn)并施以救治，能極大提高患者的生存率。LVR對(duì)于AMI進(jìn)展是極其危險(xiǎn)的并發(fā)癥，嚴(yán)重威脅心臟病患者人身健康安全，給預(yù)后康復(fù)帶來(lái)很大障礙［11-12］。曹波等［13］研究認(rèn)為，急診PCI對(duì)抑制LVR、改善左心功能優(yōu)于擇期PCI，能夠盡早實(shí)現(xiàn)血管再通、血流供應(yīng)，使瀕死心肌得到拯救，從而限制心肌梗死范圍進(jìn)一步擴(kuò)大。

AMI的病理基礎(chǔ)是動(dòng)脈粥樣硬化，NGUYEN等［14］從人類以及經(jīng)氧化低密度脂蛋白處理小鼠體內(nèi)巨噬細(xì)胞分離出細(xì)胞外囊泡，發(fā)現(xiàn)動(dòng)脈粥樣硬化的細(xì)胞外囊泡中miR-503表達(dá)升高。ZHU等［15］研究發(fā)現(xiàn)，miR-503通過(guò)靶向H9c2心肌細(xì)胞中的胰島素樣生長(zhǎng)因子1受體，通過(guò)磷脂酰肌醇-3激酶/絲氨酸-蘇氨酸蛋白激酶途徑促進(jìn)細(xì)胞凋亡。本研究發(fā)現(xiàn)，老年AMI患者術(shù)前血清miR-503水平高于健康體檢者，且LVR組術(shù)前血清miR-503水平高于非LVR組，提示術(shù)前血清miR-503可能與AMI發(fā)病及PCI術(shù)后1年LVR發(fā)生有關(guān)，猜測(cè)AMI引起缺氧缺血過(guò)程中，機(jī)體為適應(yīng)這一過(guò)程處于炎性應(yīng)激狀態(tài)，巨噬細(xì)胞分泌增多導(dǎo)致miR-503表達(dá)升高，從而通過(guò)靶向某些物質(zhì)參與調(diào)控心肌梗死邊緣血管新生或抑制脂質(zhì)代謝、促進(jìn)細(xì)胞凋亡，進(jìn)而發(fā)生LVR。

Apelin是一種新型、具有極短半衰期的內(nèi)源活性肽，可參與調(diào)節(jié)內(nèi)皮損傷、心血管重構(gòu)、氧化應(yīng)激、炎性反應(yīng)等病理生理過(guò)程，對(duì)高血壓、心力衰竭和冠狀動(dòng)脈性心臟病有一定保護(hù)作用［16-18］。Apelin基因的變異可能會(huì)影響周圍循環(huán)或心臟的血管張力，從而易患心血管疾病。馬萍等［19］研究發(fā)現(xiàn)，正常組、冠心病組、冠心病合并糖尿病組血清Apelin-13表達(dá)水平依次降低，Apelin-13水平變化可反映患者冠狀動(dòng)脈病變狹窄程度。另有研究發(fā)現(xiàn)，Apelin-13可抑制心肌梗死所致心力衰竭大鼠的氧化應(yīng)激，改善心臟功能障礙，并有利于減輕心臟纖維化［20］。本研究結(jié)果顯示，老年AMI患者術(shù)前血清Apelin-13水平低于健康體檢者，且LVR組術(shù)前血清Apelin-13水平低于非LVR組，猜測(cè)在AMI過(guò)程中Apelin-13低表達(dá)可增強(qiáng)血管收縮導(dǎo)致血壓升高，加重左心室負(fù)擔(dān)進(jìn)而導(dǎo)致LVR，加重AMI患者病情。

為進(jìn)一步探究miR-503與Apelin-13是否具有相關(guān)性，經(jīng)Pearson分析顯示，兩者呈負(fù)相關(guān)，這可能與miR-503直接靶向Apelin-13有關(guān)?？赡茉蚴莔iR-503過(guò)表達(dá)抑制內(nèi)皮祖細(xì)胞中Apelin-13表達(dá)，從而抑制AMI過(guò)程中新生血管生成［8］。本研究發(fā)現(xiàn)，LVR組術(shù)后1年LVEDD、IVST、LVPWT高于非LVR組，術(shù)后1年LVEF低于非LVR組，各超聲心動(dòng)圖指標(biāo)均能說(shuō)明發(fā)生LVR，且LVEF降低，說(shuō)明LVR導(dǎo)致一定程度的心臟射血障礙。術(shù)前血清miR-503與術(shù)后1年LVEDD、IVST、LVPWT呈正相關(guān)，與LVEF呈負(fù)相關(guān)；術(shù)前血清Apelin-13與術(shù)后1年LVEDD、IVST、LVPWT呈負(fù)相關(guān)，與LVEF呈正相關(guān)。這些結(jié)果進(jìn)一步說(shuō)明，miR-503、Apelin-13與心室收縮能力、心臟內(nèi)壁厚度以及射血能力有關(guān)。另外，本研究還發(fā)現(xiàn)，血清miR-503是影響老年AMI患者PCI術(shù)后1年發(fā)生LVR的危險(xiǎn)因素，Apelin-13是保護(hù)因素，且二者聯(lián)合預(yù)測(cè)老年AMI患者PCI術(shù)后1年發(fā)生LVR的AUC高于術(shù)前血清miR-503、Apelin-13單獨(dú)預(yù)測(cè)，具有更高的預(yù)測(cè)價(jià)值。提示術(shù)前聯(lián)合檢測(cè)血清miR-503、Apelin-13水平有助于評(píng)估老年AMI患者PCI術(shù)后1年LVR發(fā)生情況。

綜上所述，老年AMI患者術(shù)前血清miR-503呈高水平、Apelin-13呈低水平，二者與患者PCI術(shù)后1年LVR存在一定相關(guān)性，二者聯(lián)合檢測(cè)對(duì)預(yù)測(cè)老年AMI患者PCI術(shù)后1年LVR發(fā)生有較高價(jià)值。