• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    耐鹽深綠木霉TW320和擬康寧木霉TW1876生長(zhǎng)和產(chǎn)孢條件優(yōu)化

    2022-12-19 10:49:04胡廣艷趙忠娟楊合同
    山東科學(xué) 2022年6期
    關(guān)鍵詞:孢量產(chǎn)孢木霉

    胡廣艷,趙忠娟,b,楊合同,b*

    (齊魯工業(yè)大學(xué)(山東省科學(xué)院) a.生態(tài)研究所;b.山東省應(yīng)用微生物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 山東 濟(jì)南 250103)

    鹽脅迫作為最常見的非生物脅迫之一,能顯著降低植物的產(chǎn)量并影響植物生理生化各方面的指標(biāo)[1]。據(jù)統(tǒng)計(jì),土壤鹽漬化問(wèn)題已經(jīng)涉及了全球20%的耕地和33%的灌溉農(nóng)田,嚴(yán)重影響農(nóng)業(yè)生產(chǎn),成為了世界范圍內(nèi)的一個(gè)重要農(nóng)業(yè)問(wèn)題[2-3]。我國(guó)黃河三角洲地區(qū)土壤鹽漬化范圍廣,面積大,嚴(yán)重制約了該地區(qū)的土地利用和農(nóng)業(yè)生產(chǎn)。目前研究發(fā)現(xiàn),根際土壤中存在的有益微生物能夠促進(jìn)植物對(duì)非生物脅迫的耐受性,改善植物生長(zhǎng)發(fā)育[4]。因此對(duì)植物進(jìn)行微生物處理,尋找合適的植物-微生物組合,以此促進(jìn)植物生長(zhǎng)及植物抗脅迫能力,對(duì)作物生產(chǎn)具有重要意義[5]。

    木霉菌是目前研究和應(yīng)用最為廣泛的生防真菌之一,是一類重要的植物根際促生真菌,可以促進(jìn)植物生長(zhǎng)、提高植物抗逆性、提高作物產(chǎn)量和品質(zhì)。目前木霉菌已經(jīng)開發(fā)為微生物菌劑,應(yīng)用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)實(shí)踐[6]。目前國(guó)內(nèi)外己經(jīng)有50多種木霉商品化制劑[7],如美國(guó)的哈茨木霉T22菌株,俄羅斯的木霉制劑Myc01[8]等,在不同地區(qū)都取得了良好的作用效果。Huang等[9]將哈茨木霉(Trichodermaharzianum)SQR-T37制成生物菌肥,發(fā)現(xiàn)該生物菌肥對(duì)黃瓜立枯病的防效達(dá)到了81.82%;趙遠(yuǎn)征等[10]研究發(fā)現(xiàn)哈茨木霉可濕性粉劑對(duì)馬鈴薯黑痣病有防治效果和增產(chǎn)效果。但是,目前對(duì)于耐鹽木霉菌株微生物制劑的研究和報(bào)道較少。

    針對(duì)黃河三角洲鹽漬化土壤中植物生長(zhǎng)困難的問(wèn)題,山東省科學(xué)院生態(tài)研究所分離多株具有較高耐鹽活性的木霉菌株[11],其中深綠木霉(T.atroviride)TW320和擬康寧木霉(T.koningiopsis)TW1876的耐鹽性較高,拮抗病原菌和促生能力也較強(qiáng),制備的木霉微生物菌劑在鹽漬土壤作物種植過(guò)程中具有較高的應(yīng)用前景。木霉菌劑目前的應(yīng)用形式大多是孢子制劑,孢子的產(chǎn)生條件是木霉制劑生產(chǎn)的制約條件,例如深綠木霉可以用于生物防治,但產(chǎn)孢量較少,影響生產(chǎn)應(yīng)用,池玉杰等[12]對(duì)其產(chǎn)孢條件加以研究,得到了深綠木霉最佳產(chǎn)孢條件;又如具有分解纖維素能力的綠色木霉產(chǎn)孢量不能滿足工業(yè)需求,肖龍龍等[13]對(duì)其產(chǎn)孢條件加以優(yōu)化,顯著提高了其產(chǎn)孢量。前期研究發(fā)現(xiàn)耐鹽木霉菌株TW320和TW1876培養(yǎng)過(guò)程中產(chǎn)孢較少,影響了制劑的制備及應(yīng)用。本文對(duì)TW320和TW1876生長(zhǎng)和產(chǎn)孢條件進(jìn)行探究,尋找最優(yōu)生長(zhǎng)和產(chǎn)孢培養(yǎng)基,對(duì)木霉制劑工藝的研發(fā)具有指導(dǎo)意義。

    1 材料與方法

    1.1 菌株

    耐鹽木霉菌株深綠木霉(T.atroviride)TW320和擬康寧木霉(T.koningiopsis)TW1876是山東省科學(xué)院生態(tài)研究所分別從山東東營(yíng)黃河三角洲濕地和山東萊蕪雪野湖濕地采集的土樣中分離獲得。

    1.2 培養(yǎng)基

    本研究選擇9種不同培養(yǎng)基:馬鈴薯葡萄糖瓊脂 (potato dextrose agar, PDA)培養(yǎng)基、馬丁氏(Martin)培養(yǎng)基、察氏瓊脂(Czapek dox agar, CDA)培養(yǎng)基、低營(yíng)養(yǎng)瓊脂(synthetic low nutrient agar, SNA) 培養(yǎng)基、玉米粉葡萄糖瓊脂(cornmal dextrose agar,CMD)培養(yǎng)基、大豆玉米粉(soybean corn flour agar)培養(yǎng)基、無(wú)機(jī)磷瓊脂 (inorganic phosphorus agar,MPA) 培養(yǎng)基、燕麥瓊脂(oatmeal agar,OA)培養(yǎng)基、麥芽汁瓊脂(malt extract agar,MEA)培養(yǎng)基,培養(yǎng)基成分如表1所示。

    表1 各培養(yǎng)基成分

    1.3 試驗(yàn)方法

    1.3.1 pH對(duì)耐鹽木霉菌株TW320和TW1876菌絲生長(zhǎng)和產(chǎn)孢的影響

    以PDA培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基,用1 mol/L的鹽酸和氫氧化鈉將培養(yǎng)基pH調(diào)制成4、5、6、7、8、9、10、11,分別接種直徑5 mm耐鹽木霉菌株TW320和TW1876菌塊于培養(yǎng)基邊緣,在培養(yǎng)箱25 ℃恒溫培養(yǎng),第3天測(cè)量菌落直徑,7 d后測(cè)量產(chǎn)孢量。每個(gè)處理重復(fù)5皿。

    產(chǎn)孢量的計(jì)數(shù)采用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)法[14]。取已培養(yǎng)好的菌株,用無(wú)菌量筒取無(wú)菌水20 mL,分兩次轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)皿中,用5 mL的移液槍將孢子反復(fù)吹洗下來(lái),混勻后轉(zhuǎn)移至已滅菌的50 mL三角瓶中,充分振蕩混勻后,用移液槍吸取少量孢子懸液滴加在血球計(jì)數(shù)板蓋玻片的邊緣,用五點(diǎn)法讀取5個(gè)小格的孢子數(shù)。

    木霉菌孢子個(gè)數(shù)(cfu/mL)=[(5小格孢子總數(shù))/5]×25×104×稀釋比例。

    1.3.2 不同培養(yǎng)基對(duì)耐鹽木霉菌株TW320與TW1876菌絲生長(zhǎng)及產(chǎn)孢量的影響

    將耐鹽木霉菌株TW320和TW1876轉(zhuǎn)接到PDA培養(yǎng)基,在25 ℃條件下恒溫培養(yǎng)5 d后,用打孔器取直徑5 mm的菌餅,接種到9種不同固體培養(yǎng)基(PDA、Martin、CDA、SNA、CMD、大豆玉米粉、MPA、OA、MEA)的邊緣,置于25 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng),第3天測(cè)量菌落直徑,7 d后用血球計(jì)數(shù)法測(cè)量產(chǎn)孢量,產(chǎn)孢量計(jì)算同上。每個(gè)處理重復(fù)5皿。

    1.3.3 不同碳源、氮源對(duì)耐鹽木霉菌株TW320和TW1876菌絲生長(zhǎng)及產(chǎn)孢量的影響

    采用察氏培養(yǎng)基作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基,設(shè)置7個(gè)不同的碳源處理,分別是麥芽糖、蔗糖、葡萄糖、乳糖、木糖、甘露醇和淀粉,每1 000 mL添加不同碳源各30 g,制成7種含不同碳源的固體培養(yǎng)基,以不加碳源的培養(yǎng)基作為對(duì)照;同時(shí)設(shè)置9個(gè)不同的氮源處理,分別是酵母膏、蛋白胨、牛肉膏、磷酸氫二銨、甘氨酸、硫酸銨、硝酸銨、硝酸鈉、尿素,每1 000 mL添加不同氮源各3 g,制成9種含不同氮源的固體培養(yǎng)基,以不加氮源的培養(yǎng)基作為對(duì)照。

    耐鹽木霉菌株TW320和TW1876在PDA培養(yǎng)基中25 ℃條件下恒溫培養(yǎng)5 d后,用打孔器取直徑5 mm的菌塊放至上述各種不同培養(yǎng)基的邊緣,放置于25 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng),培養(yǎng) 3 d后測(cè)量菌落直徑,7 d后用血球計(jì)數(shù)法測(cè)量產(chǎn)孢量,產(chǎn)孢量計(jì)算同上。每個(gè)處理重復(fù)5皿。

    1.3.4 不同碳氮比對(duì)耐鹽木霉菌株TW320和TW1876菌絲生長(zhǎng)及產(chǎn)孢量的影響

    1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

    本研究每個(gè)處理設(shè)5個(gè)重復(fù),利用SPSS(版本)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行ANOVA方差分析,P<0.05表示存在顯著性差異。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 不同pH對(duì)耐鹽木霉菌株TW320和TW1876菌絲生長(zhǎng)和產(chǎn)孢的影響

    深綠木霉(T.atroviride)TW320在pH=4~11 內(nèi)均可生長(zhǎng)(圖1(a)),pH= 4~8 內(nèi)TW320菌絲較厚,可見綠色孢子產(chǎn)生,pH=9~11菌絲厚度減弱,孢子量減少。統(tǒng)計(jì)結(jié)果發(fā)現(xiàn):當(dāng)pH=4,5,6時(shí),生長(zhǎng)3 d的菌落直徑無(wú)顯著差異,生長(zhǎng)速度最快;pH=9時(shí),菌落直徑最小;pH=5時(shí),TW320菌株生長(zhǎng)7 d的產(chǎn)孢量最多,為4.94×107cfu/mL;pH=9時(shí),產(chǎn)孢量最少(表2)。綜上,TW320培養(yǎng)最優(yōu)pH為5。

    圖1 pH=4~11范圍內(nèi)木霉菌株TW320和TW1876菌絲生長(zhǎng)及產(chǎn)孢情況Fig.1 Mycelium growth and sporulation of Trichoderma strains TW320 and TW1876 in the pH range 4 to 11

    表2 不同pH對(duì)木霉菌株TW320和TW1876菌絲生長(zhǎng)及產(chǎn)孢量的影響

    擬康寧木霉(T.koningiopsis)TW1876在pH=4~11 范圍內(nèi)菌絲生長(zhǎng)濃密(圖1(b)),綠色孢子明顯。統(tǒng)計(jì)結(jié)果如表2所示,當(dāng)pH=4、5、6時(shí),菌落直徑不存在顯著差異,此時(shí)菌落直徑最大,TW1876生長(zhǎng)速度最快;當(dāng)pH=9時(shí),菌落直徑最??;pH=11時(shí),TW1876菌株生長(zhǎng)7 d的產(chǎn)孢量最多,為1.76×108cfu/mL; pH=6時(shí),產(chǎn)孢量最小,為0.47×108cfu/mL。綜上,TW1876培養(yǎng)最優(yōu)pH為11。

    2.2 耐鹽木霉菌株TW320和TW1876在不同培養(yǎng)基上的菌絲生長(zhǎng)狀況及產(chǎn)孢量

    深綠木霉(T.atroviride)TW320在9種培養(yǎng)基上均可生長(zhǎng),但在不同培養(yǎng)基上菌絲量、孢子數(shù)量和孢子顏色有明顯不同(圖2(a))。統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示:PDA培養(yǎng)基上生長(zhǎng)3 d的TW320菌落直徑與其他處理相比存在顯著差異,生長(zhǎng)速度最快,在大豆玉米粉培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)速度次之,在CDA培養(yǎng)基上菌落直徑最?。籘W320在大豆玉米粉培養(yǎng)基上產(chǎn)孢量最多,為3.13×107cfu/mL,在SNA培養(yǎng)基上的產(chǎn)孢量最少,為0.05×107cfu/mL(表3)。因此,TW320培養(yǎng)的最優(yōu)培養(yǎng)基為大豆玉米粉培養(yǎng)基。

    圖2 木霉菌株TW320和TW1876在9種不同培養(yǎng)基上的菌絲生長(zhǎng)和產(chǎn)孢狀況Fig.2 Mycelium growth and sporulation of Trichoderma strains TW320 and TW1876 on nine different media

    由圖2b可見,擬康寧木霉(T.koningiopsis)TW1876在9種培養(yǎng)基上均可生長(zhǎng),菌絲生長(zhǎng)量、產(chǎn)孢量和孢子顏色在不同培養(yǎng)基上表現(xiàn)出明顯差異。在PDA培養(yǎng)基上,TW1876生長(zhǎng)最好,菌絲濃密,綠色孢子明顯,其菌落直徑與其他處理存在顯著差異,生長(zhǎng)速度最快,在CDA培養(yǎng)基上菌落直徑最小;TW1876在PDA培養(yǎng)基上的產(chǎn)孢量也最多,為9.68×107cfu/mL,在大豆玉米粉培養(yǎng)基上的產(chǎn)孢量最少,為0.07×107cfu/mL(表3)。綜上,選取PDA培養(yǎng)基為TW1876培養(yǎng)的最優(yōu)培養(yǎng)基。

    表3 不同培養(yǎng)基對(duì)木霉菌株TW320和TW1876菌絲生長(zhǎng)及產(chǎn)孢量的影響

    2.3 耐鹽木霉菌株TW320和TW1876在含不同碳源、不同氮源的培養(yǎng)基上的菌絲生長(zhǎng)狀況及產(chǎn)孢量

    深綠木霉(T.atroviride)TW320可以利用多種碳源生長(zhǎng)和產(chǎn)孢(圖3(a))。統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示:以麥芽糖作為碳源時(shí),培養(yǎng)3 d的TW320的菌落直徑最大,生長(zhǎng)速度最快,其次是淀粉、木糖、乳糖、葡萄糖和蔗糖,無(wú)碳源的培養(yǎng)基的菌落直徑最?。灰阅咎亲鳛樘荚磿r(shí)產(chǎn)孢量最多,為2.93×106cfu/mL,以淀粉作為碳源時(shí)的產(chǎn)孢量最少(表4)。綜上,麥芽糖最有利于TW320菌絲生長(zhǎng),木糖次之,但木糖最有利于其產(chǎn)孢,因此選取木糖作為深綠木霉TW320生長(zhǎng)的最佳碳源(表4)。

    圖3 木霉菌株TW320和TW1876在含不同碳源的培養(yǎng)基上的菌絲生長(zhǎng)及產(chǎn)孢狀況Fig.3 Mycelial growth and sporulation of Trichoderma strains TW320 and TW1876 on medium containing different carbon sources

    擬康寧木霉(T.koningiopsis)TW1876對(duì)不同碳源的利用差別顯著(圖3(b))。結(jié)果表明:以淀粉和麥芽糖作為碳源時(shí),生長(zhǎng)3 d的菌落直徑無(wú)顯著差異,生長(zhǎng)速度最快,其次是葡萄糖、乳糖和木糖,無(wú)碳源時(shí)的菌落直徑最??;乳糖作為碳源時(shí),產(chǎn)孢量最多,為6.75×106cfu/mL,無(wú)碳源時(shí)的產(chǎn)孢量最少。綜上,選取乳糖作為擬康寧木霉TW1876培養(yǎng)基的最佳碳源(表4)。

    表4 不同碳源對(duì)木霉菌株TW320和 TW1876菌絲生長(zhǎng)及產(chǎn)孢量的影響

    深綠木霉(T.atroviride)TW320在含不同氮源的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)和產(chǎn)孢存在明顯差異(圖4(a))。統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示:以酵母膏為氮源時(shí),TW320菌株菌絲較濃密,其菌落直徑和產(chǎn)孢量與其他處理比均存在顯著差異,生長(zhǎng)速度最快,產(chǎn)孢量最多,為5.85×106cfu/mL;在無(wú)氮源培養(yǎng)基中TW320生長(zhǎng)較慢,產(chǎn)孢量最少,為0.08×106cfu/mL(圖4(a),表5)。因此,選取酵母膏作為培養(yǎng)深綠木霉TW320的最佳氮源。

    圖4 木霉菌株TW320和TW1876在含不同氮源的培養(yǎng)基上的菌絲生長(zhǎng)及產(chǎn)孢狀況Fig.4 Mycelial growth and sporulation of Trichoderma strains TW320 and TW1876 on medium containing different nitrogen sources

    由圖4(b)可知,擬康寧木霉(T.koningiopsis)TW1876對(duì)不同氮源的利用也不同。以酵母膏作為氮源時(shí),其菌落直徑與其他氮源處理相比存在顯著差異,此時(shí)TW1876生長(zhǎng)速度最快,以蛋白胨、硫酸銨、硝酸銨、甘氨酸和牛肉膏為氮源時(shí),菌落生長(zhǎng)速度次之,以尿素作為氮源時(shí)的菌落生長(zhǎng)速度最慢;以甘氨酸為氮源時(shí)產(chǎn)孢量最多,為3.83×106cfu/mL,無(wú)氮源時(shí)的產(chǎn)孢量最少,為0.3×106cfu/mL(表5)。綜上,以甘氨酸為氮源時(shí),TW1876生長(zhǎng)速度較快,產(chǎn)孢量最多,故以甘氨酸作為培養(yǎng)TW1876的最佳氮源(表5)。

    表5 不同氮源對(duì)TW320和TW1876菌絲生長(zhǎng)及產(chǎn)孢量的影響

    2.4 耐鹽木霉菌株TW320和TW1876在含不同碳氮比的培養(yǎng)基上的菌絲生長(zhǎng)狀況及產(chǎn)孢量

    圖5 木霉菌株TW320和TW1876在含不同碳氮比的培養(yǎng)基上的菌絲生長(zhǎng)及產(chǎn)孢狀況Fig.5 Mycelial growth and sporulation of Trichoderma strains TW320 and TW1876 on medium with different C/N ratios

    表6 不同碳氮比對(duì)木霉菌株TW320和TW1876菌絲生長(zhǎng)及產(chǎn)孢量的影響

    3 討論

    目前我國(guó)土壤鹽漬化面積連年增加,嚴(yán)重影響了植物的生長(zhǎng),降低了糧食的產(chǎn)量。植物-微生物聯(lián)合修復(fù)方法的出現(xiàn)可以有效緩解這種狀況。Siemering 等[15]在研究報(bào)告中指出,植物根系環(huán)境是真菌的主要棲息地。木霉作為一種植物促生真菌,可以定殖在植物根部,不僅可以促進(jìn)植物生長(zhǎng),還可以提高植物的抗逆能力,從而減少化肥、農(nóng)藥的使用,避免給環(huán)境造成污染,促進(jìn)農(nóng)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。耐鹽木霉的使用可以提高植物對(duì)鹽漬環(huán)境的適應(yīng)能力,是減輕土壤鹽漬化危害以及開發(fā)利用沿海灘涂等鹽漬化土地資源的重要途徑之一。但是,耐鹽木霉的產(chǎn)孢量不足,限制了大規(guī)模生產(chǎn)孢子制劑。

    耐鹽木霉固體產(chǎn)孢培養(yǎng)基優(yōu)化實(shí)驗(yàn),為大量獲取孢子提供了可能,為木霉制劑的發(fā)展做好了準(zhǔn)備工作,對(duì)未來(lái)農(nóng)業(yè)的發(fā)展具有重要的社會(huì)和生態(tài)學(xué)意義。

    猜你喜歡
    孢量產(chǎn)孢木霉
    燕麥孢囊線蟲生防真菌TL16發(fā)酵條件優(yōu)化
    草原與草坪(2022年5期)2023-01-29 09:39:36
    球孢白僵菌產(chǎn)孢條件優(yōu)化研究
    木霉和殺菌劑聯(lián)用對(duì)橡膠榕白絹病菌的抑制作用
    假禾谷鐮孢菌產(chǎn)孢條件研究
    歐盟評(píng)估來(lái)自一種轉(zhuǎn)基因里氏木霉的α-淀粉酶的安全性
    玉米大斑病抗病鑒定谷物粒培養(yǎng)基產(chǎn)孢因素探討
    一種稻瘟病菌培養(yǎng)產(chǎn)孢培養(yǎng)基的配制與效比分析
    光照對(duì)花生網(wǎng)斑病菌生長(zhǎng)、產(chǎn)孢及致病力的影響
    煙粉虱病原真菌IfB01菌株的鑒定及產(chǎn)孢條件優(yōu)化
    殼寡糖對(duì)番茄灰霉病菌的抑制作用
    欧美变态另类bdsm刘玥| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 国产精品无大码| 麻豆乱淫一区二区| 国产av码专区亚洲av| 国产成人a∨麻豆精品| a级片在线免费高清观看视频| 国产精品人妻久久久影院| 亚洲成人一二三区av| 天天操日日干夜夜撸| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 久久久久视频综合| 老熟女久久久| 亚洲精品,欧美精品| 国产精品偷伦视频观看了| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 亚洲精品,欧美精品| 久久人人97超碰香蕉20202| 亚洲国产av新网站| 欧美av亚洲av综合av国产av | 国产精品香港三级国产av潘金莲 | 1024视频免费在线观看| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 日韩av在线免费看完整版不卡| 久久久国产精品麻豆| 国产在线视频一区二区| 亚洲少妇的诱惑av| 曰老女人黄片| 久久久久久久久免费视频了| 亚洲欧洲国产日韩| 中文欧美无线码| 免费黄网站久久成人精品| 免费不卡黄色视频| 久久狼人影院| 青春草亚洲视频在线观看| 日韩一区二区视频免费看| 男女床上黄色一级片免费看| 国产精品一区二区在线不卡| 高清视频免费观看一区二区| 国产99久久九九免费精品| 久久精品人人爽人人爽视色| 亚洲国产最新在线播放| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 色婷婷久久久亚洲欧美| 母亲3免费完整高清在线观看| 少妇 在线观看| 国产精品一国产av| 亚洲专区中文字幕在线 | 在线免费观看不下载黄p国产| 国产精品久久久久久人妻精品电影 | 中文精品一卡2卡3卡4更新| 精品亚洲成国产av| 日本vs欧美在线观看视频| 在线观看一区二区三区激情| www.精华液| 深夜精品福利| 亚洲国产欧美网| 精品福利永久在线观看| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 国产极品天堂在线| 国产亚洲一区二区精品| 又大又黄又爽视频免费| 一个人免费看片子| 夫妻午夜视频| 亚洲国产日韩一区二区| 人妻人人澡人人爽人人| 日韩人妻精品一区2区三区| 另类精品久久| 精品一区二区免费观看| 美女午夜性视频免费| 中国国产av一级| 国产精品一区二区在线观看99| 在现免费观看毛片| 久久性视频一级片| 老司机靠b影院| 可以免费在线观看a视频的电影网站 | 国产午夜精品一二区理论片| xxxhd国产人妻xxx| 香蕉丝袜av| 丰满饥渴人妻一区二区三| 少妇人妻 视频| 日韩一区二区视频免费看| 免费观看性生交大片5| 久久人妻熟女aⅴ| 久久精品久久久久久久性| 亚洲国产av影院在线观看| 精品人妻在线不人妻| 午夜福利视频精品| 中文天堂在线官网| 青春草国产在线视频| 国产一区二区在线观看av| 成人午夜精彩视频在线观看| av在线播放精品| 人成视频在线观看免费观看| 久久久久久久大尺度免费视频| 久久久国产一区二区| 国产成人精品福利久久| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 搡老岳熟女国产| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 久久99一区二区三区| 老司机靠b影院| 美女扒开内裤让男人捅视频| 十八禁高潮呻吟视频| 国产精品 欧美亚洲| 欧美最新免费一区二区三区| 青春草国产在线视频| 中文字幕色久视频| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 黄片播放在线免费| 国产成人精品无人区| 嫩草影视91久久| 久久久久久久久免费视频了| 国产成人精品无人区| 亚洲精品一区蜜桃| 久久热在线av| 午夜福利网站1000一区二区三区| 韩国精品一区二区三区| 丰满迷人的少妇在线观看| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 国产 一区精品| 国产精品女同一区二区软件| 国产亚洲av高清不卡| 国产av一区二区精品久久| 满18在线观看网站| 国产男女内射视频| 一区二区三区乱码不卡18| 免费黄网站久久成人精品| videos熟女内射| 久久国产亚洲av麻豆专区| 国产成人精品在线电影| 黄色 视频免费看| 国产人伦9x9x在线观看| 日韩中文字幕视频在线看片| 国产精品女同一区二区软件| 欧美少妇被猛烈插入视频| 久久久久视频综合| 国产一区二区在线观看av| 少妇被粗大猛烈的视频| av免费观看日本| 国产成人精品福利久久| 欧美日韩亚洲高清精品| 精品少妇久久久久久888优播| 午夜日本视频在线| 午夜免费观看性视频| 亚洲国产精品成人久久小说| 亚洲精品乱久久久久久| 在线观看免费视频网站a站| 国产精品熟女久久久久浪| 桃花免费在线播放| 国产精品一国产av| 精品一区二区三区四区五区乱码 | 在线观看免费视频网站a站| 欧美av亚洲av综合av国产av | 波多野结衣一区麻豆| 午夜久久久在线观看| 久久精品人人爽人人爽视色| 悠悠久久av| 日韩成人av中文字幕在线观看| 国产精品偷伦视频观看了| 人妻一区二区av| 丝袜在线中文字幕| 久久久久久久精品精品| 69精品国产乱码久久久| 欧美日本中文国产一区发布| 国产一级毛片在线| 成人漫画全彩无遮挡| 亚洲精品,欧美精品| 中文字幕人妻丝袜一区二区 | 伦理电影大哥的女人| 嫩草影视91久久| 9191精品国产免费久久| 欧美日韩福利视频一区二区| 老汉色av国产亚洲站长工具| 欧美亚洲日本最大视频资源| 黄色怎么调成土黄色| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 不卡视频在线观看欧美| 欧美成人精品欧美一级黄| 一区二区三区四区激情视频| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频 | 久久久久精品性色| 亚洲欧洲日产国产| 丝袜人妻中文字幕| 久久av网站| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 亚洲成人手机| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 老司机亚洲免费影院| 一级片'在线观看视频| a级毛片在线看网站| 亚洲成人国产一区在线观看 | 99久久综合免费| 国产精品亚洲av一区麻豆 | 青青草视频在线视频观看| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 女人久久www免费人成看片| 亚洲少妇的诱惑av| 久久久久网色| 国产高清国产精品国产三级| 欧美日韩视频精品一区| 成人亚洲精品一区在线观看| 少妇精品久久久久久久| 日韩 亚洲 欧美在线| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 又大又爽又粗| 国产在线视频一区二区| 涩涩av久久男人的天堂| 亚洲国产精品成人久久小说| 制服人妻中文乱码| 一级,二级,三级黄色视频| 男女床上黄色一级片免费看| 亚洲美女搞黄在线观看| www日本在线高清视频| 久久影院123| 日本wwww免费看| 天天操日日干夜夜撸| 在线精品无人区一区二区三| 老熟女久久久| 日韩 亚洲 欧美在线| 一区二区三区四区激情视频| 国产97色在线日韩免费| 亚洲精品自拍成人| 岛国毛片在线播放| 在线观看一区二区三区激情| 日韩一区二区三区影片| 国产成人a∨麻豆精品| 成人三级做爰电影| 哪个播放器可以免费观看大片| 人体艺术视频欧美日本| 午夜免费男女啪啪视频观看| 亚洲精品国产av蜜桃| 亚洲一区中文字幕在线| 日本av手机在线免费观看| 亚洲成国产人片在线观看| 只有这里有精品99| 叶爱在线成人免费视频播放| 久热这里只有精品99| 国产爽快片一区二区三区| 亚洲国产精品成人久久小说| 天美传媒精品一区二区| 亚洲精品乱久久久久久| 亚洲精品,欧美精品| 精品国产乱码久久久久久男人| 久久久欧美国产精品| 国产在线一区二区三区精| 狂野欧美激情性bbbbbb| 亚洲国产欧美网| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 国产成人91sexporn| 免费人妻精品一区二区三区视频| 国产av精品麻豆| 欧美黄色片欧美黄色片| 日本91视频免费播放| 久久久久久免费高清国产稀缺| 亚洲综合精品二区| 色婷婷久久久亚洲欧美| 18禁国产床啪视频网站| 在线观看免费日韩欧美大片| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 晚上一个人看的免费电影| 国产精品嫩草影院av在线观看| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 国产一卡二卡三卡精品 | 欧美久久黑人一区二区| 亚洲精品乱久久久久久| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频 | 两个人免费观看高清视频| 久久精品国产亚洲av涩爱| 亚洲第一区二区三区不卡| 国产一区二区三区av在线| 国产精品一区二区在线不卡| 国产精品久久久久久精品电影小说| 久久久久久人妻| 国产野战对白在线观看| 999久久久国产精品视频| 热re99久久精品国产66热6| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 亚洲国产最新在线播放| 亚洲 欧美一区二区三区| 亚洲情色 制服丝袜| 一级毛片电影观看| 2018国产大陆天天弄谢| 两性夫妻黄色片| 这个男人来自地球电影免费观看 | 国产片内射在线| 亚洲综合色网址| 国产乱来视频区| 国产成人精品在线电影| 亚洲国产中文字幕在线视频| 老司机靠b影院| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 亚洲欧洲日产国产| 亚洲国产成人一精品久久久| 国产福利在线免费观看视频| 综合色丁香网| 亚洲精品国产av蜜桃| av.在线天堂| 久久午夜综合久久蜜桃| 亚洲欧美一区二区三区久久| 成年动漫av网址| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 日本欧美国产在线视频| 亚洲国产精品999| 少妇人妻 视频| 曰老女人黄片| 欧美日韩综合久久久久久| 国产视频首页在线观看| 国产乱人偷精品视频| 精品福利永久在线观看| 日日摸夜夜添夜夜爱| 天天影视国产精品| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 亚洲专区中文字幕在线 | 又黄又粗又硬又大视频| 国产精品久久久久久久久免| 亚洲av电影在线进入| 久久这里只有精品19| 最近2019中文字幕mv第一页| 黑丝袜美女国产一区| 中文字幕最新亚洲高清| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 一二三四中文在线观看免费高清| 日日啪夜夜爽| 国产精品国产三级专区第一集| 欧美乱码精品一区二区三区| 久久天堂一区二区三区四区| 免费高清在线观看视频在线观看| 国产精品免费大片| 下体分泌物呈黄色| 深夜精品福利| 在线精品无人区一区二区三| 久久精品国产亚洲av涩爱| 女人精品久久久久毛片| 欧美成人精品欧美一级黄| av网站免费在线观看视频| 亚洲情色 制服丝袜| 亚洲精品一区蜜桃| 天天操日日干夜夜撸| 一区二区三区四区激情视频| 在线观看免费视频网站a站| av福利片在线| 久热爱精品视频在线9| 大陆偷拍与自拍| xxx大片免费视频| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 中文天堂在线官网| 日韩欧美精品免费久久| 黄片小视频在线播放| 国产男人的电影天堂91| 亚洲av成人不卡在线观看播放网 | 乱人伦中国视频| 18在线观看网站| 老司机亚洲免费影院| 不卡视频在线观看欧美| 国产97色在线日韩免费| 在现免费观看毛片| 波野结衣二区三区在线| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 视频区图区小说| 亚洲精品成人av观看孕妇| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 日日摸夜夜添夜夜爱| 亚洲国产精品999| 少妇人妻久久综合中文| 蜜桃国产av成人99| av有码第一页| 成人三级做爰电影| 韩国精品一区二区三区| 国产一区二区三区av在线| 日韩免费高清中文字幕av| 久久精品人人爽人人爽视色| 久久影院123| 青春草视频在线免费观看| 日本vs欧美在线观看视频| 999精品在线视频| 久久久久久久久久久免费av| 一级片'在线观看视频| 久久久久人妻精品一区果冻| 妹子高潮喷水视频| 母亲3免费完整高清在线观看| 大片免费播放器 马上看| 男人添女人高潮全过程视频| 少妇被粗大猛烈的视频| 狂野欧美激情性bbbbbb| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 国产精品 欧美亚洲| 飞空精品影院首页| 永久免费av网站大全| 色视频在线一区二区三区| 十八禁高潮呻吟视频| 日韩av在线免费看完整版不卡| 日韩免费高清中文字幕av| 亚洲,欧美精品.| 久久久久视频综合| 妹子高潮喷水视频| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 亚洲精品国产色婷婷电影| 国产日韩欧美亚洲二区| 大香蕉久久成人网| 亚洲精品国产av成人精品| 午夜福利免费观看在线| svipshipincom国产片| 精品亚洲成a人片在线观看| 午夜av观看不卡| 美女国产高潮福利片在线看| 亚洲成色77777| 伦理电影免费视频| 国产野战对白在线观看| 天堂中文最新版在线下载| 免费av中文字幕在线| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 久久99精品国语久久久| 五月天丁香电影| 夫妻性生交免费视频一级片| 最近中文字幕高清免费大全6| 免费黄频网站在线观看国产| 久久久亚洲精品成人影院| 91精品伊人久久大香线蕉| 国产亚洲精品第一综合不卡| 1024视频免费在线观看| 91精品伊人久久大香线蕉| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 中文字幕最新亚洲高清| 免费黄网站久久成人精品| 色精品久久人妻99蜜桃| 9191精品国产免费久久| 久久毛片免费看一区二区三区| 成人国产麻豆网| 欧美日韩一级在线毛片| 欧美日韩精品网址| 久久国产精品大桥未久av| 黄色怎么调成土黄色| 国产午夜精品一二区理论片| 在线观看三级黄色| 丁香六月天网| 视频区图区小说| 黄色 视频免费看| 又大又爽又粗| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 最近最新中文字幕大全免费视频 | 天美传媒精品一区二区| 1024香蕉在线观看| svipshipincom国产片| 国产一级毛片在线| 久久精品亚洲av国产电影网| 韩国av在线不卡| 午夜日本视频在线| 多毛熟女@视频| 无遮挡黄片免费观看| 久久久久国产一级毛片高清牌| 欧美av亚洲av综合av国产av | 无遮挡黄片免费观看| 久久人人爽人人片av| 丝袜喷水一区| 国产成人免费观看mmmm| 亚洲图色成人| 国产精品 国内视频| 国产片特级美女逼逼视频| 高清视频免费观看一区二区| 丰满乱子伦码专区| 午夜免费观看性视频| 亚洲精品乱久久久久久| 国产免费又黄又爽又色| 一边亲一边摸免费视频| 一区福利在线观看| 精品一区在线观看国产| 高清在线视频一区二区三区| 成人国产麻豆网| 高清在线视频一区二区三区| 最新在线观看一区二区三区 | 亚洲欧美清纯卡通| 欧美xxⅹ黑人| 在现免费观看毛片| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 免费日韩欧美在线观看| 51午夜福利影视在线观看| 国产精品嫩草影院av在线观看| 亚洲精品aⅴ在线观看| 下体分泌物呈黄色| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 日韩 亚洲 欧美在线| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o | 青春草国产在线视频| 国产男女超爽视频在线观看| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 欧美97在线视频| 操出白浆在线播放| 亚洲国产成人一精品久久久| av免费观看日本| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 久久鲁丝午夜福利片| 国产精品亚洲av一区麻豆 | 老司机影院毛片| 亚洲国产精品一区三区| 欧美精品高潮呻吟av久久| 亚洲免费av在线视频| 高清在线视频一区二区三区| 中文字幕人妻熟女乱码| 免费黄网站久久成人精品| 国产麻豆69| 伊人久久国产一区二区| 国产成人免费观看mmmm| 少妇精品久久久久久久| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 久久久国产欧美日韩av| 日韩中文字幕视频在线看片| 91成人精品电影| 操美女的视频在线观看| 超碰97精品在线观看| 日本一区二区免费在线视频| 男人舔女人的私密视频| 在线观看免费午夜福利视频| 另类精品久久| 一级,二级,三级黄色视频| 97精品久久久久久久久久精品| 免费高清在线观看日韩| 国产成人啪精品午夜网站| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 777米奇影视久久| 飞空精品影院首页| 久久久久精品久久久久真实原创| 中文字幕制服av| 亚洲熟女精品中文字幕| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 精品国产乱码久久久久久男人| 9色porny在线观看| 久久毛片免费看一区二区三区| 国产亚洲最大av| 亚洲成人国产一区在线观看 | 国产在线免费精品| 高清不卡的av网站| 亚洲人成77777在线视频| av电影中文网址| 久久99一区二区三区| 国产黄色视频一区二区在线观看| 国产精品久久久久久人妻精品电影 | 高清不卡的av网站| 亚洲精品一二三| 黄片播放在线免费| 亚洲在久久综合| 久久国产亚洲av麻豆专区| 国产成人精品福利久久| 色播在线永久视频| 国产福利在线免费观看视频| 无限看片的www在线观看| 国产成人精品无人区| www日本在线高清视频| 麻豆av在线久日| 秋霞在线观看毛片| 青草久久国产| 婷婷成人精品国产| 国产极品粉嫩免费观看在线| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 可以免费在线观看a视频的电影网站 | 成人亚洲精品一区在线观看| 亚洲欧美一区二区三区久久| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 国产精品久久久久久精品电影小说| 1024视频免费在线观看| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 日本vs欧美在线观看视频| 青春草视频在线免费观看| 国产人伦9x9x在线观看| 啦啦啦 在线观看视频| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 亚洲第一区二区三区不卡| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 男女之事视频高清在线观看 | 精品免费久久久久久久清纯 | 一级毛片我不卡| 男女免费视频国产| 亚洲欧美激情在线| 日本色播在线视频| 久久久国产欧美日韩av| 一级毛片电影观看| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 国产免费一区二区三区四区乱码| 成年美女黄网站色视频大全免费| 久久久久国产精品人妻一区二区| 91国产中文字幕| 99久久人妻综合| 啦啦啦在线观看免费高清www| 免费在线观看完整版高清| 99久久综合免费| 人成视频在线观看免费观看| 老司机靠b影院| 制服诱惑二区| 亚洲成人免费av在线播放| 国产成人啪精品午夜网站| 十八禁网站网址无遮挡| 亚洲精品国产av成人精品| 一级,二级,三级黄色视频| 国产成人欧美| 国产一区亚洲一区在线观看| 两个人免费观看高清视频| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 国产在线免费精品| 一本大道久久a久久精品| 精品福利永久在线观看| 在线观看www视频免费| 99热国产这里只有精品6| 亚洲欧美色中文字幕在线| 国产人伦9x9x在线观看|