lncRNA CYTOR/miR-193b-3p/HMGB1軸調(diào)控T細(xì)胞急性淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞MOLT-4增殖與凋亡的作用研究

楊春燕, 王海燕, 黃 倩, 程盼盼, 李 玲, 陳璐璐, 劉?；? 張 顥

(濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院 血液科, 山東 濟(jì)寧, 272001)

T細(xì)胞急性淋巴細(xì)胞白血病(T-ALL)是急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)的一種亞型，約占ALL的15 %[1]。目前，隨著強(qiáng)化化療方案的廣泛應(yīng)用, T-ALL患者預(yù)后結(jié)局均有所改善，但部分患者仍存在預(yù)后結(jié)局不佳的現(xiàn)象[2]。因此，亟需尋找治療T-ALL的新方法。lncRNA CYTOR屬于長(zhǎng)鏈非編碼RNA(lncRNA)家族成員，參與調(diào)控多種腫瘤細(xì)胞的惡性表型。研究[3]顯示, lncRNA CYTOR在肝癌組織中表達(dá)增加，其通過競(jìng)爭(zhēng)性吸附miR-125b-5p并上調(diào)KIAA1522的表達(dá)，促進(jìn)肝癌細(xì)胞增殖和細(xì)胞周期進(jìn)程，并阻礙肝癌細(xì)胞凋亡，促進(jìn)肝癌的發(fā)展進(jìn)程。lncRNA CYTOR在胰腺癌中表達(dá)升高，敲低lncRNA CYTOR可通過靶向miR-205-5p/CDK6軸阻礙體外胰腺癌細(xì)胞增殖和遷移，同時(shí)抑制體內(nèi)腫瘤生長(zhǎng), lncRNA CYTOR可能是胰腺癌的潛在治療靶點(diǎn)[4]。然而目前尚未有研究闡明lncRNA CYTOR對(duì)T-ALL細(xì)胞增殖、凋亡的影響與機(jī)制。

根據(jù)Starbase靶基因預(yù)測(cè)結(jié)果表明, lncRNA CYTOR或許與miR-193b-3p有靶向結(jié)合關(guān)系，高遷移率族蛋白1(HMGB1)可能是miR-193b-3p的靶基因。miR-193b-3p可通過靶向MYB抑制T-ALL細(xì)胞的惡性表型，為T-ALL的治療提供了潛在靶點(diǎn)[5]。HMGB1是一種高度保守的蛋白質(zhì)，其編碼基因位于染色體13q12。HMGB1在ALL中的表達(dá)顯著高于健康者，其可能通過誘導(dǎo)自噬、DNA損傷修復(fù)等方式促進(jìn)ALL化療耐藥[6]。本研究主要觀察了lncRNA CYTOR/miR-193b-3p/HMGB1軸對(duì)T-ALL細(xì)胞增殖和凋亡的影響，以期為該類患者提供新的靶向治療依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 細(xì)胞和試劑

人正常骨髓基質(zhì)細(xì)胞系HS-5購于上海雅吉生物科技有限公司; T-ALL細(xì)胞系(CCRF-CEM、MOLT-4、CEM-C1)購于中國科學(xué)院上海細(xì)胞庫; RNA抽提試劑盒、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒購于大連寶生物; LipofectamineTM2000試劑盒、BCA蛋白檢測(cè)試劑盒和雙熒光素酶活性檢測(cè)試劑盒、Annexin V-FITC/PI購于北京索萊寶; 胎牛血清(FBS)購于浙江天杭生物科技股份有限公司; PCR引物、si-lncRNA CYTOR、si-HMGB1、si-NC、miR-193b-3p 模擬物和抑制劑、模擬對(duì)照序列和抑制劑陰性對(duì)照序列由上海生工公司合成; 兔抗人HMGB1、B淋巴細(xì)胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相關(guān)x蛋白(Bax)、活化的半胱氨酸蛋白酶3(cleaved-caspase3)和β-actin抗體，購于中國Abcam公司。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng): 將人正常骨髓基質(zhì)細(xì)胞系HS-5和T-ALL細(xì)胞系(CCRF-CEM、MOLT-4、CEM-C1)復(fù)蘇，均用含10% FBS的RPMI 1640培養(yǎng)液于普通培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)密度為90%時(shí)，傳代培養(yǎng)。

1.2.2 逆轉(zhuǎn)錄-實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)(RT-qPCR)檢測(cè)lncRNA CYTOR、miR-193b-3p和HMGB1mRNA表達(dá): 將對(duì)數(shù)期HS-5和T-ALL細(xì)胞系(CCRF-CEM、MOLT-4、CEM-C1)均接種至6孔板中(1.0×105個(gè)/孔)，培養(yǎng)24 h。提取總RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA后，行PCR擴(kuò)增。引物序列: lncRNA CYTOR上游5′-AGAATGAAGGCTGAGGTGTG-3′, 下游5′-CAGCGACCATCCAGTCATTTA-3′; miR-193b-3p上游5′-AAAGTCCCGCTGTCGTA TCC-3′, 下游5′-GTATCCAGTGCGTGTCGTGG-3′;HMGB1上游5′-TATGGCAAAAGCGG ACAAGG-3′, 下游5′-CTTCGCAACATCACCAATGGA-3′;GAPDH上游5′-GGAGCGAGATC CCTCCAAAAT-3′, 下游5′-GGCTGTTGTCATACTTCTCATGG-3′;U6上游5′-CTCGCTTCG GCAGCACA-3′, 下游5′-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3′。采用2-△△Ct法計(jì)算lncRNA CYTOR和HMGB1mRNA相對(duì)GAPDH及miR-193b-3p相對(duì)U6的表達(dá)量。

1.2.3 細(xì)胞轉(zhuǎn)染: 將處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的MOLT-4細(xì)胞接種至6孔板中，以密度為1.0×105個(gè)/孔進(jìn)行接種，孵育24 h后，采用LipofectamineTM2000脂質(zhì)體法分別轉(zhuǎn)染si-NC(si-NC組)、si-CYTOR(si-CYTOR組)、miR-NC(miR-NC組)、miR-193b-3p mimics(miR-193b-3p組)、si-HMGB1(si-HMGB1組)，共轉(zhuǎn)染si-CYTOR與anti-miR-NC(si-CYTOR+anti-miR-NC組)、共轉(zhuǎn)染si-CYTOR與anti-miR-193b-3p(si-CYTOR+anti-miR-193b-3p組)、共轉(zhuǎn)染si-CYTOR與pcDNA(si-CYTOR+pcDNA組)和共轉(zhuǎn)染si-CYTOR與pcDNA-HMGB1(si-CYTOR+pcDNA-HMGB1組)。12 h后更換培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)24 h后收集細(xì)胞，采用RT-qPCR法檢測(cè)細(xì)胞中l(wèi)ncRNA CYTOR或miR-193b-3p表達(dá)，采用蛋白質(zhì)印跡(Western blot)法檢測(cè)細(xì)胞中HMGB1蛋白表達(dá)。

1.2.4 CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖: 將“1.2.3”中轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞分別接種至96孔板中，以2.5×104個(gè)/孔的密度進(jìn)行接種，在48 h后加入CCK-8 10 μL并繼續(xù)培養(yǎng)2 h, 用波長(zhǎng)為450 nm的酶標(biāo)儀(λ=450 nm)測(cè)定光密度(OD)值。

1.2.5 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡: 將“1.2.3”中轉(zhuǎn)染后細(xì)胞分別接種至6孔板中，以1.0×105個(gè)/孔的密度進(jìn)行接種，并于48 h進(jìn)行收集。加500 μL結(jié)合緩沖液，重懸細(xì)胞。再依次加入Annexin V-FITC與PI各5 μL, 混勻后靜置10 min, 采用貝克曼FC500流式細(xì)胞儀及Cellauest軟件對(duì)細(xì)胞凋亡情況進(jìn)行檢測(cè)。

1.2.6 Western blot檢測(cè)HMGB1、Bcl-2、Bax、cleaved-caspase3蛋白表達(dá): 于6孔板中接種2.5 mL“1.2.3”中各組細(xì)胞懸液(5.0×104個(gè)/mL), 培養(yǎng)24 h后，將RIPA裂解液(400 μL)加入到收集到的細(xì)胞中，并對(duì)細(xì)胞總蛋白進(jìn)行提取。采用BCA實(shí)驗(yàn)方法測(cè)定各組細(xì)胞膠原蛋白質(zhì)的細(xì)胞濃度，行十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE, 40 μg蛋白)后轉(zhuǎn)至聚偏二氟乙烯(PVDF)膜，用5%脫脂牛奶室溫封閉2 h。于4 ℃冰箱中，分別用稀釋度均為1∶1 000的HMGB1、Bcl-2、Bax、cleaved-caspase3、β-actin一抗孵育過夜，洗膜后，再置于稀釋度為1∶2 000的山羊抗兔二抗中，室溫孵育1 h。1 h后向細(xì)胞內(nèi)滴加ECL顯影，應(yīng)用Image J軟件分析各分組細(xì)胞的總條帶膠原蛋白細(xì)胞灰度的統(tǒng)計(jì)數(shù)值及HMGB1、Bcl-2、Bax、cleaved-caspase3相對(duì)β-actin的表達(dá)量。

1.2.7 雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn): 根據(jù)Starbase軟件預(yù)測(cè)的結(jié)合位點(diǎn)，分別設(shè)計(jì)并合成lncRNA CYTOR、HMGB1的野生型熒光素酶載體(WT-CYTOR、WT-HMGB1)及突變型熒光素酶載體(MUT-CYTOR、MUT-HMGB1)。將MOLT-4細(xì)胞接種至6孔板中，以1.0×105個(gè)/孔的密度接種并培育24 h, 培育完畢采用LipofectamineTM2000脂質(zhì)體法，轉(zhuǎn)染miR-193b-3p mimics與WT-CYTOR或WT-HMGB1、miR-NC與WT-CYTOR或WT-HMGB1、miR-193b-3p mimics與MUT-CYTOR或MUT-HMGB1、miR-NC與MUT-CYTOR或MUT-HMGB1。12 h后更換培養(yǎng)液。繼續(xù)培養(yǎng)24 h并裂解細(xì)胞。將裂解液放入離心機(jī)中，設(shè)置離心參數(shù)(3 500轉(zhuǎn)/min離心5 min, 半徑13.5 cm)后，檢測(cè)上清熒光素酶活性，結(jié)果以螢火蟲與海腎的熒光強(qiáng)度比值表示。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié) 果

2.1 T-ALL細(xì)胞系中l(wèi)ncRNA CYTOR、miR-193b-3p和HMGB1表達(dá)

與人正常骨髓基質(zhì)細(xì)胞系HS-5比較, T-ALL細(xì)胞系(CCRF-CEM、MOLT-4、CEM-C1)中l(wèi)ncRNA CYTOR表達(dá)升高, miR-193b-3p表達(dá)降低,HMGB1mRNA及HMGB1蛋白表達(dá)升高，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。MOLT-4細(xì)胞各檢測(cè)指標(biāo)與HS-5細(xì)胞差異最顯著，因此，選擇MOLT-4細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。見圖1、表1。

表1 T-ALL細(xì)胞系中l(wèi)ncRNA CYTOR、miR-193b-3p和HMGB1表達(dá)

2.2 下調(diào)lncRNA CYTOR對(duì)T-ALL細(xì)胞系MOLT-4增殖和凋亡的影響

si-NC組和si-CYTOR組MOLT-4細(xì)胞中l(wèi)ncRNA CYTOR表達(dá)量分別為(1.00±0.05)、(0.22±0.03), 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=40.13,P<0.05), 說明CYTOR干擾載體構(gòu)建成功。與si-NC組相比, si-CYTOR組Bcl-2蛋白表達(dá)降低, Bax、cleaved-caspase3蛋白表達(dá)升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05); 與si-NC組相比, si-CYTOR組MOLT-4細(xì)胞增殖活性降低，凋亡率升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見圖2、表2。

表2 下調(diào)lncRNA CYTOR對(duì)MOLT-4細(xì)胞增殖和凋亡的影響

2.3 上調(diào)miR-193b-3p對(duì)T-ALL細(xì)胞系MOLT-4增殖和凋亡的影響

miR-NC組、miR-193b-3p組MOLT-4細(xì)胞中miR-193b-3p表達(dá)量分別為(1.00±0.02)、(2.63±0.14), 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=34.58,P<0.05), 說明過表達(dá)miR-193b-3p成功。與miR-NC組相比, miR-193b-3p組Bcl-2蛋白表達(dá)降低, Bax、cleaved-caspase3蛋白表達(dá)升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05); 與miR-NC組相比, miR-193b-3p組MOLT-4細(xì)胞增殖活性降低，凋亡率升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見圖3、表3。

表3 上調(diào)miR-193b-3p對(duì)MOLT-4細(xì)胞增殖和凋亡的影響

2.4 下調(diào)HMGB1對(duì)MOLT-4增殖和凋亡的影響

si-NC組、si-HMGB1組MOLT-4細(xì)胞中HMGB1蛋白表達(dá)量分別為(0.95±0.10)、(0.19±0.03), 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=21.84,P<0.05), 說明HMGB1干擾載體構(gòu)建成功。與si-NC組相比, si-HMGB1組的Bcl-2蛋白表達(dá)降低, Bax、cleaved-caspase3蛋白表達(dá)升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05); 與si-NC組相比, si-HMGB1組MOLT-4細(xì)胞增殖活性降低，凋亡率升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見圖4、表4。

表4 下調(diào)HMGB1對(duì)MOLT-4細(xì)胞增殖和凋亡的影響

2.5 lncRNA CYTOR靶向結(jié)合miR-193b-3p調(diào)控HMGB1表達(dá)

miR-193b-3p與lncRNA CYTOR、HMGB1的結(jié)合位點(diǎn)見圖5A、5B。與共轉(zhuǎn)染miR-NC與WT-CYTOR或WT-HMGB1的MOLT-4細(xì)胞比較，共轉(zhuǎn)染miR-193b-3p mimics與WT-CYTOR或WT-HMGB1的MOLT-4細(xì)胞熒光素酶活性降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05); 與共轉(zhuǎn)染miR-NC與MUT-CYTOR或MUT-HMGB1的MOLT-4細(xì)胞比較，共轉(zhuǎn)染miR-193b-3p mimics與MUT-CYTOR或MUT-HMGB1的MOLT-4細(xì)胞熒光素酶活性，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05), 見表5。此外, si-CYTOR組MOLT-4細(xì)胞中HMGB1蛋白表達(dá)量為(0.25±0.05), 低于si-NC組的(0.94±0.10), 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=18.52,P<0.05);miR-193b-3p組MOLT-4細(xì)胞中HMGB1蛋白表達(dá)量為(0.21±0.03), 低于miR-NC組的(0.97±0.07), 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=29.94,P<0.05), 見圖5C。

表5 雙熒光素酶活性檢測(cè)結(jié)果

2.6 下調(diào)miR-193b-3p逆轉(zhuǎn)lncRNA CYTOR敲低對(duì)MOLT-4細(xì)胞增殖和凋亡的影響

si-CYTOR組、si-CYTOR+anti-miR-NC組、si-CYTOR+anti-miR-193b-3p組MOLT-4細(xì)胞中miR-193b-3p表達(dá)量分別為(2.22±0.21)、(2.20±0.17)、(0.95±0.09), 組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=176.22,P<0.05), 說明MOLT-4細(xì)胞中miR-193b-3p表達(dá)下調(diào)。相較于si-CYTOR組和si-CYTOR+anti-miR-NC組, si-CYTOR+anti-miR-193b-3p組MOLT-4細(xì)胞增殖活性及HMGB1、Bcl-2蛋白表達(dá)升高，而凋亡率和Bax、cleaved-caspase3蛋白表達(dá)降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。si-CYTOR組與si-CYTOR+anti-miR-NC組各檢測(cè)指標(biāo)比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見圖6、表6。

表6 下調(diào)miR-193b-3p逆轉(zhuǎn)lncRNA CYTOR敲低對(duì)MOLT-4細(xì)胞增殖和凋亡的影響

2.7 上調(diào) HMGB1逆轉(zhuǎn)lncRNA CYTOR敲低對(duì)MOLT-4細(xì)胞增殖和凋亡的影響

與si-CYTOR組、si-CYTOR+pcDNA組比較, si-CYTOR+ pcDNA-HMGB1組中細(xì)胞增殖活性和HMGB1、Bcl-2蛋白水平升高，而細(xì)胞凋亡率、Bax、cleaved-caspase3蛋白水平降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見圖7、表7。

表7 上調(diào) HMGB1逆轉(zhuǎn)lncRNA CYTOR敲低對(duì)MOLT-4細(xì)胞增殖和凋亡的影響

3 討 論

T-ALL的發(fā)生發(fā)展受多種基因分子的調(diào)控，探究T-ALL中異常表達(dá)的基因及其相關(guān)機(jī)制，對(duì)發(fā)現(xiàn)新的治療靶點(diǎn)具有重要意義。lncRNA和miRNA是不同的非編碼RNA, lncRNA在miRNA分子海綿中進(jìn)行調(diào)控，進(jìn)而影響腫瘤細(xì)胞的增殖和凋亡[7]。研究[8]顯示, T-ALL發(fā)病過程由多種IncRNA共同參與。敲除lncRNA ARIEL可抑制體外T-ALL細(xì)胞增殖，并阻礙小鼠異種移植瘤生長(zhǎng); lncRNA ZFAS1可競(jìng)爭(zhēng)性吸附miR-150, 進(jìn)而上調(diào)ST6GAL1的表達(dá)促進(jìn)T-ALL細(xì)胞對(duì)化療藥物阿霉素的耐藥性[9]; lncRNA NEAT1在T-ALL細(xì)胞中表達(dá)升高，敲低其表達(dá)可抑制T-ALL細(xì)胞增殖，其作用機(jī)制與靶向miR-146b-5p/NOTCH1軸有關(guān)[10]。T-ALL中異常表達(dá)的lncRNA為其治療提供潛在靶點(diǎn)。

lncRNA CYTOR作為lncRNA的一種類型，能夠?qū)Σ煌[瘤的惡性表型及耐藥性進(jìn)行調(diào)控。研究[11]顯示, lncRNA CYTOR可通過靶向miR-195促進(jìn)非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)細(xì)胞增殖和侵襲，并誘導(dǎo)NSCLC細(xì)胞的放射抗性，其有可能被用作NSCLC治療的分子靶點(diǎn); lncRNA CYTOR在耐他莫昔芬的乳腺癌組織中呈高表達(dá)，其可增強(qiáng)乳腺癌細(xì)胞對(duì)他莫昔芬的耐藥性[12]。本研究結(jié)果顯示, lncRNA CYTOR在T-ALL細(xì)胞系中的表達(dá)顯著高于人正常骨髓基質(zhì)細(xì)胞系HS-5, 提示其可能也促進(jìn)T-ALL的發(fā)展進(jìn)程; 通過下調(diào)T-ALL細(xì)胞系中l(wèi)ncRNA CYTOR表達(dá)發(fā)現(xiàn)，下調(diào)lncRNA CYTOR可有效降低T-ALL細(xì)胞系增殖活性，并誘導(dǎo)其凋亡，這提示lncRNA CYTOR也有可能成為T-ALL治療的分子靶點(diǎn)。

本研究結(jié)果顯示, Bax/Bcl-2能夠調(diào)控細(xì)胞凋亡。正常生理狀態(tài)下, Bcl-2與Bax形成異源二聚體，抑制Bax的功能。當(dāng)Bcl-2表達(dá)減少時(shí), Bax被釋放，通過BH3結(jié)構(gòu)域形成同源二聚體，增加線粒體膜的通透性，并將細(xì)胞色素C釋放于細(xì)胞質(zhì)，產(chǎn)生誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用[13]。此外下調(diào)lncRNA CYTOR, T-ALL細(xì)胞系中Bcl-2蛋白表達(dá)減少, Bax蛋白表達(dá)增加，提示lncRNA CYTOR可能通過間接調(diào)控Bax/Bcl-2影響T-ALL細(xì)胞系凋亡。

本研究證實(shí)了lncRNA CYTOR可競(jìng)爭(zhēng)性吸附miR-193b-3p, 且下調(diào)lncRNA CYTOR可促進(jìn)T-ALL細(xì)胞系中miR-193b-3p的表達(dá)。miR-193b-3p作為miRNA的一員，對(duì)多種腫瘤的發(fā)展過程具有重要作用。研究[14-17]顯示, miR-193b-3p在舌鱗狀細(xì)胞癌、胃癌等腫瘤中呈低表達(dá)，上調(diào)miR-193b-3p可抑制腫瘤細(xì)胞的惡性表型。本研究顯示, miR-193b-3p在T-ALL細(xì)胞中表達(dá)顯著較低，上調(diào)miR-193b-3p可有效阻礙T-ALL細(xì)胞增殖，并誘導(dǎo)其凋亡，這提示miR-193b-3p對(duì)T-ALL的發(fā)展起抑制作用; 此外，下調(diào)miR-193b-3p可逆轉(zhuǎn)下調(diào)lncRNA CYTOR對(duì)T-ALL細(xì)胞系增殖的抑制作用及凋亡促進(jìn)作用，這提示lncRNA CYTOR可能通過競(jìng)爭(zhēng)性吸附miR-193b-3p來調(diào)控T-ALL細(xì)胞系增殖和凋亡。

HMGB1屬于細(xì)胞核內(nèi)的一種非組蛋白染色體結(jié)合蛋白，在哺乳動(dòng)物組織及細(xì)胞中普遍存在，參與足細(xì)胞分化、遷移及腫瘤耐藥等多種生理或病理過程。研究[18]顯示，過表達(dá)miR-142-3p可通過靶向抑制HMGB1增強(qiáng)乳腺癌細(xì)胞對(duì)化療藥物阿霉素的敏感性, miR-142-3p/HMGB1軸可能為改善乳腺癌耐藥性提供了新靶點(diǎn)。miR-1179的過表達(dá)可通過靶向抑制HMGB1阻礙胃癌細(xì)胞增殖和侵襲[19]; lncRNA DSCAM-AS1可通過競(jìng)爭(zhēng)性吸附miR-577, 上調(diào)HMGB1的表達(dá)促進(jìn)NSCLC細(xì)胞增殖和侵襲，進(jìn)而促進(jìn)NSCLC的發(fā)展進(jìn)程[20]。HMGB1在白血病中的作用也被廣泛關(guān)注。研究[21]顯示, HMGB1在ALL患者血清中呈高表達(dá)，且與患者分期及分型密切相關(guān); 復(fù)發(fā)ALL患者血清中HMGB1水平顯著高于完全緩解患者，血清HMGB1水平可作為ALL預(yù)后評(píng)估的生物學(xué)標(biāo)志物[22]。本研究結(jié)果顯示, T-ALL細(xì)胞系中HMGB1呈高表達(dá)，下調(diào)其表達(dá)可抑制T-ALL細(xì)胞系增殖，并促進(jìn)細(xì)胞凋亡，說明HMGB1促進(jìn)T-ALL的發(fā)展進(jìn)程，提示其可作為T-ALL的治療靶點(diǎn)。同時(shí)，本研究結(jié)果顯示，下調(diào)lncRNA CYTOR或上調(diào)miR-193b-3p均可抑制T-ALL細(xì)胞系中HMGB1蛋白表達(dá)，而下調(diào)miR-193b-3p逆轉(zhuǎn)了下調(diào)lncRNA CYTOR對(duì)T-ALL細(xì)胞系中HMGB1蛋白表達(dá)的抑制作用，進(jìn)一步說明lncRNA CYTOR可靶向miR-193b-3p正向調(diào)控HMGB1表達(dá)，提示其通過靶向miR-193b-3p/HMGB1軸來影響T-ALL細(xì)胞系增殖和凋亡。

綜上所述, lncRNA CYTOR在T-ALL細(xì)胞系中的表達(dá)明顯升高，下調(diào)其表達(dá)可有效阻礙T-ALL細(xì)胞系增殖，并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，其可能通過靶向miR-193b-3p/HMGB1軸發(fā)揮作用，或可成為治療T-ALL的分子靶點(diǎn)。