仙鶴草活性成分的提取及其抗腫瘤作用的研究進(jìn)展

胡俊峰 陳 濤

(三峽大學(xué) 醫(yī)學(xué)院， 湖北 宜昌 443002)

仙鶴草俗名龍芽草、老鶴嘴、石打穿等，最初記載于《圖經(jīng)本草》，來源于薔薇科植物龍芽草AgrimoniapilosaLedeb.的干燥地上部分，廣泛分布于我國大部分地區(qū)，臨床上應(yīng)用較多[1]。藥理研究表明，仙鶴草在抗腫瘤、抗氧化、降血糖等方面有著良好效果[2-3]，其中抗腫瘤作用相較于其他作用更為突出，臨床上可用于治療宮頸癌、肺癌、胰腺癌等多種腫瘤疾病，但較多用于肺癌的治療[4]。

1 仙鶴草活性成分的提取

近年來，通過對仙鶴草活性成分的研究，發(fā)現(xiàn)仙鶴草全草中含黃酮類化合物、間苯三酚衍生物、多糖、鞣質(zhì)等化合物[5]。

1.1 黃酮類成分

黃酮類化合物具有多種重要的藥理活性，在抗氧化、抗腫瘤、降血脂等方面都有一定的應(yīng)用[6]。黃酮類化合物的提取一般采用溶劑提取法、堿提酸沉法和炭粉吸附法。仙鶴草全草含有蘆丁、仙鶴草內(nèi)酯和芹菜素等多種黃酮。葉春林等[7]通過響應(yīng)面法得出仙鶴草總黃酮最佳浸提工藝為提取時間100 min、提取溫度100℃、料液比1∶15、乙醇濃度30%，浸提率達(dá)9.92%，相較于其他方法，此法提取得率較高。蔣志華等[8]采用響應(yīng)面法得出在乙醇濃度為72%、料液比為1∶25、溫度為60℃、提取時間為20 min的條件下為超聲提取總黃酮的最佳工藝，得率為9.02%，采用此法操作較為簡單，適于工藝生產(chǎn)。

1.2 間苯三酚衍生物

據(jù)研究顯示，仙鶴草中的間苯三酚衍生物(鶴草酚)具有良好的抗腫瘤作用和一定的細(xì)胞毒性[9]。姜曉姝等[10]采用正交試驗(yàn)得出當(dāng)乙醇濃度為60%、料液比為1∶10、超聲溫度為70℃、超聲時間為30 min時為超聲提取鶴草酚的最佳工藝，具有快速、簡便、提取率高的特點(diǎn)。姜濤等[11]通過正交實(shí)驗(yàn)得出當(dāng)乙醇濃度為60%、提取溫度為80℃、提取時間為1.5 h、料液比為1∶10、提取次數(shù)為2時為仙鶴草間苯三酚衍生物的最佳浸提工藝，最后采用兩相萃取法及酸堿分離法進(jìn)行分離純化，本法具有純度相對較高的優(yōu)點(diǎn)。

1.3 多糖

仙鶴草多糖具有良好的抗氧化活性，多糖的提取一般采用溶劑提取法。朱侃等[12]采用正交實(shí)驗(yàn)得出以蒸餾水為溶劑、提取時間為3 h、提取溫度為90℃、料液比為1∶20時為最佳工藝，提取率達(dá)1.85%，工藝切實(shí)可行。宿婧等[13]通過響應(yīng)面法得出仙鶴草多糖的微波輔助萃取的最佳工藝是微波功率400 W、時間111 s、溫度87.3℃、提取率達(dá)4.54%、最后采用柱層析純化可得高純度多糖[14]，此法具有提取效率高，提取溫度低等特點(diǎn)。

1.4 鞣質(zhì)

仙鶴草中亦含有鞣質(zhì)，鞣質(zhì)具有多種藥理活性成分。孫希[15]采用超聲提取法，利用70%的八倍量丙酮為提取劑，在25℃、功率為160 W時回流提取1 h，然后采用溶劑分離法，依次用一定量的乙醚、乙酸乙酯、水飽和的正丁醇萃取3次即得，最后采用干酵素法和HPLC法進(jìn)行含量測定，具有重復(fù)性高的優(yōu)點(diǎn)。

2 仙鶴草抗腫瘤作用機(jī)制研究

機(jī)體的細(xì)胞異常增殖是腫瘤發(fā)生發(fā)展的根本原因，腫瘤細(xì)胞的生成與凋亡比例是影響腫瘤生長的重要因素。中藥由于其成分復(fù)雜，在分子機(jī)制方面表現(xiàn)出多途徑、多層次、多方面的特性。近年來研究表明，仙鶴草在體內(nèi)和體外都有良好的抗腫瘤作用，其在抗腫瘤方面的相關(guān)機(jī)制也越來越受關(guān)注。

2.1 抑制腫瘤血管生成

腫瘤發(fā)展首要因素是血管新生，腫瘤細(xì)胞通過血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)、血小板衍生因子(platelet derived growth factor，PDGF)、血管緊張素(angiotensin，ANG)以及環(huán)氧合酶-2(cyclooxygenase-2，COX-2)的調(diào)節(jié)，誘導(dǎo)血管新生，進(jìn)而攝取氧和營養(yǎng)物質(zhì)，在體內(nèi)生長、轉(zhuǎn)移和擴(kuò)散。抑制腫瘤血管生成，則可起到相應(yīng)的抗腫瘤效果。針對仙鶴草活血化瘀的療效，溫雅[16]采用仙鶴草水提液作用A549細(xì)胞，經(jīng)Real-time PCR檢測后結(jié)果顯示，仙鶴草水提液可下調(diào)腫瘤細(xì)胞中COX-2、VEGF的表達(dá)，拮抗血管生成，發(fā)揮抑制腫瘤細(xì)胞生長的作用。

2.2 抑制腫瘤細(xì)胞增殖

惡性增殖與細(xì)胞凋亡失衡是腫瘤細(xì)胞發(fā)生的原因之一，在腫瘤細(xì)胞生長過程中發(fā)揮重要作用[17]。因此，抑制惡性增殖是抗腫瘤的重要防治手段。Teng 等[18]采用仙鶴草內(nèi)酯(黃酮類)作用于人胃癌AGS細(xì)胞發(fā)現(xiàn)，仙鶴草內(nèi)酯可通過絲裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinases，MAPK)(ERK和p38)途徑抑制細(xì)胞增殖。宛春雷等[19]采用精制后的仙鶴草鞣質(zhì)成分作用于HepG2和BEL-7402腫瘤細(xì)胞，結(jié)果顯示，作用72 h后兩種腫瘤細(xì)胞的生長均受到明顯抑制，并存在一定的濃度依賴性。蔡田恬等[20]采用不同濃度仙鶴草水提液作用于肺腺癌細(xì)胞BXPC-3和PANC-1，發(fā)現(xiàn)仙鶴草水提液可顯著影響B(tài)XPC-3的細(xì)胞周期，通過抑制肺腺癌細(xì)胞的增殖，發(fā)揮抗肺腺癌作用。因此，仙鶴草可多途徑抑制惡性腫瘤細(xì)胞增殖，從而發(fā)揮抗腫瘤作用。

2.3 誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡

細(xì)胞凋亡在腫瘤發(fā)病中占有重要地位，凋亡抑制基因和凋亡活化基因異常表達(dá)可直接或間接影響腫瘤的發(fā)生與轉(zhuǎn)移，加快腫瘤細(xì)胞凋亡是抗腫瘤的重要機(jī)制之一[21]。張婷婷等[22]發(fā)現(xiàn)，仙鶴草水提物能上調(diào)線粒體凋亡通路中的Bax、Caspase-3表達(dá)，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，發(fā)揮抗腫瘤作用。張慶業(yè)等[23]采用仙鶴草含藥血清作用于人肺癌細(xì)胞A549，觀察其對細(xì)胞增殖、形態(tài)以及凋亡的影響，發(fā)現(xiàn)仙鶴草含藥血清能促進(jìn)細(xì)胞的早期凋亡和壞死，表現(xiàn)出一定的體外抗腫瘤作用。Yu等[24]采用GCFF(一種仙鶴草復(fù)方)作用于LoVo細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)該復(fù)方可調(diào)節(jié)Bcl-2蛋白家族的表達(dá)從而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，達(dá)到抗腫瘤的作用。Huang等[25]研究證實(shí)，仙鶴草多糖通過上調(diào)Bax表達(dá)，增加Bax/Bcl-2比值，進(jìn)而顯著抑制U-2 OS異種移植腫瘤的生長，并通過Caspase-3介導(dǎo)的線粒體凋亡途徑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。所以，仙鶴草也可通過多種途徑誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，從而發(fā)揮抗腫瘤作用。

2.4 免疫調(diào)節(jié)作用

腫瘤的發(fā)生發(fā)展與機(jī)體免疫相互作用，免疫功能增強(qiáng)可有效維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)，顯著提高機(jī)體的抗腫瘤效應(yīng)，發(fā)揮殺傷腫瘤細(xì)胞的作用。仙鶴草在一定程度上可提高機(jī)體免疫功能，直接或間接的增強(qiáng)機(jī)體對腫瘤的抵抗[26]。Wang等[27]用仙鶴草水提物作用于S180移植小鼠，結(jié)果表明仙鶴草能促進(jìn)巨噬細(xì)胞的活性，增強(qiáng)移植小鼠的免疫功能，發(fā)揮抗腫瘤作用。范楨亮等[28]研究發(fā)現(xiàn)，環(huán)磷酰胺(cyclophosphamide，CP)免疫抑制模型小鼠的免疫功能與仙鶴草水煎液的給藥濃度呈負(fù)相關(guān)?？盗种萚29]發(fā)現(xiàn)，仙鶴草不同提取物也可影響小鼠免疫功能，但其機(jī)制還需進(jìn)一步探討。因此，仙鶴草對免疫功能的增強(qiáng)也可能是其發(fā)揮抗腫瘤作用的機(jī)制之一。

3 仙鶴草的臨床應(yīng)用

研究表明，肺癌的發(fā)生發(fā)展主要是津液虧虛或運(yùn)行障礙所致[30]。仙鶴草是一味收斂止血、消腫生肌的良藥，已開始應(yīng)用于肺癌的相關(guān)治療。由仙鶴草、干蟾片、人參等組成的鶴蟾片，具有解毒除痰、涼血祛瘀的功效。許永東等[31]將鶴蟾片作用于63例非小細(xì)胞肺癌患者，結(jié)果表明鶴蟾片能明顯改善患者生活質(zhì)量，對于非小細(xì)胞肺癌有著明顯的治療作用。益肺解毒湯(仙鶴草、天麥冬、太子參、制南星等)采用清熱解毒、活血化瘀、益氣養(yǎng)陰等方法組方，治療肺癌取得較好的療效[32]。方燦途等[33]研究發(fā)現(xiàn)，星夏滌痰飲聯(lián)合化療組患者生活質(zhì)量明顯優(yōu)于單純化療患者。張超一[34]將加味三仙湯(仙鶴草、仙茅、仙靈脾等)作用于宮頸癌化療患者發(fā)現(xiàn)，加味三仙湯無明顯毒副反應(yīng)，同時具有明顯的增效減毒作用，患者狀況得到明顯改善。黨民卿等[35]發(fā)現(xiàn)，仙鶴草單方或復(fù)方對胃癌、直腸癌等胃腸道腫瘤均有較好的腫瘤抑制作用，且加速瘤體消散。仙鶴草臨床上多用于肺癌的治療，但其相關(guān)機(jī)制目前仍不清楚，有待進(jìn)一步研究[36]。

4 小結(jié)與展望

目前大多數(shù)研究表明，仙鶴草發(fā)揮抗腫瘤作用主要是提取液中的相關(guān)成分可作用于腫瘤細(xì)胞和血管，直接殺傷相關(guān)腫瘤細(xì)胞，也可增強(qiáng)機(jī)體免疫力，達(dá)到間接抗腫瘤作用。臨床上多用仙鶴草治療肺癌相關(guān)疾病，降低了腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，能顯著提高患者生活質(zhì)量，延長生存期。但對于仙鶴草中具體哪些單體發(fā)揮了相關(guān)抗腫瘤作用，以及其發(fā)揮抗腫瘤作用的具體機(jī)制，目前尚無明確結(jié)論，仍需深入研究，以探索開發(fā)相關(guān)中藥制劑，更好地應(yīng)用于臨床。