重組生長(zhǎng)激素預(yù)處理對(duì)卵巢低反應(yīng)患者促排卵結(jié)局及子宮內(nèi)膜容受性的影響

楊元菁，施曉鋆*，王聰

(1.貴州醫(yī)科大學(xué)，貴陽(yáng) 550004；2.貴陽(yáng)市婦幼保健院，貴陽(yáng) 550003)

有研究數(shù)據(jù)表明，2007—2020年間，我國(guó)不孕癥發(fā)病率已上升至18%[1]。且隨著“二胎政策”及“三胎政策”的調(diào)整，符合生育政策的女性中高齡婦女占比越來(lái)越多。一項(xiàng)調(diào)查報(bào)告顯示在1 674名年齡≥35歲的女性中，有生育意愿的占78.43%[2]。年齡是卵巢低反應(yīng)(poor ovarian response，POR)發(fā)病的第一相關(guān)因素，POR在不孕患者中的發(fā)病率逐漸升高。隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展、不良生活習(xí)慣增加等因素，許多年輕的不孕患者也出現(xiàn)POR。輔助生殖助孕治療中，許多POR患者在調(diào)整了促排卵方案后，仍表現(xiàn)為Gn用量大、獲卵數(shù)少、周期取消率高，不能獲得理想的促排卵結(jié)局，加重了患者的經(jīng)濟(jì)和精神壓力，也給臨床工作者帶來(lái)了難題。重組生長(zhǎng)激素(r-GH)除了用于治療發(fā)育障礙及燒傷外，近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)其對(duì)生殖系統(tǒng)也有一定的作用，主要可從胚胎和子宮內(nèi)膜容受性?xún)煞矫鎭?lái)影響助孕結(jié)局[3-4]。通過(guò)促排卵治療可獲得一定數(shù)量的卵子，經(jīng)過(guò)體外受精后獲得胚胎。促排卵結(jié)局可通過(guò)獲卵數(shù)、MⅡ卵數(shù)及優(yōu)質(zhì)胚胎率等數(shù)據(jù)來(lái)評(píng)價(jià)。同源框基因A10(homeboxA10gene，HOXA10)在著床種植窗口期呈表達(dá)高峰，與子宮內(nèi)膜容受性及胚胎著床過(guò)程有一定相關(guān)性[5]，可作為評(píng)價(jià)子宮內(nèi)膜容受性的可靠指標(biāo)之一。目前關(guān)于r-GH應(yīng)用于POR患者的臨床效果仍存在爭(zhēng)議。本研究通過(guò)對(duì)照實(shí)驗(yàn)觀(guān)察r-GH對(duì)POR患者促排卵結(jié)局及子宮內(nèi)膜容受性的改善情況，以期為臨床治療提供一定的參考。

資料與方法

一、研究對(duì)象及分組

選取2020年10月至2021年12月就診于貴陽(yáng)市婦幼保健院生殖中心的75例POR患者為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)符合博洛尼亞POR診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]；(2)年齡小于38歲；(3)體質(zhì)量指數(shù)(BMI)范圍18.0～29.0 kg/m2；(4)上一周期促排卵方案采用高孕激素狀態(tài)下促排卵(PPOS)方案；(5)月經(jīng)周期規(guī)律；(6)采用IVF授精方式。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)存在腦垂體疾病或內(nèi)分泌疾病(如甲亢、甲減、糖尿病、高泌乳素血癥等)；(2)同時(shí)采用了其他改善卵巢儲(chǔ)備功能的措施，包括口服脫氫表雄酮、服用中藥、進(jìn)行針灸等；(3)合并多囊卵巢綜合征、子宮內(nèi)膜異位癥、輸卵管積水、子宮內(nèi)膜息肉、宮腔粘連、粘膜下肌瘤等；(4)GH使用禁忌者；(5)夫婦雙方至少一方核型異常；(6)男方存在少、弱、畸形精子癥或無(wú)精子癥等。

將符合上述標(biāo)準(zhǔn)的75名受試者按1∶2的比例隨機(jī)分為對(duì)照組(不給予r-GH預(yù)處理，25例)和預(yù)處理組(給予r-GH預(yù)處理，50例)；兩組患者均只納入首個(gè)促排卵周期的臨床資料。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審批通過(guò)，所有入組患者均簽署知情同意書(shū)。

POR的診斷：根據(jù)博洛尼亞標(biāo)準(zhǔn)[6]，符合以下3條中的兩條即可診斷為POR：(1)大于或等于40歲或存在任何其他高危因素；(2)之前因卵巢反應(yīng)不良取消周期，或獲卵數(shù)小于3個(gè)；(3)卵巢儲(chǔ)備功能異常：抗苗勒管激素(AMH)<1.1 ng/ml或基礎(chǔ)竇卵泡計(jì)數(shù)(AFC)<5～7個(gè)。

二、r-GH預(yù)處理及促排卵

預(yù)處理組患者在月經(jīng)周期第9～10天行B超檢查監(jiān)測(cè)排卵，排卵后7～9 d在子宮內(nèi)膜種植窗口期予r-GH注射液(賽增，15 U/支，長(zhǎng)春金賽藥業(yè))2 U/d肌肉注射，使用4～6周，直至第2次月經(jīng)周期第2～3天啟動(dòng)PPOS方案，并在啟動(dòng)日將r-GH劑量增加至4 U/d直至扳機(jī)日。本周期仍然采用PPOS方案促排卵，具體操作為：口服醋酸甲羥孕酮(安宮黃體酮，2 mg/片，浙江仙琚制藥)8～10 mg/d，予注射用尿促卵泡素(麗申寶，75 U/支，珠海麗珠制藥)225～300 U/d肌肉注射。當(dāng)≥1個(gè)卵泡直徑>20 mm或者≥3個(gè)卵泡直徑>18 mm時(shí)，皮下注射醋酸曲普瑞林注射液(1 ml∶0.1 mg，長(zhǎng)春金賽藥業(yè))1 ml及肌肉注射人絨毛膜促性腺激素(HCG，2 000 U/支，珠海麗珠制藥)2 000 U雙扳機(jī)。

對(duì)照組患者不予r-GH預(yù)處理，直接啟動(dòng)PPOS方案。

扳機(jī)后34～36 h在陰道超聲引導(dǎo)下取卵。取卵后4～6 h行常規(guī)IVF，受精卵培養(yǎng)至第3天或第6天將卵裂期胚胎或囊胚采用快速冷凍法保存于液氮中備用。

三、子宮內(nèi)膜組織中HOXA10表達(dá)檢測(cè)

1.主要試劑及儀器：蘇木素染液(LM10N13，北京百靈威科技有限公司)、DAB試劑盒(ZLI-9018，北京中杉金橋生物有限公司)、山羊血清(SP9001，北京中杉金橋生物有限公司)、兔多克隆一抗HOXA10(Bs-2502R，北京博奧生物技術(shù)有限公司)、山羊抗兔二抗(SP9001，北京中杉金橋生物有限公司)、Ultrapure RNA Kit(CW0581M，50250，北京康為世紀(jì)公司)，HiScript Ⅱ One Step qRT-PCR SYBR Green Kit(Q221-01，7E220E8，南京Vazyme生物科技股份有限公司)、包埋機(jī)(BMJ-Ⅲ，常州中威電子儀器廠(chǎng))、實(shí)時(shí)熒光PCR儀(QuantStudio1，AppliedBiosystems公司，美國(guó))、低溫離心機(jī)(C2500，湖南湘儀實(shí)驗(yàn)儀器廠(chǎng))，一次性使用S型宮腔組織吸引管(立可靈，TY-C3.1/3-1S，上海家寶醫(yī)學(xué)保健科技有限公司)。

2.樣本采集：預(yù)處理組中有10名患者自愿接受子宮內(nèi)膜容受性檢測(cè)并簽署知情同意書(shū)。在使用r-GH預(yù)處理前的子宮內(nèi)膜種植窗口期，通過(guò)一次性使用S型宮腔組織吸引管采集子宮內(nèi)膜組織，r-GH預(yù)處理4～6周后，下一個(gè)月經(jīng)周期的子宮內(nèi)膜種植窗口期再次留取子宮內(nèi)膜組織(操作同前)。將子宮內(nèi)膜樣本分為2份，各約2 g，分別進(jìn)行福爾馬林固定及0～2℃冷藏保存。

3.子宮內(nèi)膜組織HE染色：福爾馬林固定組織后經(jīng)全自動(dòng)脫水機(jī)脫水，石蠟包埋后制作切片(厚度5 μm)，放置45℃恒溫箱中烘干。蘇木素染色5 min，自來(lái)水沖洗，1%鹽酸乙醇分化30 s，充分水洗，返藍(lán)；伊紅染色2 min，自來(lái)水沖洗，脫水封片。在顯微鏡下觀(guān)察并進(jìn)行圖像采集。

“我們不是一個(gè)人在戰(zhàn)斗！”省林科院副研究員陳景震幽默地說(shuō)。他定點(diǎn)服務(wù)的是宜章縣白石渡鎮(zhèn)。那里，已經(jīng)建起近兩千畝板栗林，陳景震此行的目的是針對(duì)板栗林產(chǎn)量下降和落果的問(wèn)題進(jìn)行診斷，通過(guò)改良和科學(xué)種植，屆時(shí)，板栗林的畝產(chǎn)有望從目前的60公斤提高到200公斤。

4.免疫組化法檢測(cè)HOXA10蛋白表達(dá)：切片制作同HE染色。使用3%雙氧水阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，血清封閉，滴加一抗后4℃過(guò)夜，PBS沖洗5 min×3次；滴加二抗后37℃孵育30 min，PBS沖洗5 min×3次；DAB顯色，復(fù)染細(xì)胞核后，脫水封片。使用三目顯微攝像系統(tǒng)(BA400Digital，廈門(mén)麥克奧迪實(shí)業(yè)集團(tuán)有限公司)進(jìn)行圖像采集，以細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色或黃色顆粒為HOXA10表達(dá)陽(yáng)性；使用Halo數(shù)據(jù)分析系統(tǒng)(Indica labs，美國(guó))計(jì)算每張圖像中的陽(yáng)性面積占比(陽(yáng)性面積/總面積×100%)。

5.實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)檢測(cè)HOXA10 mRNA表達(dá)：將冷藏保存的子宮內(nèi)膜標(biāo)本加入液氮研磨，提取總RNA，鑒定后逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，進(jìn)行qRT-PCR擴(kuò)增反應(yīng)。引物由生工生物工程公司(上海)設(shè)計(jì)并合成，HOXA10基因的上游引物：5′-GGCAAAGAGTGGTCGGAAGA-3′，下游引物：5′-GTGGACGCTGCGGCTAAT-3′；GADPH上游引物：5′-TCAAGAAGGTGGTGAAGCAGG-3′，下游引物：5′-TCAAAGGTGGAGGAGTGGGT-3′。PCR反應(yīng)條件：55℃ 5 min，95℃ 5 min預(yù)變性，95℃ 10 s變性，60℃ 30 s退火；重復(fù)45個(gè)循環(huán)。使用Thermo Scientific PikoReal軟件分析各樣本的CT值，通過(guò)2-ΔΔCT公式計(jì)算HOXA10相對(duì)mRNA表達(dá)水平(其中CT為循環(huán)閾值)。

四、觀(guān)察指標(biāo)

比較兩組患者的一般資料(年齡、不孕年限、基礎(chǔ)性激素水平等)、促排卵實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)(Gn總量和天數(shù)、AFC、HCG日內(nèi)膜厚度、獲卵數(shù)等)、胚胎發(fā)育指標(biāo)(2PN率、優(yōu)質(zhì)胚胎率)，以及HE染色的鏡下特點(diǎn)、HOXA10在mRNA和蛋白水平的表達(dá)。其中2PN率=正常受精卵母細(xì)胞數(shù)/獲卵數(shù)×100%，優(yōu)質(zhì)胚胎率=優(yōu)質(zhì)胚胎數(shù)/正常受精卵母細(xì)胞數(shù)×100%。

五、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

結(jié) 果

一、兩組患者一般資料比較

對(duì)照組和預(yù)處理組患者的年齡、不孕年限、BMI、AMH、基礎(chǔ)FSH(bFSH)、基礎(chǔ)LH(bLH)比較均無(wú)顯著性差異(P>0.05)(表1)。

表1 兩組患者一般資料比較(-±s)

二、兩組患者促排卵及胚胎發(fā)育指標(biāo)比較

兩組患者Gn天數(shù)、AFC、HCG日E2及內(nèi)膜厚度、2PN率及優(yōu)質(zhì)胚胎率比較均無(wú)顯著性差異(P>0.05)；預(yù)處理組患者Gn總量顯著低于對(duì)照組，獲卵數(shù)及MⅡ卵數(shù)顯著高于對(duì)照組(P均<0.05)(表2)。

表2 兩組患者促排卵及胚胎發(fā)育指標(biāo)比較[(-±s)，%]

三、預(yù)處理組患者r-GH預(yù)處理前后自身對(duì)照比較

比較預(yù)處理組患者本周期(給予r-GH預(yù)處理)與上一周期(未予r-GH預(yù)處理)促排卵及胚胎發(fā)育的相關(guān)指標(biāo)，結(jié)果顯示本周期的Gn總量、Gn天數(shù)顯著低于上一周期(P<0.05)，獲卵數(shù)、MⅡ卵數(shù)及優(yōu)質(zhì)胚胎率顯著高于上一周期(P均<0.05)(表3)。

表3 預(yù)處理組患者r-GH預(yù)處理前后自身對(duì)照比較[(-±s)，%]

四、不同年齡POR患者中r-GH預(yù)處理與否的相關(guān)指標(biāo)比較

按照年齡不同將所有入組患者分為<35歲組(41例)和≥35歲組(34例)進(jìn)行比較，分析年齡對(duì)r-GH預(yù)處理的影響。

1.<35歲組中對(duì)照組和預(yù)處理組相關(guān)指標(biāo)比較：<35歲組中對(duì)照組和預(yù)處理組的一般情況均無(wú)顯著性差異(P>0.05)(表4)。兩組的Gn總量、Gn天數(shù)、AFC、HCG日E2、HCG日內(nèi)膜厚度、獲卵數(shù)、MⅡ卵數(shù)及2PN率、優(yōu)質(zhì)胚胎率比較均無(wú)顯著性差異(P均>0.05)(表5)。而在預(yù)處理組自身對(duì)照數(shù)據(jù)中，行r-GH預(yù)處理的本周期中Gn天數(shù)顯著低于上一周期，獲卵數(shù)及MⅡ卵數(shù)顯著高于上一周期(P均<0.05)(表6)。

表4 <35歲患者中對(duì)照組和預(yù)處理組一般情況比較(-±s)

表5 <35歲患者中對(duì)照組和預(yù)處理組促排卵及胚胎發(fā)育指標(biāo)比較[(-±s)，%]

表6 <35歲患者預(yù)處理組r-GH預(yù)處理前后自身對(duì)照比較[(-±s)，%]

2.≥35歲組中對(duì)照組和預(yù)處理組相關(guān)指標(biāo)比較：≥35歲組中對(duì)照組和預(yù)處理組的一般情況均無(wú)顯著性差異(P>0.05)(表7)。預(yù)處理組的Gn天數(shù)顯著低于對(duì)照組，優(yōu)質(zhì)胚胎率顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，其余促排卵指標(biāo)均無(wú)顯著性差異(P>0.05)(表8)。而在預(yù)處理組自身對(duì)照數(shù)據(jù)中，本周期的Gn天數(shù)顯著低于上一周期，獲卵數(shù)、MⅡ卵數(shù)及優(yōu)質(zhì)胚胎率顯著高于上一周期(P均<0.05)(表9)。

表7 ≥35歲患者中對(duì)照組和預(yù)處理組一般情況比較(-±s)

表8 ≥35歲患者中對(duì)照組和預(yù)處理組促排卵及胚胎發(fā)育指標(biāo)比較[(-±s)，%]

表9 ≥35歲患者預(yù)處理組r-GH預(yù)處理前后自身對(duì)照比較[(-±s)，%]

五、子宮內(nèi)膜組織r-GH預(yù)處理前后HE染色鏡下特點(diǎn)比較

由子宮內(nèi)膜組織功能層HE染色結(jié)果(圖1)可見(jiàn)，給予r-GH預(yù)處理前后均可見(jiàn)子宮內(nèi)膜組織腺上皮細(xì)胞開(kāi)始出現(xiàn)頂漿分泌，腺腔不規(guī)則，間質(zhì)疏松水腫，螺旋小動(dòng)脈增生，符合子宮內(nèi)膜分泌中期特點(diǎn)。

A：r-GH預(yù)處理前內(nèi)膜組織；B：r-GH預(yù)處理后內(nèi)膜組織。鏡下特點(diǎn)均符合子宮內(nèi)膜分泌中期特點(diǎn)：紅色箭頭示腺上皮，綠色箭頭示腺管腔，黃色箭頭示血管腔，藍(lán)色箭頭示間質(zhì)。圖1 子宮內(nèi)膜組織HE染色(×100)

六、r-GH預(yù)處理前后HOXA10表達(dá)情況

1.免疫組化法檢測(cè)HOXA10蛋白表達(dá)情況：r-GH預(yù)處理前后子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞質(zhì)內(nèi)及細(xì)胞間質(zhì)均可見(jiàn)HOXA10蛋白棕黃色或黃色陽(yáng)性表達(dá)，提高放大倍數(shù)后肉眼可見(jiàn)r-GH預(yù)處理后HOXA10蛋白陽(yáng)性表達(dá)較多(圖2)；使用Halo數(shù)據(jù)分析系統(tǒng)計(jì)算每張圖像的陽(yáng)性面積占比，結(jié)果顯示使用r-GH預(yù)處理后的子宮內(nèi)膜中HOXA10蛋白表達(dá)陽(yáng)性面積占比顯著高于預(yù)處理前(P<0.05)(表10)。

A：r-GH預(yù)處理前內(nèi)膜組織(×100)；B：r-GH預(yù)處理后內(nèi)膜組織(×100)；C：r-GH預(yù)處理前內(nèi)膜組織(×400)；D：r-GH預(yù)處理后內(nèi)膜組織(×400)。鏡下可見(jiàn)子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞質(zhì)內(nèi)及細(xì)胞間質(zhì)HOXA10蛋白陽(yáng)性表達(dá)；黑色箭頭示蘇木素染色為藍(lán)色的細(xì)胞核，紅色箭頭示棕黃色或黃色的HOXA10蛋白表達(dá)。圖2 免疫組化法檢測(cè)子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞HOXA10蛋白表達(dá)情況

2.qRT-PCR檢測(cè)HOXA10 mRNA表達(dá)情況：qRT-PCR溶解曲線(xiàn)顯示HOXA10及內(nèi)參GAPDH均可特異性擴(kuò)增，擴(kuò)增曲線(xiàn)顯示r-GH預(yù)處理后的目標(biāo)基因表達(dá)曲線(xiàn)率先升高并達(dá)到平臺(tái)期(圖3、4)。計(jì)算mRNA相對(duì)表達(dá)量后進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)，r-GH預(yù)處理后子宮內(nèi)膜中HOXA10 mRNA表達(dá)量顯著高于預(yù)處理前(P<0.05)(表10)。

圖3 GAPDH溶解曲線(xiàn)及擴(kuò)增曲線(xiàn)

圖4 HOXA10溶解曲線(xiàn)及擴(kuò)增曲線(xiàn)

表10 免疫組化和qRT-PCR檢測(cè)r-GH預(yù)處理前后HOXA10表達(dá)情況(-±s)

討 論

目前國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道的POR發(fā)病率為5.6%～35.1%[7]，其具體病因并不明確，多認(rèn)為與年齡、免疫因素、遺傳因素、卵巢手術(shù)、環(huán)境因素及放化療等有關(guān)，其中年齡為主要因素。隨著年齡增長(zhǎng)竇卵泡逐漸消耗，卵巢儲(chǔ)備能力顯著下降[8]，表現(xiàn)為AMH降低、基礎(chǔ)FSH升高、AFC減少及獲卵數(shù)減少等；另一方面隨著氧自由基的堆積，卵子質(zhì)量也逐漸下降，促排卵周期中可表現(xiàn)為MⅡ卵數(shù)少、2PN率低、優(yōu)質(zhì)胚胎率低等。輔助生殖助孕治療的結(jié)局主要跟“種子”及“土壤”兩大因素相關(guān)，即胚胎質(zhì)量和子宮內(nèi)膜容受性。對(duì)于上一促排周期發(fā)生POR和促排卵前評(píng)估為POR的患者，進(jìn)入促排卵周期前通常采用一些輔助治療方法，如應(yīng)用脫氫表雄酮、輔酶Q10及GH等。GH可以改善卵子和胚胎質(zhì)量以及子宮內(nèi)膜容受性，最終改善輔助生殖結(jié)局。有meta分析表示GH可提高POR患者的獲卵數(shù)、MⅡ卵數(shù)及可移植胚胎數(shù)，減少Gn使用總量及使用時(shí)間，改善助孕結(jié)局[9]。本研究結(jié)論與之類(lèi)似，我們?cè)贕n啟動(dòng)日前約6周(從自然月經(jīng)周期分泌中期到第2次月經(jīng)周期開(kāi)始啟動(dòng)促排方案)開(kāi)始使用r-GH，這是小竇卵泡發(fā)育的階段，也是線(xiàn)粒體增殖、顆粒細(xì)胞發(fā)育的啟動(dòng)及竇卵泡對(duì)激素敏感的階段，在這個(gè)時(shí)期應(yīng)用r-GH預(yù)處理有助于始基卵泡的激活與招募，提高卵母細(xì)胞發(fā)育能力；本研究中預(yù)處理組患者的獲卵數(shù)、MⅡ卵數(shù)及優(yōu)質(zhì)胚胎率較對(duì)照組均顯著增加(P<0.05)。生理過(guò)程中，竇狀卵泡在月經(jīng)周期第1～4天完成募集，因此我們?cè)趩?dòng)日添加r-GH的目的在于提高卵巢對(duì)Gn的反應(yīng)性，本研究結(jié)果顯示預(yù)處理組的Gn總量和Gn天數(shù)較對(duì)照組顯著減少(P<0.05)。還有研究報(bào)道在促排卵前給予GH 2 U/d預(yù)處理6周能使胚胎質(zhì)量得到明顯改善[10]，我們的結(jié)論與之相似。但是也有研究提出了不同觀(guān)點(diǎn)，2020年發(fā)表的兩項(xiàng)meta分析提示GH對(duì)胚胎質(zhì)量并無(wú)明顯改善[11-12]。

GH的分泌量隨著年齡的增加逐漸減少，35歲開(kāi)始血清中GH水平明顯下降，40歲之后下降更為顯著[13]。因此，我們得到實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)后又將所有入組患者按照年齡進(jìn)行分組，比較各觀(guān)察指標(biāo)的差異，結(jié)果發(fā)現(xiàn)年齡≥35歲的POR患者中預(yù)處理組部分促排卵指標(biāo)明顯改善(Gn天數(shù)顯著降低，優(yōu)質(zhì)胚胎率顯著增高)，而<35歲患者中預(yù)處理組促排卵結(jié)局改善并不明顯。不同年齡患者r-GH預(yù)處理前后的自身對(duì)照比較中，<35歲患者預(yù)處理后Gn天數(shù)顯著減少，獲卵數(shù)及MⅡ卵數(shù)顯著增加；≥35歲患者預(yù)處理后除上述指標(biāo)變化，優(yōu)質(zhì)胚胎率亦顯著升高。我們推測(cè)其原因?yàn)槟挲g<35歲的患者機(jī)體內(nèi)自身分泌的GH較多，GH與受體的結(jié)合接近飽和，即使添加更多的外源性GH也不能被有效利用。

還有研究提出GH對(duì)助孕結(jié)局的積極作用，不僅僅是通過(guò)對(duì)卵子數(shù)量及質(zhì)量的提高實(shí)現(xiàn)的，甚至大部分成果應(yīng)歸功于對(duì)子宮內(nèi)膜容受性的改善[14]。莫鳳媚等[15]對(duì)因子宮內(nèi)膜薄而取消移植的患者行GH宮腔內(nèi)灌注，結(jié)果表明GH可改善內(nèi)膜血流，對(duì)妊娠結(jié)局有積極作用。目前除了子宮內(nèi)膜厚度、容積及子宮內(nèi)膜下血流狀態(tài)可評(píng)價(jià)子宮內(nèi)膜容受性[16]外，內(nèi)膜組織中HOXA10的表達(dá)也是評(píng)價(jià)子宮內(nèi)膜容受性的可靠指標(biāo)之一。HOXA10在子宮內(nèi)膜中呈周期性表達(dá)，在種植窗口期出現(xiàn)表達(dá)高峰[13]，參與人類(lèi)胚胎著床過(guò)程并發(fā)揮重要作用。本研究結(jié)果顯示r-GH預(yù)處理后子宮內(nèi)膜中HOXA10蛋白及mRNA表達(dá)明顯增多，提示r-GH預(yù)處理可能對(duì)改善子宮內(nèi)膜容受性有積極作用，這與之前Lan等[17]的結(jié)論相似。

但本研究仍存在一定的不足：首先，研究時(shí)長(zhǎng)尚不充分，大部分患者因胚胎冷凍未行胚胎移植導(dǎo)致資料數(shù)據(jù)覆蓋不完整，待進(jìn)一步收集妊娠率、流產(chǎn)率及活產(chǎn)率等數(shù)據(jù)，完善相關(guān)分析。其次，納入樣本量較少，可能存在研究結(jié)果的偏倚，后續(xù)應(yīng)增大樣本量進(jìn)行更深入的研究。

綜上所述，在促排卵周期前對(duì)POR患者進(jìn)行r-GH預(yù)處理可提高卵巢反應(yīng)性，減少Gn使用時(shí)間及用量，增加獲卵數(shù)及MⅡ卵數(shù)，提高胚胎質(zhì)量，且r-GH能同時(shí)改善POR患者的子宮內(nèi)膜容受性，對(duì)促排卵結(jié)局有積極作用。此外，r-GH預(yù)處理可能對(duì)年齡≥35歲的POR患者益處更大。