海洋來(lái)源真菌Penicillium citrinum的化學(xué)成分及其活性研究*

楊素梅，楊曦亮**，肖紹羽佳，周夢(mèng)蝶，張亞妮，吳兆圓，劉 芳，劉曼麗，方 偉**

(1.武漢科技大學(xué)醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系，湖北武漢 430065；2.湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，湖北省生物農(nóng)藥工程研究中心，湖北武漢 430064)

海洋微生物是海洋天然產(chǎn)物的主要來(lái)源，海洋來(lái)源的真菌逐漸成為發(fā)現(xiàn)活性代謝產(chǎn)物的重要目標(biāo)之一，具有潛在的治療應(yīng)用前景。其中絲狀真菌因其龐大的元基因組和復(fù)雜的遺傳背景，成為具有生物活性天然產(chǎn)物的重要來(lái)源[1]。與陸生真菌相比，海洋真菌在高壓、低溫、有限光照和缺乏營(yíng)養(yǎng)的極端海洋環(huán)境中可以產(chǎn)生更多新的次生代謝產(chǎn)物。近年來(lái)，已經(jīng)陸續(xù)從海洋來(lái)源青霉屬(Pencillium)真菌中分離出結(jié)構(gòu)新穎且活性良好的次生代謝產(chǎn)物，具有抑制酶活性[2]、抑菌[3]、抑制氧自由基[4]等功效。因此，青霉菌在藥物開發(fā)中起著至關(guān)重要的作用。

橘青霉(Penicilliumcitrinum)是一種具有廣譜抗菌活性的真菌，其粗提物對(duì)人類致病菌嗜水氣單胞桿菌(Aeromonashydrophila)、大腸桿菌(Escherichiacoli)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、糞腸球菌(Enterococcusfaecalis)、須毛癬菌(Trichophytonmentagrophytes)和白色念珠菌(Candidaalbicans)均有抑制作用[5,6]，為產(chǎn)生具有生物活性的化合物提供了新的思路。橘青霉次生代謝產(chǎn)物中的橘霉素二聚體衍生物penicitol D和1-epi-citrinin H1具有抗耐甲氧西林金黃色葡萄球菌活性[7]，penicitrinone A對(duì)乳腺癌細(xì)胞MCF-7具有細(xì)胞毒作用[8]，能抑制黑色素瘤細(xì)胞A-375增殖和轉(zhuǎn)移[9]，且具有抑制乳腺癌細(xì)胞遷移和增殖的作用[10]。

此前，本課題組已從海藻內(nèi)生真菌PenicilliumcitrinumSCSIO41402中發(fā)現(xiàn)了兩個(gè)新的化合物Sorbicillfurans A和Sorbicillfurans B，這兩個(gè)化合物是含雙環(huán)[2.2.2]辛烷和四氫呋喃結(jié)構(gòu)的山梨素加合物，其中Sorbicillfurans B對(duì)人白血病細(xì)胞系HL-60有細(xì)胞毒作用[11]。為進(jìn)一步研究該菌株的活性次生代謝產(chǎn)物，本研究對(duì)其進(jìn)行擴(kuò)大發(fā)酵培養(yǎng)及運(yùn)用色譜、光譜技術(shù)對(duì)發(fā)酵液的乙酸乙酯提取物進(jìn)行分離純化，并對(duì)所獲單體化合物進(jìn)行抗神經(jīng)炎癥活性、抗菌活性和細(xì)胞毒活性測(cè)試，從中篩選出活性成分，旨在發(fā)現(xiàn)新穎的活性天然產(chǎn)物，為天然產(chǎn)物的研究和開發(fā)提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌株來(lái)源

腔節(jié)藻屬(Coelarthroum)海藻采集于南海永興島(16°50′ N，112°20′ E)的珊瑚礁，從中分離得到真菌菌株SCSIO41402，根據(jù)菌株的形態(tài)特征和ITS序列區(qū)域，將其鑒定為Penicilliumcitrinum，該信息已保存于GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中，登錄號(hào)為MK988578。該菌株在MB瓊脂培養(yǎng)基(麥芽提取物15 g，人造海鹽24.4 g，瓊脂15 g，蒸餾水1 L，pH值7.4-7.8)斜面上4℃保存，存放于中國(guó)科學(xué)院南海海洋研究所熱帶海洋生物資源與生態(tài)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室。

1.1.2 試劑

RPMI-1640(Hyclone，SH30809.01B)；DMEM培養(yǎng)基(Hyclone，SH30243.01B)；胎牛血清(Hyclone；SH30084.03)；PBS(Life，C10010500BT)；MTT(Sigma，M5655-1G)；LPS(Sigma，L2630-10 mg)；Donepezil(MCE，HY-14566)；Sunfire C18 OBD色譜柱(美國(guó)Waters公司)；柱色譜用硅膠(200-300目，青島海洋化工有限公司)；Sephadex LH-20凝膠(GE Healthcare Bio-Sciences AB，瑞士)；制備級(jí)乙腈(湖北弗頓生化科技有限公司)；LC-MS級(jí)乙腈和甲醇(美國(guó)飛世爾科學(xué)世界公司)；其他試劑均為分析純(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)。

1.1.3 儀器與設(shè)備

Centrifuge離心機(jī)(德國(guó)Eppendorf公司)；HGC-36A氮吹儀(天津市恒奧科技發(fā)展有限公司)；Rotavapor R-200旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(瑞士BUCHI公司)；Bruker AVANCE核磁共振儀(德國(guó)Brucker BioSpin公司)；Waters 2695超高壓液質(zhì)聯(lián)用色譜儀(美國(guó)Waters公司)；Waters 2767制備型高效液相色譜儀(美國(guó)Waters公司)；MicroBeta2全功能微孔板檢測(cè)儀(美國(guó)PerkinElmer公司)；Neofuge 15R冷凍離心機(jī)[力新儀器(上海)有限公司]；HF160W水套式CO2培養(yǎng)箱[力新儀器(上海)有限公司]；IX71倒置相差顯微鏡(日本Olympus公司)。

1.2 方法

1.2.1 發(fā)酵與提取

從PDA培養(yǎng)基(馬鈴薯200 g/L，葡萄糖20 g/L，瓊脂20 g/L)斜面挑取菌株P(guān)enicilliumcitrinumSCSIO41402，接種于100 mL PDB培養(yǎng)基(馬鈴薯200 g/L，葡萄糖20 g/L)，置于恒溫?fù)u床上150 r/min、28℃振蕩培養(yǎng)2 d，按照5%的接種量轉(zhuǎn)接于發(fā)酵培養(yǎng)基(麥芽糖6.25 g/L，麥芽提取物6.25 g/L，酵母提取物1 g/L，蛋白胨0.625 g/L，磷酸二氫鉀1.25 g/L，硫酸鎂0.625 g/L，瓊脂0.3 g/L)，28℃靜置培養(yǎng)7 d發(fā)酵。發(fā)酵液中加入等體積的乙酸乙酯進(jìn)行萃取，提取液40℃減壓濃縮，濃縮后獲得提取物(2.8 g)。

1.2.2 分離與純化

粗提物經(jīng)葡聚糖凝膠LH-20柱層析分離，用100%甲醇洗脫，合并相同部分得到6個(gè)組分(Fr.A-F)。將Fr.F溶于甲醇后，通過(guò)制備型高效液相色譜HPLC以24 mL/min的流速，乙腈-0.2%乙酸水(10%-50%-100%)梯度洗脫得到化合物1(1.2 mg)。Fr.C經(jīng)正相硅膠柱層析，以石油醚-乙酸乙酯體積比(10∶1，5∶1，3∶1，2∶1，1∶1，0∶1)梯度洗脫得到8個(gè)組分(sFr.C1-C8)。sFr.C1通過(guò)制備型HPLC，經(jīng)OBD柱以乙腈-水(25%-100%)洗脫得到化合物2(6.22 mg)；sFr.C7通過(guò)制備型HPLC，經(jīng)OBD柱以乙腈-水(10%-100%)梯度洗脫分離化合物3(1.19 mg)；sFr.C2通過(guò)制備型HPLC，經(jīng)OBD柱以乙腈-水(25%-100%)梯度洗脫得到化合物4(4.93 mg)；sFr.C4用制備型HPLC，經(jīng)C18柱以乙腈-水(20%-100%)洗脫分離得到化合物5(2.2 mg)；sFr.C8通過(guò)制備型HPLC，經(jīng)OBD柱以乙腈-水(20%-80%)溶劑梯度洗脫得到化合物6(1.18 mg)和化合物7(1.85 mg)。

1.2.3 活性篩選

(1)抗神經(jīng)炎癥活性。

體外培養(yǎng)BV-2小膠質(zhì)細(xì)胞，建立脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)誘導(dǎo)的神經(jīng)炎癥細(xì)胞模型。實(shí)驗(yàn)組以化合物濃度分別為3 μg/mL、6 μg/mL、12 μg/mL給藥處理，以20 μg/mL多奈哌齊作陽(yáng)性對(duì)照，采用噻唑藍(lán)(MTT)法[12]檢測(cè)細(xì)胞存活率。將BV-2細(xì)胞懸液以1×104個(gè)/mL的密度接種于96孔板，于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。待細(xì)胞貼壁，每孔加入200 μL不同濃度樣品預(yù)處理4 h，然后加入2 μg/mL LPS處理24 h，再加入20 μL 5 mg/mL的MTT溶液處理4 h，于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每孔加入150 μL二甲基亞砜(DMSO)，振蕩10 min至結(jié)晶完全溶解后，用酶標(biāo)儀于490 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度值(OD值)。

(2)抗菌活性。

化合物在96孔滅菌板上進(jìn)行抗菌實(shí)驗(yàn)，并用微孔稀釋法[13]測(cè)定最小抑菌濃度(Minimum Inhibitory Concentration，MIC)。將受試化合物溶解于DMSO中，采用二倍串聯(lián)稀釋法將化合物稀釋到指定濃度，DMSO的最終濃度不超過(guò)5%。病原菌包括動(dòng)物病原細(xì)菌(綠膿桿菌Pseudomonasaeruginosa、大腸桿菌Escherichiacoli、金黃色葡萄球菌Staphylococcusaureus、豬丹毒桿菌Erysipelassuis和豬鏈球菌Streptococcussuis)和植物病原真菌(灰霉菌Botrytiscinerea、小麥穎枯病菌Septorianodorum、小麥葉枯病菌S.tritici、棉花黃萎病菌Verticiliumdahliae)。抑菌活性測(cè)定以接種培養(yǎng)液和DMSO作為陰性對(duì)照，鏈霉素和頭孢匹羅作為陽(yáng)性對(duì)照。真菌于28℃培養(yǎng)48 h，細(xì)菌于37℃培養(yǎng)24 h，觀察病原菌的生長(zhǎng)狀況。

(3)細(xì)胞毒活性。

采用MTT法測(cè)定化合物1-7對(duì)非洲綠猴胚胎腎細(xì)胞Marc-145細(xì)胞的抗增殖活性，以5-氟尿嘧啶作陽(yáng)性對(duì)照[12]。

2 結(jié)果與分析

2.1 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：黃色油狀(CH3OH)，結(jié)合1H-NMR和13C-NMR數(shù)據(jù)推測(cè)分子式為C19H18N2O2。1H-NMR(700 MHz，CD3OD)δ：7.56(2H，ddt，J=7.6，6.46，0.98，H-4，4′)，7.30(3H，m，H-7，5′，7′)，7.15(1H，s，H-5)，7.03(2H，m，H-6,6′)，6.91(2H，m，H-2，2′)，4.70(1H，d，J=6.7，H-1″)，4.49(1H，td，J=7.0，4.04，H-2″),3.62(1H，dd，J=11.2，4.2，H-3″)，3.49(1H，dd，J=11.2，7.0，H-3′)；13C-NMR(175 MHz，CD3OD)δ：124.1(C-2)，118.0(C-3)，129.3(C-3a)，119.4(C-4)，122.1(C-5)，120.2(C-6)，112.1(C-7)，138.1(C-7a)，123.9(C-2′)，116.5(C-3′)，128.4(C-3′a)，119.3(C-4′)，122.0(C-5′)，120.0(C-6′)，138.0(C-7′a)，38.1(C-1″)，76.4(C-2″)，66.4(C-3″)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[14]報(bào)道基本一致，故鑒定化合物1為3,3-二吲哚烷基-1,2-丙二醇。

化合物2：淡黃色無(wú)定形固體(CH3OH)，結(jié)合1H-NMR和13C-NMR數(shù)據(jù)推測(cè)分子式為C10H12O3。1H-NMR(500 MHz，CD3OD)δ：1.85(3H，d，J=7.0，H-1)，6.62(1H，m，H-2)，6.12(1H，d，J=2.0，H-5)，5.56(1H，d，J=2.0，H-6)，1.87(3H，s，H-9)，3.86(3H，s，H-10)；13C-NMR(125 MHz，CD3OD)δ：14.3(C-1)，131.0(C-2)，128.3(C-3)，162.7(C-4)，98.9(C-5)，88.6(C-6)，167.0(C-7)，174.1(C-8)，12.1(C-9)，57.0(C-10)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[15]報(bào)道基本一致，故鑒定化合物2為robillafuran。

化合物3：白色粉末(CH3OH)，結(jié)合1H-NMR和13C-NMR數(shù)據(jù)推測(cè)分子式為C10H12O4。1H-NMR(500 MHz，CD3OD)δ：4.31(2H，d，J=6.0，H-1)，6.59(1H，td，J=6.0，0.5，H-2)，6.21(1H，d，J=2.0，H-5)，5.60(1H，d，J=2.0，H-6)，1.89(3H，d，J=1.0，H-9)，3.86(3H，s，H-10)；13C-NMR(125 MHz，CD3OD)δ：59.6(C-1)，135.0(C-2)，128.1(C-3)，161.9(C-4)，100.0(C-5)，89.2(C-6)，166.6(C-7)，173.8(C-8)，12.5(C-9)，57.0(C-10)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[16]報(bào)道基本一致，故鑒定化合物3為asperfuran A。

化合物4：白色固體(CH3OH)，結(jié)合1H-NMR和13C-NMR數(shù)據(jù)推測(cè)分子式為C12H14O4。1H-NMR(500 MHz，CD3OD)δ：4.54(1H，m，H-3)，2.93(1H，m，H-4)，6.88(1H，d，J=7.0，H-5)，7.61(1H，d，J=7.0，H-6)，1.41(3H，d，J=6.5，H-9)，1.34(3H，d，J=7.0，H-10),4.64(2H，s，H-11)；13C-NMR(125 MHz，CD3OD)δ：171.0(C-1)，82.7(C-3)，38.4(C-4)，144.6(C-4a)，117.8(C-5)，136.0(C-6)，129.3(C-7)，160.5(C-8)，108.0(C-8a)，19.9(C-9)，18.0(C-10)，59.4(C-11)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[17]報(bào)道基本一致，故鑒定化合物4為gamahorin。

化合物5：無(wú)色晶體(CH3OH)，結(jié)合1H-NMR和13C-NMR數(shù)據(jù)推測(cè)分子式為C11H12O4。1H-NMR(500 MHz，CD3OD)δ：5.23(2H，s，H-2)，2.13(3H，s，4-CH3)，3.75(3H，s，5-OCH3)，2.16(3H，s，6-CH3)；13C-NMR(125 MHz，CD3OD)δ：173.9(C-1)，70.8(C-3)，146.2(C-3a)，117.5(C-4)，155.0(C-5)，119.8(C-6)，165.0(C-7)，107.5(C-7a)，11.2(4-CH3)，60.3(5-OCH3)，8.9(6-CH3)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[18]報(bào)道基本一致，故鑒定化合物5為7-羥基-5-甲氧基-4,6-二甲基-異苯并呋喃酮。

化合物6：黃色油狀(CH3OH)，結(jié)合1H-NMR和13C-NMR數(shù)據(jù)推測(cè)分子式為C17H22O8。1H-NMR(500 MHz，CD3OD)δ：5.53(1H，d，J=2.0，H-1′)，5.23(2H，d，J=6.0，H-2)，4.47(1H，dd，J=3.5，2.0，H-2′)，3.98(1H，m，H-5′)，3.87(1H，dd，J=10.0，3.5，H-3′)，3.78(3H，s，5-OCH3)，3.48(1H，t，J=9.5，H-4′)，2.27(3H，s，6-CH3)，2.20(3H，s，4-CH3)，1.22(3H，d，J=6.0,H-6′)；13C-NMR(125 MHz，CD3OD)δ：171.3(C-1)，69.8(C-3)，148.6(C-3a)，122.2(C-4)，164.4(C-5)，126.6(C-6)，154.9(C-7)，113.2(C-7a)，106.4(C-1′)，72.0(C-2′)，72.3(C-3′)，73.4(C-4′)，72.2(C-5′)，18.0(C-6′)，11.3(4-CH3)，60.9(5-OCH3)，10.6(6-CH3)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[19]報(bào)道基本一致，故鑒定化合物6為5-甲氧基-4,6-二甲基-7-氧-α-L-鼠李糖基-異苯并呋喃酮。

化合物7：無(wú)色油狀(CH3OH)，結(jié)合1H-NMR和13C-NMR數(shù)據(jù)推測(cè)分子式為C21H30O4。1H-NMR(500 MHz，CD3OD)δ：4.24(1H，d，J=2.0，H-1)，3.95(1H，m，H-2)，3.93(1H，m，H-3)，4.34(1H，dd，J=4.5，2.0，H-4)，6.07(1H，d，J=4.5，H-5)，2.23(2H，m，H-4′)，2.28(2H，m，H-5′)，5.17(1H，m，H-6′)，2.02(2H，t，J=7.0，C-8′)，2.11(2H，q，J=7.0，H-9′)，5.13(1H，m，H-10′)，5.34(1H，d，J=2.0，H-12′)，5.29(1H，d，J=2.0，H-12′),1.70(3H，s，H-13′)，1.66(3H，s，H-14′)，1.63(3H，s，H-15′)；13C-NMR(125 MHz，CD3OD)δ：70.2(C-1)，70.9(C-2)，70.5(C-3)，67.8(C-4)，136.3(C-5)，126.1(C-6)，89.5(C-1′)，90.0(C-2′)，132.9(C-3′)，38.5(C-4′)，27.7(C-5′)，124.5(C-6′)，136.9(C-7′)，40.9(C-8′)，27.7(C-9′)，125.4(C-10′)，132.1(C-11′)，121.8(C-12′)，16.2(C-13′)，25.9(C-14′)，17.7(C-15′)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[20]報(bào)道基本一致，故鑒定化合物7為pestynol。

化合物1-7的結(jié)構(gòu)如圖1所示。

圖1 化合物 1-7的結(jié)構(gòu)

2.2 活性篩選結(jié)果

2.2.1 抗神經(jīng)炎癥活性

由圖2可知，與空白對(duì)照組相比，LPS造模組細(xì)胞存活率顯著降低(P<0.001)，平均存活率為52.23%，證明LPS模型造模成功。與LPS造模組

Compared with the blank control group,###P<0.001;compared with the LPS group,***P<0.001,**P<0.01,*P<0.05

相比，各給藥組對(duì)BV-2細(xì)胞損傷均有明顯的抑制作用?；衔?在3 μg/mL、6 μg/mL和12 μg/mL濃度下BV-2細(xì)胞的存活率分別為62.84%、69.44%和76.77%；化合物4在3 μg/mL、6 μg/mL和12 μg/mL濃度下BV-2細(xì)胞的存活率分別為59.89%、65.42%和69.69%，以上結(jié)果均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。綜上所述，在一定的濃度范圍內(nèi)，藥物濃度與抗神經(jīng)炎作用具有一定的量效關(guān)系，其中化合物2在12 μg/mL濃度下對(duì)LPS損傷的BV-2細(xì)胞抑制作用最顯著(P<0.001)，與陽(yáng)性對(duì)照組活性接近。

2.2.2 抗菌活性

由表1可知，化合物7對(duì)金黃色葡萄球菌、豬丹毒桿菌和豬鏈球菌顯示弱的抑制活性，MIC值均為100 μg/mL；對(duì)植物病原真菌灰霉菌以及小麥穎枯病菌具有中等的抑制活性，MIC值均為50 μg/mL。

2.2.3 細(xì)胞毒活性

化合物1和7對(duì)Marc-145細(xì)胞表現(xiàn)出一定的細(xì)胞毒活性，其LC50值分別為57.397 μg/mL和35.386 μg/mL，其中化合物7的活性相對(duì)最強(qiáng)，與陽(yáng)性對(duì)照藥5-氟尿嘧啶(28.281 μg/mL)的效果最為接近。化合物2-6對(duì)Marc-145細(xì)胞的LC50都大于80 μg/mL。

表1 化合物的抗菌活性結(jié)果

3 討論

海洋環(huán)境的高壓、高鹽、低溫和營(yíng)養(yǎng)稀缺等特點(diǎn)決定了海洋真菌獨(dú)特的代謝機(jī)制和適應(yīng)機(jī)制，可以產(chǎn)生結(jié)構(gòu)新穎和良好藥理活性的天然產(chǎn)物。青霉屬真菌是海洋真菌中研究較多的真菌之一，也是重要的藥物產(chǎn)生菌。

本研究結(jié)果顯示，化合物1-7均為首次從青霉屬真菌中分離得到?；衔?對(duì)5種病原菌(金黃色葡萄球菌、豬丹毒桿菌、豬鏈球菌、灰霉菌以及小麥穎枯病菌)具有一定的抑制活性。據(jù)報(bào)道，化合物7對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌(肺炎克雷伯菌Klebsiellapneumoniae)有微弱的生長(zhǎng)抑制作用，且對(duì)Jurakat、HL60、THP-1、HT29和A549細(xì)胞具有微弱的細(xì)胞毒活性[20]。此外，也有文獻(xiàn)報(bào)道，化合物1對(duì)大腸桿菌和污垢分歧桿菌(Mycobacteriumsmegmatis)有抑制活性[14]，具有98.6%的鹵蟲致死率[21]?；衔?和7具有研發(fā)抗菌藥物的潛力。

在抗腫瘤方面，化合物1和7對(duì)Marc-145細(xì)胞顯示細(xì)胞毒活性，其中化合物7的活性相對(duì)最強(qiáng)，與5-氟尿嘧啶藥效接近，具有進(jìn)一步篩選成為抗腫瘤藥物的潛力。研究表明，化合物2-6對(duì)Marc-145細(xì)胞顯示較弱的抗腫瘤活性。但也有文獻(xiàn)報(bào)道，化合物5對(duì)HeLa腫瘤細(xì)胞有明顯的抑制作用，其48 h的半抑制濃度(Median Inhibitory Concentration，IC50)值為7.8 μmol/mL，而化合物6對(duì)HeLa腫瘤細(xì)胞無(wú)抑制活性[22]。從結(jié)構(gòu)上來(lái)看，化合物5為7-羥基-5-甲氧基-4,6-二甲基-異苯并呋喃酮，化合物6為5-甲氧基-4,6-二甲基-7-氧-α-L-鼠李糖基-異苯并呋喃酮，化合物6為化合物5的7-O鼠李糖苷，其構(gòu)效關(guān)系值得后續(xù)深入研究。

在神經(jīng)炎癥活性方面，發(fā)現(xiàn)化合物2和4具有良好的抑制神經(jīng)炎癥活性的作用，這兩個(gè)化合物活性篩選研究很少，只有化合物2對(duì)小鼠ST-13脂肪細(xì)胞的誘導(dǎo)分化作用[15]以及化合物4的抗菌活性有少量研究[23]。化合物4為異香豆素類天然產(chǎn)物。有研究表明，異香豆素化合物在一定的濃度范圍內(nèi)能顯著地保護(hù)由H2O2誘導(dǎo)引起的SH-SY5Y細(xì)胞損傷，并具有良好的劑量依賴性[24]。因此，后續(xù)工作將進(jìn)一步研究化合物對(duì)細(xì)胞內(nèi)炎癥因子腫瘤壞死因子(TNF-α)、白細(xì)胞介素1β (IL-1β)、白細(xì)胞介素6(IL-6)以及一氧化氮(NO)的釋放情況，并在計(jì)算機(jī)虛擬篩選技術(shù)指導(dǎo)下，觀察NF-κB/p65的磷酸化水平以及iNOS的表達(dá)。

4 結(jié)論

橘青霉的次生代謝產(chǎn)物種類豐富，且具有廣泛的生物活性。從菌株P(guān)enicilliumcitrinum的發(fā)酵液中共分離得到7個(gè)已知化合物，均為首次從青霉屬中分離得到，其中3,3-二吲哚烷基-1,2-丙二醇(1)為首次從真菌中分離得到。活性篩選結(jié)果表明，robillafuran (2)和gamahorin (4)具有良好的抑制神經(jīng)炎癥活性；3,3-二吲哚烷基-1,2-丙二醇(1)和pestynol (7)對(duì)Marc-145細(xì)胞具有細(xì)胞毒活性，LC50值分別為57.397 μg/mL和35.386 μg/mL；且pestynol (7)具有抗革蘭氏陽(yáng)性菌和植物病原菌活性。以上結(jié)果豐富了海洋來(lái)源Penicilliumcitrinum的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，為發(fā)掘新型神經(jīng)保護(hù)藥物、抗菌藥物及天然活性產(chǎn)物提供了參考依據(jù)。