• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    藻株X6發(fā)酵動(dòng)力學(xué)模型及肌醇對(duì)其生理影響研究

    2022-10-08 10:33:46謝麗娜田璐毅桂媛媛陶俊恒李漢廣
    關(guān)鍵詞:藻株異養(yǎng)肌醇

    謝麗娜,田璐毅,桂媛媛,陶俊恒,李漢廣

    (江西農(nóng)業(yè)大學(xué) 生物科學(xué)與工程學(xué)院/應(yīng)用微生物研究所,江西 南昌 330045)

    【研究意義】隨著全球經(jīng)濟(jì)的快速發(fā)展,人類對(duì)能源的需求日益增加,由于傳統(tǒng)化石燃料儲(chǔ)量的逐年減少,尋找可再生、清潔環(huán)保型能源十分迫切[1]。生物柴油是目前較為成功的新型清潔能源,其生產(chǎn)原料主要來(lái)源于油菜、大豆等植物以及各種動(dòng)物油脂[2]。與這些動(dòng)植物原料相比,微藻具有許多較為明顯的優(yōu)勢(shì):光合效率高、生長(zhǎng)周期短、油脂含量高及一年四季均可培養(yǎng)等優(yōu)點(diǎn)[3-4]。因此加強(qiáng)微藻生物柴油的研究對(duì)加快發(fā)展新型清潔環(huán)保能源,減少人類對(duì)化石能源的依賴具有重要的現(xiàn)實(shí)意義?!厩叭搜芯窟M(jìn)展】發(fā)酵動(dòng)力學(xué)可以模擬發(fā)酵過(guò)程中的動(dòng)態(tài)變化,可為提高相應(yīng)微生物的生長(zhǎng)性能提供一定的理論基礎(chǔ)[5]。宋增光等[6]通過(guò)構(gòu)建動(dòng)力學(xué)模型來(lái)預(yù)測(cè)紫紅曲菌發(fā)酵薏米產(chǎn)α-生育酚過(guò)程,其結(jié)果與實(shí)際測(cè)定值接近,在通過(guò)該動(dòng)力學(xué)模型指導(dǎo)下進(jìn)行代謝調(diào)控發(fā)酵可以縮短生產(chǎn)周期、促進(jìn)產(chǎn)物α-生育酚的合成。另一方面,為提高微藻生物柴油的競(jìng)爭(zhēng)性,提高其油脂含量是現(xiàn)實(shí)可行的一種方式,傳統(tǒng)發(fā)酵過(guò)程中的代謝調(diào)控手段常應(yīng)用于微藻的生產(chǎn)。肌醇廣泛存在于各種動(dòng)植物和微生物體內(nèi),參與生物素的運(yùn)輸以及細(xì)胞壁生物合成等過(guò)程,被認(rèn)為是微藻等光合生物的生長(zhǎng)促進(jìn)劑[7]。Erbil 等[8]研究發(fā)現(xiàn)當(dāng)向培養(yǎng)體系中添加500 mg/L 的肌醇時(shí),海洋紫球藻的生物量相較于對(duì)照組提高了1.28倍?!颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】本實(shí)驗(yàn)室前期分離篩選獲得了一株生長(zhǎng)性能較為優(yōu)良藻株X6,但其生長(zhǎng)特性及如何提高其油脂含量并未進(jìn)行深入研究,因此本試驗(yàn)擬通過(guò)構(gòu)建藻株X6在不同培養(yǎng)條件下的動(dòng)力學(xué)模型以及探究外源調(diào)控(添加肌醇)提高藻株油脂產(chǎn)量的內(nèi)在生理機(jī)制,以期進(jìn)一步提高該藻株的應(yīng)用性?!緮M解決的關(guān)鍵問(wèn)題】通過(guò)Logistic、Luedeking-Piret 及Luedeking-Piret 修正方程構(gòu)建藻株X6不同培養(yǎng)模式下的動(dòng)力學(xué)模型,確定藻株X6最佳培養(yǎng)模式,并在此基礎(chǔ)上探究外源添加肌醇對(duì)藻株X6生長(zhǎng)及生理影響,以期通過(guò)本論文的開(kāi)展為提高其它類似產(chǎn)油性能方面提供一定的理論及試驗(yàn)參考。

    1 材料和方法

    1.1 試驗(yàn)材料

    本試驗(yàn)所用藻株X6[小球藻,Chlorellasp.(GenBank:MK951683.1)]是本課題組保藏藻種;肌醇購(gòu)自索萊寶公司;培養(yǎng)基使用BG-11培養(yǎng)基,培養(yǎng)基成分參考胡文軍等[9]。

    1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

    1.2.1 微藻培養(yǎng) 自養(yǎng)培養(yǎng)、異養(yǎng)培養(yǎng)和混養(yǎng)培養(yǎng)的培養(yǎng)方式參照黎秋玲等[10]建立的方法。

    1.2.2 藻株X6動(dòng)力學(xué)模型構(gòu)建 葡萄糖底物消耗速率可以采用Luedeking-Piret修正模型[11],微藻細(xì)胞生長(zhǎng)可采用Logistic 模型[12],產(chǎn)物合成采用Luedeking-Piret 方程[10]。對(duì)藻株X6生長(zhǎng)過(guò)程中的生物量、油脂含量以及底物消耗等的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,描述其生長(zhǎng)過(guò)程中細(xì)胞生長(zhǎng)、油脂合成及基質(zhì)消耗隨時(shí)間變化之間的關(guān)系。

    1.2.3 不同濃度肌醇對(duì)藻株X6生長(zhǎng)、油脂產(chǎn)量及生理影響 將藻液通過(guò)改良的BG-11培養(yǎng)基(外源添加15 g/L 葡萄糖的BG-11 培養(yǎng)基)培養(yǎng)至穩(wěn)定期,以10%的接種量接種至已滅菌的改良BG-11 培養(yǎng)基中,添加已過(guò)濾除菌的肌醇,使得培養(yǎng)基中肌醇的最終濃度為0.5,1.0,1.5,2.5,5.0 mg/L,每組試驗(yàn)設(shè)置3 個(gè)重復(fù),于120 r/min、27 ℃條件下?lián)u床中避光培養(yǎng)6 d。

    1.3 測(cè)定項(xiàng)目與方法

    1.3.1 油脂含量的測(cè)定 采用胡文軍等[9]建立的氯仿-甲醇提取法提取微藻細(xì)胞中的油脂,計(jì)算公式如下:

    1.3.2 蒽酮比色法測(cè)定總糖含量(total sugar content,TSC) 可溶性總糖含量采用蒽酮-硫酸法測(cè)定[13]。

    1.3.3 葡萄糖含量的測(cè)定 培養(yǎng)基中葡萄糖含量采用二硝基酸鑒定法(DNS)測(cè)定[14]。

    1.3.4 可溶性蛋白質(zhì)含量的測(cè)定 蛋白質(zhì)含量的測(cè)定采用考馬斯亮藍(lán)法[15]。

    1.3.5 丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量的測(cè)定[16]取藻泥0.5 g 加入5 mL 10%三氯乙酸及少量的石英砂,冰浴研磨成勻漿,4 000 r/min 離心10 min。向試管中加入2 mL 上清液和2 mL 0.6%硫代巴比妥酸溶液,混合均勻后沸水浴15 min,用分光光度計(jì)測(cè)其在450,532,600 nm 處的OD 值。計(jì)算公式如下:

    式中Vt是提取液的總體積(mL),Vs是加入到反應(yīng)體系的體積(mL),W是鮮重(g)。

    式中V是藻液總體積。

    1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)及分析

    采用Excel 2019進(jìn)行數(shù)據(jù)整理,用Origin 9.0作圖以及DPS 7.05進(jìn)行差異顯著性分析(P<0.05)。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 不同培養(yǎng)條件下藻株X6生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)曲線

    為獲得藻株X6最佳培養(yǎng)方式及其對(duì)應(yīng)的生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)曲線,對(duì)藻株X6進(jìn)行自養(yǎng)、異養(yǎng)和混養(yǎng)培養(yǎng),分析藻株X6生長(zhǎng)過(guò)程中生物量、底物消耗和油脂產(chǎn)量隨時(shí)間變化的關(guān)系,其結(jié)果如圖1所示。由圖1可知,在整個(gè)試驗(yàn)周期內(nèi),自養(yǎng)培養(yǎng)模式下藻株X6的生物量及油脂含量變化幅度小,生長(zhǎng)緩慢,油脂含量沒(méi)有明顯增加。而異養(yǎng)和混養(yǎng)培養(yǎng)模式下,0~24 h,微藻處于延遲期,生物量和油脂含量沒(méi)有顯著增加,底物消耗較少;24~96 h,微藻處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,生物量和油脂含量急速增加;在96 h 后,微藻進(jìn)入平穩(wěn)期,生物量變化不大,油脂含量繼續(xù)增加,但增幅較對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期平緩,此時(shí)葡萄糖含量持續(xù)降低;當(dāng)培養(yǎng)時(shí)間為144 h,混養(yǎng)培養(yǎng)條件下藻株X6的油脂含量達(dá)到最大值0.85 g/L;而對(duì)于異養(yǎng)培養(yǎng)而言,其油脂含量最大值出現(xiàn)在156 h 時(shí),具體為0.82 g/L;混養(yǎng)培養(yǎng)和異養(yǎng)培養(yǎng)的最大生物量分別出現(xiàn)在168 h 和156 h,此刻它們的最大值分別為14.97 g/L和11.01 g/L。

    圖1 不同培養(yǎng)模式下藻株X6的生長(zhǎng)特性(a)、油脂合成(b)和葡萄糖消耗(c)Fig.1 Growth(a),lipid content(b),glucose consumption(c)of microalga X6 for three culture modes

    在整個(gè)微藻培養(yǎng)過(guò)程中,混養(yǎng)培養(yǎng)下藻株X6的生物量和油脂含量始終高于異養(yǎng)培養(yǎng),且油脂合成與微藻生長(zhǎng)和底物消耗趨勢(shì)一致,表明藻株X6的生長(zhǎng)與油脂合成的關(guān)系可能屬于生長(zhǎng)偶聯(lián)型或部分生長(zhǎng)偶聯(lián)型模式[10],而自養(yǎng)培養(yǎng)條件下的生長(zhǎng)特性在三者當(dāng)中最差,因此后續(xù)僅探討混養(yǎng)與異養(yǎng)模型的構(gòu)建。

    2.2 發(fā)酵動(dòng)力學(xué)模型擬合求解與檢驗(yàn)

    將圖1 的數(shù)據(jù)應(yīng)用于Logistic、Leudeking-Piret 及Luedeking-Piret 修正模型,采用Origin 9.0 軟件進(jìn)行非線性擬合,結(jié)果如表1所示。由表1可知,不同培養(yǎng)條件下的最大比生長(zhǎng)速率(μm)相近,混養(yǎng)培養(yǎng)條件下的μm略大于異養(yǎng)培養(yǎng),說(shuō)明混養(yǎng)培養(yǎng)更適應(yīng)于X6生物量的積累。對(duì)不同培養(yǎng)條件下X6生長(zhǎng)情況、產(chǎn)物合成以及底物消耗進(jìn)行擬合時(shí),其擬合相關(guān)系數(shù)R2的數(shù)值均在0.9 以上,表明擬合方程能夠較好的描述X6不同培養(yǎng)條件下的生長(zhǎng)情況。不同培養(yǎng)條件下的產(chǎn)物生成相關(guān)系數(shù)α和非產(chǎn)物生成相關(guān)系數(shù)β均不為零,且α遠(yuǎn)大于β。在產(chǎn)物合成過(guò)程中,異養(yǎng)培養(yǎng)條件下的最大油脂合成速率QPmax大于混養(yǎng)培養(yǎng),0~84 h期間,異養(yǎng)培養(yǎng)條件下的油脂含量始終高于混養(yǎng)培養(yǎng);而84~144 h混養(yǎng)培養(yǎng)的油脂含量更高。同時(shí)不同培養(yǎng)條件下,混養(yǎng)培養(yǎng)的底物最大比消耗速率QSmax高于異養(yǎng)培養(yǎng),這一結(jié)果與圖1不同培養(yǎng)條件的生長(zhǎng)特性相符。

    表1 動(dòng)力學(xué)參數(shù)模擬值Tab.1 Simulation values of kinetic parameters

    2.3 細(xì)胞生長(zhǎng)模型

    細(xì)胞生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)用Logistic方程描述:

    式(4)中,dX/dt為藻細(xì)胞生長(zhǎng)速度[g/(L·h)],μm為微藻最大比生長(zhǎng)速率(h-1),X為微藻生物量(g/L),Xm為微藻的最大生物量(g/L),t為發(fā)酵時(shí)間(h)。

    對(duì)Logistic方程積分,得:

    用Logistic 方程對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行非線性擬合,結(jié)果見(jiàn)圖2。藻株X6異養(yǎng)培養(yǎng)的擬合相關(guān)系數(shù)R2=0.996 14,混養(yǎng)培養(yǎng)的R2=0.981 72,說(shuō)明該方程的實(shí)測(cè)值與預(yù)測(cè)值擬合良好,可以以此作為描述X6生長(zhǎng)的模型。藻株X6生物量與發(fā)酵時(shí)間函數(shù)為:

    圖2 不同培養(yǎng)條件下藻株X6細(xì)胞干重實(shí)驗(yàn)值與模型擬合結(jié)果的比較Fig.2 Comparison of the experimental cell dry weight of microalga X6with calculated values under different culture conditions

    異養(yǎng)X6:X= 7.345e0.05965t/(10.03 + 0.685 6e0.05965t)

    混養(yǎng)X6:X= 11.04e0.06052t/(13.80 + 0.758 3e0.06052t)

    2.4 油脂合成動(dòng)力學(xué)模型

    微生物生長(zhǎng)與產(chǎn)物合成的關(guān)系可分為生長(zhǎng)偶聯(lián)型(α≠0,β=0)、部分生長(zhǎng)偶聯(lián)型(α≠0,β≠0)和非生長(zhǎng)偶聯(lián)型(α=0,β≠0)。油脂是微藻細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)程中的重要產(chǎn)物,根據(jù)Luedeking-Piret方程可將油脂合成動(dòng)力學(xué)描述為:

    式(6)中,P為油脂含量(g/L)。

    從圖1 可知,油脂的合成與細(xì)胞生長(zhǎng)密切相關(guān),當(dāng)細(xì)胞進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,油脂含量也迅速提高;當(dāng)微藻細(xì)胞進(jìn)入平穩(wěn)期,油脂含量也逐漸趨于平穩(wěn)。利用公式(4)、(5)和(6)建立油脂合成的數(shù)學(xué)模型,經(jīng)換算得:

    根據(jù)表1的數(shù)據(jù)代入可得:

    藻株X6的油脂產(chǎn)量擬合曲線如圖3 所示,異養(yǎng)培養(yǎng)的擬合相關(guān)系數(shù)R2=0.957 72,混養(yǎng)培養(yǎng)的R2=0.940 57,結(jié)果表明實(shí)際數(shù)據(jù)與預(yù)測(cè)數(shù)據(jù)擬合良好,該方程可以較好的描述X6在不同培養(yǎng)條件下的產(chǎn)物合成情況。

    圖3 不同培養(yǎng)條件下藻株X6油脂產(chǎn)量實(shí)驗(yàn)值與模型擬合結(jié)果的比較Fig.3 Comparison of the experimental lipid content of microalga X6 with calculated values under different culture conditions

    2.5 基質(zhì)消耗動(dòng)力學(xué)模型

    基質(zhì)消耗速率可以采用Luedeking-Piret修正模型表示:

    對(duì)方程進(jìn)行換算可得:

    式(9)中S為葡萄糖濃度(g/L),S0為葡萄糖初始濃度(g/L),k1為微藻生長(zhǎng)消耗系數(shù),k2為產(chǎn)物消耗系數(shù)。

    根據(jù)表1的數(shù)據(jù)代入可得:

    藻株X6的底物消耗擬合曲線如圖4 所示,異養(yǎng)培養(yǎng)的擬合相關(guān)系數(shù)R2=0.983 11,混養(yǎng)培養(yǎng)的R2=0.991 22,結(jié)果表明實(shí)際數(shù)據(jù)與預(yù)測(cè)數(shù)據(jù)擬合良好,可以以此方程描述X6在不同培養(yǎng)模式下的底物消耗情況。

    圖4 不同培養(yǎng)條件下藻株X6總糖含量的實(shí)驗(yàn)值與模型擬合結(jié)果的比較Fig.4 Comparison of the experimental total sugar content of microalga X6with calculated values under different culture conditions

    結(jié)合動(dòng)力學(xué)擬合曲線與試驗(yàn)數(shù)據(jù)可知,無(wú)論是異養(yǎng)培養(yǎng)還是混養(yǎng)培養(yǎng),藻株X6的代謝變化趨勢(shì)基本保持一致,混養(yǎng)培養(yǎng)結(jié)合了自養(yǎng)培養(yǎng)與異養(yǎng)培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn),其生物量顯著高于異養(yǎng)和自養(yǎng),且在混養(yǎng)條件下其油脂含量最高,更有利于微藻脂質(zhì)的合成。

    2.6 肌醇對(duì)藻株X6生長(zhǎng)及油脂產(chǎn)量的影響

    為探究不同濃度肌醇對(duì)藻株X6生長(zhǎng)及油脂產(chǎn)量的影響,本試驗(yàn)將0.5,1.0,1.5,2.5,5.0 mg/L 的肌醇添加到改良的BG-11液體培養(yǎng)基(外加葡萄糖)中進(jìn)行混養(yǎng)培養(yǎng),發(fā)酵6 d后對(duì)藻株X6的生物量及油脂含量進(jìn)行測(cè)定,結(jié)果如圖5 所示。由圖5 可知,X6的生物量隨著肌醇濃度的增加而逐漸增長(zhǎng),并在5.0 mg/L時(shí)達(dá)到最大值12.18 g/L,相對(duì)于對(duì)照組提高了9.57%;同時(shí),油脂含量也伴隨肌醇濃度的增加而提高,在2.5 mg/L 時(shí)達(dá)到最大值1.70 g/L(此時(shí)油脂含量占藻細(xì)胞干重14.09%),相較于對(duì)照組提高了10.22%,雖然此時(shí)生物量與5.0 mg/L 添加條件下相比略有下降,但其油脂產(chǎn)率在肌醇濃度為2.5 mg/L 時(shí)達(dá)到最大值,故選擇此濃度為最佳添加量。

    圖5 不同濃度的肌醇對(duì)藻株X6生物量及油脂產(chǎn)量的影響Fig.5 Effect of different concentrations of inositol on biomass and lipid production of microalga X6

    2.7 肌醇對(duì)藻株X6生理生化性質(zhì)的影響

    2.7.1 肌醇對(duì)藻株X6胞內(nèi)可溶性總糖含量的影響 肌醇對(duì)藻株X6胞內(nèi)可溶性總糖含量的影響如圖6所示。從圖6 可知,可溶性總糖含量隨著肌醇濃度的增加出現(xiàn)先增加后又降低的趨勢(shì),并在肌醇濃度為2.5 mg/L 時(shí)達(dá)到最大值140.11 mg/L,相對(duì)于對(duì)照組提高了87.54%,且外源添加肌醇的處理組胞內(nèi)可溶性總糖含量始終高于對(duì)照組。

    圖6 不同濃度的肌醇對(duì)藻株X6胞內(nèi)可溶性總糖含量的影響Fig.6 Effect of different concentrations of inositol on the intracellular total soluble sugar content of microalga X6

    2.7.2 肌醇對(duì)胞內(nèi)可溶性蛋白質(zhì)含量的影響 可溶性蛋白質(zhì)含量是微藻細(xì)胞一個(gè)重要的生理生化指標(biāo),它既可以反映細(xì)胞內(nèi)部代謝的活躍程度,又能在滲透調(diào)節(jié)中起到重要作用,并且與生物體的生長(zhǎng)發(fā)育、抗逆性等密切相關(guān),因此其含量的變化可直接反應(yīng)藻體內(nèi)代謝情況[18]。由圖7 可知,可溶性蛋白質(zhì)的含量隨著肌醇濃度的增加而逐漸降低,當(dāng)肌醇濃度為2.5 mg/L 時(shí),可溶性蛋白質(zhì)含量最低,為0.58 mg/mL,且蛋白質(zhì)含量始終低于對(duì)照組,以上結(jié)果說(shuō)明,肌醇會(huì)降低藻株X6的胞內(nèi)可溶性蛋白質(zhì)含量。

    圖7 不同濃度的肌醇對(duì)藻株X6可溶性蛋白質(zhì)含量的影響Fig.7 Effect of different concentrations of inositol on soluble protein content of microalga X6

    2.7.3 肌醇對(duì)胞內(nèi)丙二醛含量的影響 當(dāng)微藻細(xì)胞受到外界不利因素脅迫時(shí),機(jī)體會(huì)產(chǎn)生過(guò)量的活性氧(ROS),引起或加劇膜脂質(zhì)過(guò)氧化作用,而丙二醛(MDA)是脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)的最終分解產(chǎn)物,因此丙二醛通常用于表示生物體在受到外界刺激后細(xì)胞的氧化損傷程度,丙二醛含量越高說(shuō)明膜受損傷程度越大[19]。由圖8 可知,隨著肌醇濃度的增加,丙二醛的含量呈現(xiàn)先降低后又升高的趨勢(shì),在肌醇濃度為2.5 mg/L 時(shí),丙二醛的含量達(dá)到最小值0.16 mmol/mL,與對(duì)照組相比較降低了64.85%,另一方面,肌醇的添加使得丙二醛的含量始終低于對(duì)照組。以上結(jié)果表明,外源肌醇的添加能夠抑制微藻丙二醛的生成,降低微藻細(xì)胞膜系統(tǒng)受損傷的程度,對(duì)細(xì)胞膜有一定的保護(hù)作用。

    圖8 不同濃度的肌醇對(duì)藻株X6丙二醛含量的影響Fig.8 Effect of different concentrations of inositol on malondialdehyde content of microalga X6

    2.7.4 肌醇對(duì)胞內(nèi)超氧陰離子自由基含量的影響 超氧陰離子自由基是生物體內(nèi)活性氧(ROS)的重要組成部分,當(dāng)微藻細(xì)胞受到外界環(huán)境脅迫時(shí),細(xì)胞內(nèi)會(huì)產(chǎn)生大量ROS,而當(dāng)機(jī)體自身清除自由基的能力不足時(shí),就會(huì)導(dǎo)致氧化應(yīng)激損傷,最終超氧陰離子自由基的含量也隨之升高[20]。由圖9可知,隨著肌醇濃度的增加,超氧陰離子自由基的含量先降低后又升高,并在肌醇濃度為2.5 mg/L時(shí)達(dá)到最小值0.07μmol/mL,與對(duì)照組相比較降低了40.84%,而且肌醇的添加使得超氧陰離子自由基的含量始終低于對(duì)照組,說(shuō)明肌醇能夠抑制藻株X6胞內(nèi)超氧陰離子自由基的生成,對(duì)微藻細(xì)胞具有一定的保護(hù)作用。

    圖9 不同濃度的肌醇對(duì)藻株X6超氧化物陰離子自由基含量的影響Fig.9 Effect of different concentrations of inositol on superoxide anion content of microalga X6

    3 結(jié)論和討論

    微生物發(fā)酵過(guò)程中構(gòu)建發(fā)酵動(dòng)力學(xué)模型是一項(xiàng)成熟的工作,但關(guān)于探究不同培養(yǎng)模式下微藻生長(zhǎng)、產(chǎn)物合成、基質(zhì)消耗等動(dòng)力學(xué)的研究不多。本文研究了藻株X6在不同培養(yǎng)條件下的生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué),對(duì)自養(yǎng)培養(yǎng)、異養(yǎng)培養(yǎng)和混養(yǎng)培養(yǎng)三種培養(yǎng)模式下藻株X6的生長(zhǎng)、產(chǎn)物合成和底物消耗進(jìn)行了實(shí)時(shí)觀察,同時(shí)采用動(dòng)力學(xué)模型(Logistic、Luedeking-Piret以及Luedeking-Piret修正方程)對(duì)異養(yǎng)培養(yǎng)和混養(yǎng)培養(yǎng)進(jìn)行建模,結(jié)果表明藻株X6的油脂合成是部分生長(zhǎng)偶聯(lián)型且混養(yǎng)培養(yǎng)更有利于其生物量及脂質(zhì)的積累。藻株X6進(jìn)行自養(yǎng)培養(yǎng)時(shí),其油脂含量和生物量隨培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)變化不顯著;而在混養(yǎng)培養(yǎng)和異養(yǎng)培養(yǎng)條件下,藻株X6的油脂含量及生物量急速增加,且混養(yǎng)培養(yǎng)條件下能獲得最高的生物量和油脂含量,分別為14.97 g/L 和0.85 g/L。黎小廷[21]研究了混養(yǎng)培養(yǎng)和自養(yǎng)培養(yǎng)對(duì)頓頂螺旋藻生長(zhǎng)的影響,結(jié)果表明混養(yǎng)培養(yǎng)更有利于藻株的生長(zhǎng)與油脂的累積,這與本試驗(yàn)結(jié)果一致,但在該研究中混養(yǎng)培養(yǎng)條件下所獲得的最大生物量為3.87 g/L,僅為本試驗(yàn)混養(yǎng)培養(yǎng)條件的25.85%,這也表明本論文所獲藻株X6具有較為優(yōu)良的生長(zhǎng)特性,有進(jìn)一步研究的價(jià)值。

    肌醇化學(xué)結(jié)構(gòu)類似葡萄糖,有研究表明其可作為促進(jìn)微藻生長(zhǎng)、提高代謝產(chǎn)物的碳源,在培養(yǎng)過(guò)程中加入如肌醇等多元醇可以使微生物在受到環(huán)境脅迫時(shí)提高其生長(zhǎng)性能[22]。本試驗(yàn)在探究肌醇對(duì)藻株X6生長(zhǎng)及生理影響時(shí)發(fā)現(xiàn),當(dāng)肌醇濃度為2.5 mg/L時(shí),藻株X6的油脂含量最高,占細(xì)胞干重的14.09%,且在此條件下其總糖含量達(dá)到最大值140.11 mg/L,相對(duì)于對(duì)照組提高了87.54%,而此時(shí)蛋白質(zhì)含量達(dá)到最小值0.58 mg/mL。有研究表明,微藻能夠在光合碳劃分方面發(fā)生程序性變化,因此細(xì)胞生化成分,特別是脂質(zhì)、碳水化合物和蛋白質(zhì)的含量會(huì)隨環(huán)境和培養(yǎng)條件的變化而產(chǎn)生相應(yīng)改變[23]。Qian等[24]也得到了類似的試驗(yàn)結(jié)果,小球藻添加肌醇后更多的碳和能量將用于碳水化合物和脂質(zhì)的生物合成,這與試驗(yàn)結(jié)果中蛋白質(zhì)含量降低而總糖含量與脂質(zhì)含量提高的情況是一致的。丙二醛與超氧陰離子自由基含量可以作為判斷外源物質(zhì)對(duì)微藻毒害程度的指標(biāo),當(dāng)微藻細(xì)胞受到脅迫等不利條件時(shí),其含量會(huì)上升。有研究表明[25-26],外源添加肌醇可以增強(qiáng)抗氧化酶活性,抑制ROS的積累,保護(hù)細(xì)胞免受氧化應(yīng)激損傷。而試驗(yàn)結(jié)果表明隨著肌醇濃度的增加,丙二醛含量和超氧陰離子自由基含量逐漸降低,且始終低于對(duì)照組,說(shuō)明肌醇在一定程度上降低了丙二醛及超氧陰離子自由基的含量,對(duì)微藻生物膜系統(tǒng)起到了一定的保護(hù)作用。

    綜上所述,通過(guò)不同培養(yǎng)條件下發(fā)酵動(dòng)力學(xué)模型的構(gòu)建,可知藻株X6是部分生長(zhǎng)偶聯(lián)型,在混養(yǎng)培養(yǎng)模式下有助于其生物量及脂質(zhì)的積累。肌醇對(duì)藻株X6的生物量無(wú)顯著促進(jìn)作用,但能提高其油脂生產(chǎn)強(qiáng)度,添加肌醇的處理組與對(duì)照組相比較X6的胞內(nèi)可溶性蛋白質(zhì)、超氧陰離子自由基和丙二醛含量均出現(xiàn)降低趨勢(shì),且始終低于對(duì)照組,總糖含量升高,以上變化表明肌醇對(duì)微藻細(xì)胞具有一定的保護(hù)作用。

    致謝:江西省教育廳科學(xué)研究項(xiàng)目(GJJ160388)和江西農(nóng)業(yè)大學(xué)博士啟動(dòng)基金(9232305387)同時(shí)對(duì)本研究給予了資助,謹(jǐn)致謝意!

    猜你喜歡
    藻株異養(yǎng)肌醇
    中性脂含量高的微擬球藻藻株的快速篩選?
    低蛋白質(zhì)日糧添加植酸酶和肌醇對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能、蛋品質(zhì)及消化道發(fā)育的影響
    基于提高乙醇產(chǎn)率的常壓室溫等離子體微藻誘變育種
    長(zhǎng)心卡帕藻兩種顏色藻株的生長(zhǎng)差異研究
    異養(yǎng)同化降解氯代烴的研究現(xiàn)狀、微生物代謝特性及展望
    小球藻的沼液馴化、抗生素敏感性分析和選擇標(biāo)記篩選
    磷脂酰肌醇蛋白聚糖3在肝細(xì)胞癌組織中的表達(dá)及臨床意義
    微生物法生產(chǎn)肌醇研究進(jìn)展
    馬尾松種子生長(zhǎng)與幼苗成長(zhǎng)過(guò)程的養(yǎng)分動(dòng)態(tài)研究
    大豆磷脂酰肌醇的提取工藝研究
    一区二区av电影网| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 亚洲久久久国产精品| 国产不卡一卡二| 国产麻豆69| 性色av乱码一区二区三区2| 亚洲久久久国产精品| 欧美+亚洲+日韩+国产| 亚洲av成人一区二区三| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 男人操女人黄网站| 欧美在线一区亚洲| 日韩三级视频一区二区三区| 99re在线观看精品视频| 久久久精品区二区三区| 国产亚洲精品一区二区www | 亚洲久久久国产精品| 在线永久观看黄色视频| 亚洲精品国产区一区二| 99九九在线精品视频| 久久久久精品国产欧美久久久| 久久亚洲真实| 18禁国产床啪视频网站| 日本五十路高清| 中文亚洲av片在线观看爽 | 日日爽夜夜爽网站| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 黑人欧美特级aaaaaa片| 少妇的丰满在线观看| 久久精品成人免费网站| av网站免费在线观看视频| 亚洲,欧美精品.| 国产真人三级小视频在线观看| 亚洲中文字幕日韩| 最近最新中文字幕大全电影3 | 国产成人免费无遮挡视频| 夜夜夜夜夜久久久久| 中文字幕色久视频| 一本色道久久久久久精品综合| 亚洲一区二区三区欧美精品| 久久亚洲真实| 精品国产乱码久久久久久男人| 国产伦理片在线播放av一区| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 高清欧美精品videossex| 啦啦啦在线免费观看视频4| 色婷婷av一区二区三区视频| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 精品亚洲成国产av| 成年版毛片免费区| 老司机深夜福利视频在线观看| 国产精品一区二区在线不卡| 婷婷丁香在线五月| 极品人妻少妇av视频| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 天天操日日干夜夜撸| 久久中文字幕一级| 成在线人永久免费视频| 精品国产乱码久久久久久男人| 黑丝袜美女国产一区| 久久久水蜜桃国产精品网| 搡老岳熟女国产| 妹子高潮喷水视频| 国产精品一区二区精品视频观看| a级毛片黄视频| 午夜免费鲁丝| 9色porny在线观看| 在线播放国产精品三级| 美女扒开内裤让男人捅视频| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 国产极品粉嫩免费观看在线| 18在线观看网站| 久久久国产精品麻豆| 91精品三级在线观看| 少妇被粗大的猛进出69影院| 午夜福利欧美成人| avwww免费| 亚洲男人天堂网一区| 大陆偷拍与自拍| 亚洲一区二区三区欧美精品| 久久精品成人免费网站| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 亚洲成人国产一区在线观看| 久久精品国产a三级三级三级| 午夜两性在线视频| 亚洲精品成人av观看孕妇| 99国产精品一区二区三区| 国产成人影院久久av| 日韩三级视频一区二区三区| 久久中文看片网| 一进一出好大好爽视频| 1024香蕉在线观看| 蜜桃在线观看..| 亚洲美女黄片视频| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 亚洲天堂av无毛| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 女人久久www免费人成看片| 十八禁网站网址无遮挡| www.999成人在线观看| 99精国产麻豆久久婷婷| 18在线观看网站| 国产黄色免费在线视频| 中文字幕人妻熟女乱码| 一本色道久久久久久精品综合| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 国产成人精品久久二区二区免费| 激情视频va一区二区三区| 天天影视国产精品| 在线永久观看黄色视频| 亚洲av美国av| 十八禁网站网址无遮挡| 岛国毛片在线播放| 国产一区二区激情短视频| 叶爱在线成人免费视频播放| 成人免费观看视频高清| 日韩欧美免费精品| 黄片大片在线免费观看| 在线观看免费日韩欧美大片| 国产色视频综合| 十八禁人妻一区二区| 国产精品一区二区在线观看99| 亚洲中文av在线| 亚洲精品一二三| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| av有码第一页| 日韩人妻精品一区2区三区| 久久久精品免费免费高清| 亚洲精品中文字幕在线视频| 国产在线一区二区三区精| 自线自在国产av| 韩国精品一区二区三区| 精品亚洲成a人片在线观看| 人妻 亚洲 视频| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 国产欧美亚洲国产| 亚洲七黄色美女视频| 久久人妻熟女aⅴ| 大型av网站在线播放| 大香蕉久久成人网| 国产成+人综合+亚洲专区| xxxhd国产人妻xxx| 香蕉久久夜色| 日本黄色视频三级网站网址 | 一级毛片电影观看| 精品少妇久久久久久888优播| 国产精品久久久久久精品电影小说| 激情在线观看视频在线高清 | 国产日韩欧美视频二区| 国产精品久久久久久精品古装| 欧美 日韩 精品 国产| 无遮挡黄片免费观看| 考比视频在线观看| 国产一区二区三区综合在线观看| 免费观看av网站的网址| 中国美女看黄片| 日本一区二区免费在线视频| 日本一区二区免费在线视频| 成年人黄色毛片网站| 黄色片一级片一级黄色片| 欧美黄色淫秽网站| 黄色丝袜av网址大全| 国产精品电影一区二区三区 | 久久国产精品人妻蜜桃| 国产99久久九九免费精品| 亚洲午夜理论影院| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 国产高清视频在线播放一区| 日本五十路高清| 深夜精品福利| 老司机影院毛片| 精品福利永久在线观看| 两性夫妻黄色片| 欧美乱妇无乱码| 人人妻人人澡人人看| aaaaa片日本免费| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 国产97色在线日韩免费| 国产单亲对白刺激| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 91精品国产国语对白视频| 一本久久精品| 久久久精品区二区三区| 久久精品国产a三级三级三级| 一个人免费看片子| 国产一区二区三区综合在线观看| 精品福利永久在线观看| 99热网站在线观看| 成人三级做爰电影| 色尼玛亚洲综合影院| 丁香六月欧美| 亚洲中文字幕日韩| 欧美日韩黄片免| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 国产精品av久久久久免费| 高清毛片免费观看视频网站 | 男女高潮啪啪啪动态图| 中文字幕高清在线视频| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 欧美日韩黄片免| 久久亚洲精品不卡| 一二三四社区在线视频社区8| 他把我摸到了高潮在线观看 | 免费在线观看黄色视频的| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 青草久久国产| 亚洲免费av在线视频| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 亚洲中文日韩欧美视频| 757午夜福利合集在线观看| 免费在线观看影片大全网站| 国产日韩欧美亚洲二区| 国产主播在线观看一区二区| 午夜福利,免费看| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 亚洲人成电影免费在线| av网站在线播放免费| 亚洲国产中文字幕在线视频| √禁漫天堂资源中文www| 99久久99久久久精品蜜桃| 国产视频一区二区在线看| 新久久久久国产一级毛片| 亚洲,欧美精品.| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 操出白浆在线播放| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 一边摸一边做爽爽视频免费| 老司机靠b影院| 亚洲少妇的诱惑av| a级片在线免费高清观看视频| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 成年人黄色毛片网站| 99久久精品国产亚洲精品| 午夜成年电影在线免费观看| 在线 av 中文字幕| 日韩免费av在线播放| 国产淫语在线视频| 欧美国产精品va在线观看不卡| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 在线观看www视频免费| 久久精品国产亚洲av香蕉五月 | 国产在线一区二区三区精| 日韩欧美三级三区| 日韩视频一区二区在线观看| 性色av乱码一区二区三区2| 国产国语露脸激情在线看| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 精品国内亚洲2022精品成人 | 久9热在线精品视频| av网站在线播放免费| 亚洲精品av麻豆狂野| 曰老女人黄片| 国产在线一区二区三区精| 午夜福利,免费看| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 亚洲成国产人片在线观看| 男女高潮啪啪啪动态图| 久久久久网色| 黄色 视频免费看| 午夜福利一区二区在线看| 满18在线观看网站| 免费不卡黄色视频| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 韩国精品一区二区三区| 久久天堂一区二区三区四区| 老司机影院毛片| 这个男人来自地球电影免费观看| 伦理电影免费视频| 午夜91福利影院| 午夜精品国产一区二区电影| 国产av一区二区精品久久| 久久中文字幕一级| 亚洲天堂av无毛| 欧美大码av| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 三级毛片av免费| 久久国产亚洲av麻豆专区| 激情视频va一区二区三区| 久久亚洲精品不卡| 男女下面插进去视频免费观看| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 一级毛片女人18水好多| 岛国在线观看网站| av天堂在线播放| 午夜福利,免费看| 超色免费av| 成年女人毛片免费观看观看9 | 电影成人av| 亚洲免费av在线视频| 久久 成人 亚洲| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 精品人妻在线不人妻| av超薄肉色丝袜交足视频| 亚洲avbb在线观看| 欧美激情久久久久久爽电影 | 老汉色∧v一级毛片| 欧美黑人精品巨大| 精品久久久久久久毛片微露脸| 后天国语完整版免费观看| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 欧美人与性动交α欧美软件| 精品亚洲成国产av| 国产精品.久久久| 久久午夜亚洲精品久久| 国产精品一区二区在线不卡| 成年人午夜在线观看视频| 老熟女久久久| 久久久水蜜桃国产精品网| 麻豆av在线久日| 久久久国产一区二区| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 欧美变态另类bdsm刘玥| 天天操日日干夜夜撸| 亚洲国产中文字幕在线视频| 欧美日韩av久久| 久久狼人影院| 一夜夜www| 亚洲伊人久久精品综合| 国产99久久九九免费精品| 免费在线观看影片大全网站| 十八禁网站网址无遮挡| 久久精品成人免费网站| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 大型av网站在线播放| 久久ye,这里只有精品| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 午夜福利欧美成人| 久久99一区二区三区| 午夜成年电影在线免费观看| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 国产免费av片在线观看野外av| 亚洲精华国产精华精| 精品少妇久久久久久888优播| 国产高清视频在线播放一区| 欧美日本中文国产一区发布| 亚洲天堂av无毛| 色综合婷婷激情| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 欧美黄色片欧美黄色片| 国产色视频综合| 大片免费播放器 马上看| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 国产色视频综合| 久久99热这里只频精品6学生| 老熟妇仑乱视频hdxx| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 69精品国产乱码久久久| 757午夜福利合集在线观看| 久久ye,这里只有精品| www日本在线高清视频| 男女无遮挡免费网站观看| 一级片免费观看大全| 久久影院123| 自线自在国产av| 大型av网站在线播放| 亚洲国产中文字幕在线视频| 下体分泌物呈黄色| 精品一区二区三卡| 亚洲一码二码三码区别大吗| 大码成人一级视频| 国产精品免费视频内射| 一进一出好大好爽视频| 成人黄色视频免费在线看| 一区二区三区国产精品乱码| videos熟女内射| 一级,二级,三级黄色视频| 欧美大码av| 三上悠亚av全集在线观看| 午夜福利免费观看在线| 久久这里只有精品19| 国产老妇伦熟女老妇高清| 热99久久久久精品小说推荐| 成年人黄色毛片网站| 国产成人精品久久二区二区免费| 99re在线观看精品视频| 久久精品成人免费网站| 久久国产精品人妻蜜桃| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 国产福利在线免费观看视频| 正在播放国产对白刺激| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 天天添夜夜摸| 大码成人一级视频| 亚洲三区欧美一区| 成人免费观看视频高清| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 欧美精品亚洲一区二区| 亚洲人成77777在线视频| av片东京热男人的天堂| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 精品人妻在线不人妻| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 国产精品一区二区在线不卡| 午夜精品国产一区二区电影| 国产伦人伦偷精品视频| 久久ye,这里只有精品| 激情视频va一区二区三区| av有码第一页| 亚洲avbb在线观看| 久久久久久人人人人人| 黄色视频,在线免费观看| 高清av免费在线| 日韩中文字幕欧美一区二区| 亚洲精品粉嫩美女一区| 一本色道久久久久久精品综合| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 日本黄色日本黄色录像| 欧美黄色淫秽网站| 国产精品1区2区在线观看. | 亚洲精品av麻豆狂野| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 男女下面插进去视频免费观看| xxxhd国产人妻xxx| 久久人人97超碰香蕉20202| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 日韩中文字幕视频在线看片| 黄色成人免费大全| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 欧美另类亚洲清纯唯美| 国产亚洲一区二区精品| 欧美激情高清一区二区三区| 国产片内射在线| 999久久久国产精品视频| 国产成人精品久久二区二区91| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 少妇精品久久久久久久| 欧美日韩一级在线毛片| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 亚洲,欧美精品.| 99热网站在线观看| 国产视频一区二区在线看| 亚洲性夜色夜夜综合| 欧美另类亚洲清纯唯美| 男人舔女人的私密视频| 国产黄色免费在线视频| 丁香六月欧美| kizo精华| 免费不卡黄色视频| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 亚洲九九香蕉| 久久久久久久久免费视频了| 丁香六月天网| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 老汉色av国产亚洲站长工具| av线在线观看网站| 一级片免费观看大全| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 一边摸一边抽搐一进一出视频| 国产欧美日韩精品亚洲av| 亚洲欧洲日产国产| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 中国美女看黄片| 99国产精品99久久久久| 亚洲视频免费观看视频| av片东京热男人的天堂| 丝袜在线中文字幕| 久久久久久久精品吃奶| 久久国产亚洲av麻豆专区| av视频免费观看在线观看| 久久这里只有精品19| 蜜桃国产av成人99| 亚洲黑人精品在线| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 亚洲av美国av| 欧美国产精品一级二级三级| 十八禁高潮呻吟视频| 久9热在线精品视频| 黄色视频在线播放观看不卡| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 国产激情久久老熟女| 老熟妇仑乱视频hdxx| 亚洲一区二区三区欧美精品| 精品人妻1区二区| 国产黄色免费在线视频| 91九色精品人成在线观看| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 成人三级做爰电影| 日韩免费av在线播放| 中亚洲国语对白在线视频| 不卡av一区二区三区| 性高湖久久久久久久久免费观看| 最新美女视频免费是黄的| 精品国产一区二区三区四区第35| 一进一出抽搐动态| 97人妻天天添夜夜摸| 欧美激情高清一区二区三区| 日日爽夜夜爽网站| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 国产在线一区二区三区精| 后天国语完整版免费观看| 欧美日韩av久久| 亚洲人成77777在线视频| 久久青草综合色| kizo精华| 国产精品欧美亚洲77777| 国产在线观看jvid| 操美女的视频在线观看| 男人舔女人的私密视频| 最新的欧美精品一区二区| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 午夜福利免费观看在线| 国产精品一区二区在线不卡| 99re在线观看精品视频| 日本vs欧美在线观看视频| 丝袜在线中文字幕| 久久性视频一级片| 久热爱精品视频在线9| 男女下面插进去视频免费观看| 99久久99久久久精品蜜桃| 黄色视频不卡| 欧美久久黑人一区二区| 欧美在线黄色| 亚洲国产av影院在线观看| 蜜桃国产av成人99| 久久免费观看电影| 女性被躁到高潮视频| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 国产精品久久久久久精品古装| 18在线观看网站| 国产精品免费视频内射| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 一区二区三区国产精品乱码| 久久毛片免费看一区二区三区| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 老汉色∧v一级毛片| 大香蕉久久成人网| 国产精品免费视频内射| 男女下面插进去视频免费观看| 一区二区三区乱码不卡18| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | a级片在线免费高清观看视频| svipshipincom国产片| 欧美午夜高清在线| 国产激情久久老熟女| 国产在线观看jvid| 首页视频小说图片口味搜索| 色在线成人网| 一本色道久久久久久精品综合| 乱人伦中国视频| 中文字幕人妻熟女乱码| 午夜视频精品福利| av福利片在线| 久久人人97超碰香蕉20202| 欧美日韩一级在线毛片| 激情视频va一区二区三区| 久久性视频一级片| 日韩中文字幕欧美一区二区| 黄片大片在线免费观看| 变态另类成人亚洲欧美熟女 | 大陆偷拍与自拍| 搡老熟女国产l中国老女人| 一本一本久久a久久精品综合妖精| 久久国产精品人妻蜜桃| a级片在线免费高清观看视频| 91大片在线观看| 1024香蕉在线观看| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 蜜桃在线观看..| 黑人猛操日本美女一级片| 两个人免费观看高清视频| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 天天影视国产精品| 国产成人啪精品午夜网站| 在线永久观看黄色视频| 成人18禁在线播放| 亚洲精品一二三| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 国产91精品成人一区二区三区 | 波多野结衣av一区二区av| 操美女的视频在线观看| 精品人妻1区二区| 日本vs欧美在线观看视频| 涩涩av久久男人的天堂| 久久精品国产99精品国产亚洲性色 | 成年女人毛片免费观看观看9 | 水蜜桃什么品种好| 亚洲精品中文字幕一二三四区 | 女性生殖器流出的白浆| 午夜日韩欧美国产| 99在线人妻在线中文字幕 | 久久久国产一区二区| 男女无遮挡免费网站观看| 亚洲avbb在线观看| 99re在线观看精品视频| 美女扒开内裤让男人捅视频| 久久久精品免费免费高清| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 亚洲中文av在线| 亚洲av成人一区二区三| 国产男女超爽视频在线观看| av电影中文网址| 满18在线观看网站| 黄色成人免费大全| 久久性视频一级片| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 视频区图区小说| 日韩成人在线观看一区二区三区| 777米奇影视久久| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 亚洲精品国产一区二区精华液| 日韩欧美一区二区三区在线观看 | 男女下面插进去视频免费观看| 国产精品久久久久久精品电影小说| av超薄肉色丝袜交足视频| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 国产av又大| 国产在线一区二区三区精| 国产精品亚洲av一区麻豆|