西安市部分奶山羊養(yǎng)殖場(chǎng)羊傳染性胸膜肺炎抗體檢測(cè)及分析

李忠軍，董 釗，張 飛，尤鵬飛，馮 苗*

(1.西安市閻良區(qū)動(dòng)物疾病預(yù)防控制中心，陜西閻良 710089；2.西安市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，陜西西安 710061；3.西安市閻良區(qū)畜牧獸醫(yī)站，陜西閻良 710089)

山羊傳染性胸膜肺炎(Contagious caprine pleuropneumonia，CCPP)主要是由山羊支原體山羊肺炎亞種(Mycoplasmacapricolumsubsp.capripneumoniae，Mccp)、綿羊肺炎支原體(Mycoplasmaovipneumoniae，Mo)和絲狀支原體山羊亞種(Mycoplasmamycoidessubsp.capri，Mmc)等多種支原體引起的以侵害呼吸系統(tǒng)為主的傳染病，臨床癥狀通常以發(fā)熱、咳嗽、呼吸困難為主[1]。目前，全球已經(jīng)報(bào)道發(fā)生過(guò)CCPP感染的國(guó)家和地區(qū)有40多個(gè)[2]。因支原體感染引起的CCPP不僅給非洲和地中海沿岸各養(yǎng)羊國(guó)家和地區(qū)造成了一定程度的損失，而且在我國(guó)也廣泛流行[3-4]。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，我國(guó)各省(市、區(qū))的流行株也有所差異[5]，這種現(xiàn)象使病情發(fā)展更加復(fù)雜。CCPP僅靠臨床癥狀和病理變化難以確診并針對(duì)性用藥，也因此導(dǎo)致了該病在我國(guó)長(zhǎng)期存在。奶山羊養(yǎng)殖業(yè)作為陜西畜牧業(yè)中最具有優(yōu)勢(shì)的特色養(yǎng)殖業(yè)，養(yǎng)殖的數(shù)量和規(guī)模居全國(guó)之最[6]，因此在養(yǎng)殖規(guī)模日益增長(zhǎng)的情況下，各類疫病的防控尤為重要。本研究通過(guò)對(duì)西安市臨潼區(qū)、高陵區(qū)和閻良區(qū)未免疫山羊支原體肺炎疫苗的1013份奶山羊血清進(jìn)行Mccp和Mo的抗體檢測(cè)和分析，從而了解山羊傳染性胸膜肺炎在西安地區(qū)奶山羊養(yǎng)殖場(chǎng)的流行情況，為西安市奶山羊傳染性胸膜肺炎的流行傳播情況提供理論基礎(chǔ)，也為臨床合理選擇疫苗和科學(xué)制定免疫計(jì)劃提供指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 被檢血清樣品 用一次性采血容器隨機(jī)采集西安市臨潼區(qū)、高陵區(qū)、閻良區(qū)均未經(jīng)過(guò)山羊傳染性胸膜肺炎疫苗免疫的奶山羊血清各198份、163份、652份，共計(jì)1013份，4℃冰箱傾斜靜置5 h后，在室溫下放置待血清析出，分裝保存于-20℃?zhèn)溆谩?/p>

1.1.2 檢測(cè)試劑盒 山羊支原體山羊肺炎亞種抗體ELISA試劑盒和山羊感染綿羊肺炎支原體抗體ELISA試劑盒，廣州悅洋生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品。

1.1.3 主要儀器設(shè)備 恒溫培養(yǎng)箱(GHP-9160)，上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司產(chǎn)品；恒溫振蕩器(THZ-C)，蘇州培英實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司產(chǎn)品；全波長(zhǎng)多功能酶標(biāo)儀(XSP-37XBY)，上海光學(xué)儀器有限公司產(chǎn)品。

1.2 方法

按照Mccp和Mo抗體ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行血清抗體的檢測(cè)。①?gòu)匿X箔袋中取出酶標(biāo)板室溫平衡20 min；②設(shè)置陰、陽(yáng)性對(duì)照孔和樣本孔，陰、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照各50 μL；③每孔先加入10 μL待檢測(cè)血清再依次加入樣本稀釋液40 μL；④在陰、陽(yáng)性對(duì)照孔和樣本孔中加入HRP標(biāo)記的二抗100 μL，37℃恒溫箱孵育60 min；⑤棄去液體，每孔加滿洗滌液，靜置1 min后甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次；⑥將底物液A、B每孔依次加入50 μL，37℃避光孵育15 min；⑦每孔加入終止液50 μL，在450 nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值；⑧結(jié)果判定：臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15。樣品OD值>臨界值時(shí)樣品為陽(yáng)性，反之則為陰性。

2 結(jié)果

2.1 山羊支原體山羊肺炎亞種抗體檢測(cè)結(jié)果

山羊支原體山羊肺炎亞種抗體檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1。在檢測(cè)的1013份血清樣品中，陽(yáng)性血清共計(jì)83份，總體陽(yáng)性率為8.29%。3個(gè)區(qū)的陽(yáng)性率分別為臨潼7.07%，高陵16.56%，閻良6.6%。

表1山羊支原體山羊肺炎亞種抗體檢測(cè)結(jié)果

2.2 山羊感染綿羊肺炎支原體抗體檢測(cè)結(jié)果

山羊感染綿羊肺炎支原體抗體檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表2。在檢測(cè)的1013份血清中，陽(yáng)性血清共計(jì)223份，總體陽(yáng)性率為22.21%。3個(gè)區(qū)的陽(yáng)性率分別為臨潼19.19%，高陵30.06%，閻良21.17%。

表2綿羊肺炎支原體抗體檢測(cè)結(jié)果

2.3 山羊支原體山羊肺炎亞種和山羊的綿羊肺炎支原體混合感染檢測(cè)結(jié)果

山羊支原體山羊肺炎亞種和山羊的綿羊肺炎支原體混合感染檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表3。在檢測(cè)的1013份血清中，混合感染的陽(yáng)性血清共計(jì)17份，總體陽(yáng)性率為1.68%。3個(gè)區(qū)的混合感染陽(yáng)性率分別為臨潼2.53%，高陵4.91%，閻良0.61%。

3 討論

Mo和Mccp對(duì)山羊和綿羊均具有感染性，由Mo和Mccp導(dǎo)致的CCPP在我國(guó)不同地區(qū)均有不同程度的流行[7]，常導(dǎo)致羊只大量死亡。我國(guó)部分地區(qū)綿羊Mo抗體陽(yáng)性率高達(dá)46.66%～100.00%[8]，Mccp抗體陽(yáng)性率高達(dá)19.05%～58.33%[9]。CCPP不分季節(jié)均可感染羊群，在冬春季節(jié)由于氣候條件變化劇烈更易發(fā)生感染，同舍羊只密度過(guò)大及寒冷潮濕會(huì)加重該病傳播和發(fā)生[10]。目前，病原的分離鑒定仍然是該病確診的標(biāo)準(zhǔn)方法[11]，但是由于支原體的病原分離比較困難，且長(zhǎng)期以來(lái)廣大基層獸醫(yī)人員對(duì)山羊傳染性胸膜肺炎病原的認(rèn)識(shí)還不太清楚，在臨床上只能依靠個(gè)人經(jīng)驗(yàn)對(duì)臨床癥狀和病變特征做出診斷和治療，導(dǎo)致由Mccp和Mo等支原體感染引起的山羊傳染性胸膜肺炎在病初未能及時(shí)發(fā)現(xiàn)，后期又不能及時(shí)針對(duì)性治療并采取科學(xué)合理有效的防控手段[12]，最終給養(yǎng)殖戶造成較大損失。鑒于此，本研究對(duì)采集自西安市1013只奶山羊的血清進(jìn)行Mccp和Mo抗體檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果表明西安市各地區(qū)存在不同程度山羊傳染性胸膜肺炎疫病的流行，應(yīng)該引起相應(yīng)的重視并且加強(qiáng)對(duì)該疾病的防控。

表3山羊支原體山羊肺炎亞種和綿羊肺炎支原體混合感染檢測(cè)結(jié)果

本次研究結(jié)果顯示，由Mo引起的山羊傳染性胸膜肺炎總體陽(yáng)性率為22.21%，由Mccp引起的山羊傳染性胸膜肺炎總體陽(yáng)性率為8.92%，說(shuō)明西安市山羊傳染性胸膜肺炎整體自然感染率較高；而Mo的陽(yáng)性率高于Mccp的陽(yáng)性率，表明西安市山羊傳染性胸膜肺炎感染的病原以Mo為主。經(jīng)過(guò)分析，造成這種現(xiàn)象的原因主要是CCPP并非奶山羊強(qiáng)制免疫病種，且目前我國(guó)使用的山羊傳染性胸膜肺炎疫苗大都以Mccp滅活疫苗為主[1]，因此即便選擇了疫苗免疫，Mo和Mccp在羊群中的自然感染率仍整體偏高。為降低兩種病原的自然感染率，養(yǎng)殖場(chǎng)(戶)必須按要求合理進(jìn)行免疫，而且在疫苗的選擇上應(yīng)該同時(shí)使用兩種以上的疫苗以加強(qiáng)保護(hù)效力[13]，在進(jìn)行疫苗免疫之后定期進(jìn)行抗體水平的監(jiān)測(cè)，同時(shí)制定更加有針對(duì)性的防控措施，便可取得更好的免疫效果。

在檢測(cè)的3個(gè)行政區(qū)中，高陵區(qū)、臨潼區(qū)、閻良區(qū)的Mo陽(yáng)性率分別為30.06%、19.9%、21.17%；Mccp陽(yáng)性率分別為16.56%、7.07%、6.6%。其中，高陵區(qū)兩種病原的自然感染率明顯高于臨潼和閻良兩地區(qū)。此外，高陵區(qū)、臨潼區(qū)、閻良區(qū)Mo和Mccp混合感染陽(yáng)性率分別為4.91%、2.53%、0.61%，這些數(shù)據(jù)表明山羊傳染性胸膜肺炎除單一感染外還存在少數(shù)混合感染的情況。同時(shí)，羊群在感染支原體性疫病時(shí)可能會(huì)繼發(fā)其他呼吸系統(tǒng)疾病，從而導(dǎo)致羊群死亡率更高[14]。根據(jù)本研究的數(shù)據(jù)，山羊支原體性疫病對(duì)于西安市奶山羊養(yǎng)殖業(yè)存在較大的威脅，所以養(yǎng)殖場(chǎng)(戶)必須認(rèn)識(shí)到該病的危害并給予足夠的重視，同時(shí)要進(jìn)行科學(xué)合理免疫，加強(qiáng)飼養(yǎng)管理水平，保持環(huán)境衛(wèi)生，合理搭配飼喂，做到早發(fā)現(xiàn)早治療[15-16]，降低山羊傳染性胸膜肺炎的自然感染率，動(dòng)物疫病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)加大該病防控技術(shù)培訓(xùn)及指導(dǎo)力度，從而將本病的危害程度降到最低。