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    基于“既病防變”理論研究消潰湯調(diào)控IL-6/STAT3信號(hào)通路抑制潰瘍性結(jié)腸炎癌變的作用機(jī)制*

    2022-08-24 03:27:14王芳增盧玉陽(yáng)楊會(huì)舉劉佃溫
    中醫(yī)研究 2022年8期
    關(guān)鍵詞:沙拉結(jié)腸黏膜

    王芳增,盧玉陽(yáng),楊會(huì)舉,劉佃溫

    (1.濮陽(yáng)市第三人民醫(yī)院,河南 濮陽(yáng) 457000;2.河南中醫(yī)藥大學(xué)針灸推拿學(xué)院,河南 鄭州 450046;3.河南中醫(yī)藥大學(xué)第三附屬醫(yī)院肛腸科,河南 鄭州 450008)

    潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis,UC)是一種病因復(fù)雜、機(jī)制不明、以結(jié)直腸反復(fù)炎癥性病變?yōu)橹鞯募膊1]。其臨床表現(xiàn)以腹瀉、腹痛、黏液膿血便為主,腸外癥狀為輔,反復(fù)發(fā)作,病程遷延,伴有癌變的風(fēng)險(xiǎn)[2-3]。潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病率有逐年增高的趨勢(shì),在潰瘍性結(jié)腸炎中結(jié)腸癌的發(fā)病率為3%~5%。隨著患病時(shí)間的延長(zhǎng),發(fā)生結(jié)腸癌的危險(xiǎn)性也逐年增加,≥10年者的發(fā)生率是普通人的10倍以上[4]。《素問(wèn)·四氣調(diào)神大論篇》曰:“圣人不治已病治未病,不治已亂治未亂。”意即未病先防與既病防變:在未患病時(shí)采取有效措施,扶助正氣,去除病因,使疾病不能顯現(xiàn);患病之后,采取有效措施進(jìn)行早期診斷和治療,截?cái)嗉膊〉陌l(fā)展和傳變,并阻止疾病預(yù)后復(fù)發(fā),鞏固療效[5]。消潰湯是劉佃溫教授自擬方。本課題組經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期臨床觀察發(fā)現(xiàn),消潰湯治療UC療效確切,能明顯改善患者臨床癥狀;同時(shí)前期研究[6]表明,消潰湯能阻斷大鼠UC病程進(jìn)展,修復(fù)受損黏膜,改善癥狀。方中白頭翁入大腸經(jīng),清熱解毒,涼血止痢,為君藥。白及收斂止血,消腫生肌,為臣藥。佐以石榴皮、五倍子澀腸止瀉,收斂止血;黃連、苦參清大腸之濕熱,祛大腸之濁毒。白蒺藜活血祛風(fēng)使大腸得以濡養(yǎng),為使藥。全方共奏清熱解毒滲濕、澀腸止血之效。本研究通過(guò)建立大鼠UC模型,基于“既病防變”理論觀察消潰湯對(duì)于白細(xì)胞介素(IL)-6/轉(zhuǎn)錄激活因子(STAT3)信號(hào)通路的調(diào)控作用,探究其抑制潰瘍性結(jié)腸炎癌變的相關(guān)機(jī)制,旨在為UC的臨床治療提供相關(guān)理論依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 動(dòng) 物

    4~5周齡SD大鼠60只,雄性,體質(zhì)量(200±20)g,由河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證編號(hào)為SCXK(豫)2017-0001,動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào)41003100001868。飼養(yǎng)于河南中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心,實(shí)驗(yàn)室使用許可證編號(hào)SYXK(豫)2010-0001。環(huán)境相對(duì)濕度40%~60%,室溫20~22 ℃,每日光照12 h。飼養(yǎng)在塑料籠內(nèi),每籠大鼠不多于3只,自由飲水、攝食,常規(guī)飼養(yǎng)7 d以適應(yīng)環(huán)境。

    1.2 藥品、試劑與儀器

    消潰湯藥物組成:白頭翁20 g,石榴皮15 g,白及20 g,五倍子15 g,白蒺藜10 g,黃連15 g,苦參15 g。藥材由河南中醫(yī)藥大學(xué)第三附屬醫(yī)院中藥房提供。參照徐叔云教授主編的《中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》大鼠和人之間按照體表面積折算出來(lái)的等效劑量比值換算,動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中的治療組按成人劑量的7倍為有效劑量。成人體質(zhì)量以60 kg計(jì)算,臨床用藥量為110 g/d,給藥劑量為1.83 g/kg;大鼠給藥量為10倍計(jì)算,即給藥劑量為18.3 g/kg。煎煮方法:先將以上藥物置于干凈的玻璃杯中,加入蒸餾水500 mL浸泡 2 h;于100 ℃煎煮30 min,過(guò)濾藥渣得濾液約300 mL;將藥渣再加入蒸餾水400 mL,同法煎煮,得濾液約300 mL;合并兩次濾液濃縮成60 mL(生藥含量1.83 g/mL),置4 °C冰箱保存,備用。美沙拉嗪緩釋顆粒劑,愛的發(fā)制藥公司產(chǎn)品,注冊(cè)證號(hào)H20100063,0.5 g/袋,用生理鹽水配制成0.1 g/mL的混懸液,于4 ℃冰箱中備用。以成人每天4 g臨床用藥量、體質(zhì)量60 kg計(jì),用藥劑量為0.07 g/kg;大鼠給藥劑量按成人臨床用量的10倍計(jì)算,即0.7g/kg體質(zhì)量。Trizol,賽默飛世爾公司產(chǎn)品,批號(hào)15596-026;HiScript Reverse Transcriptase(RNaseH)、5×HiScript Buffer、50×ROX Reference Dye2、SYBR Green Master Mix,均為諾唯贊公司產(chǎn)品,批號(hào)為101-01/02、101-01/02、111-02、111-02;ddH2O(DNase/RNase Free),復(fù)能基因公司產(chǎn)品,批號(hào)C1D230A;Ribonuclease Inhibitor,北京全式金公司產(chǎn)品,批號(hào)LOT#J11202;dNTP,天根生化科技公司產(chǎn)品,批號(hào)LOT#P4325;Taq Plus DNA Polymerase和DL2000 DNA Marker,均為天根生化科技公司產(chǎn)品,批號(hào)T105-01、MD114-02;Random Primer(N6),北京艾德萊生物科技公司產(chǎn)品,批號(hào)271830AH;三硝基苯磺酸,西格瑪奧德里奇公司產(chǎn)品,批號(hào)P2297;大鼠IL-6 ELISA試劑盒、大鼠IL-10 ELISA試劑盒,均為武漢基因美生物科技公司產(chǎn)品,批號(hào)13314128222、13814124222。E200型光學(xué)顯微鏡,日本尼康公司產(chǎn)品;QuantStudio6實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀,美國(guó)應(yīng)用生物系統(tǒng)公司產(chǎn)品;Nano-100型微量分光光度計(jì),杭州奧盛儀器有限公司產(chǎn)品;EDC-810型PCR儀,東勝創(chuàng)新生物科技有限公司產(chǎn)品;JY02S型紫外分析儀,北京君意東方電泳設(shè)備有限公司產(chǎn)品;KD-BMII型石蠟切片機(jī),德國(guó)徠卡產(chǎn)品;H1650-W離心機(jī),德國(guó)艾本德公司產(chǎn)品。

    1.3 模型的建立與分組

    隨機(jī)選取15只大鼠作為正常組,不予造模;將剩余45只大鼠采用TNBS灌腸方法制備UC模型[7]。造模后每日觀察記錄大鼠飲食、體質(zhì)量、活動(dòng)量等一般情況,詳細(xì)記錄其大便性狀及肛周污物情況。參照參考文獻(xiàn)[8],擬定UC模型大鼠診斷標(biāo)準(zhǔn):①便溏或伴有膿血;②體質(zhì)量下降,食欲不振;③精神萎靡,毛發(fā)枯萎;④弓背、活動(dòng)減少;⑤腸黏膜組織病理學(xué)檢查見黏膜層及黏膜下層炎癥浸潤(rùn)、潰瘍形成。具備上述條件則表明造模成功。造模期間死亡4只,考慮死因?yàn)樗幬锒拘圆荒褪堋? d后造模結(jié)束,將宏觀癥狀不符合標(biāo)準(zhǔn)的2只排除[9]。在余下39只中隨機(jī)取3只處死,解剖結(jié)腸組織確定造模成功。將剩余的36只大鼠隨機(jī)分為模型組、消潰湯組、美沙拉嗪組3組,每組12只。

    1.4 給藥方法

    造模成功 24 h 后開始給藥。消潰湯組給予消潰湯煎劑18.3 g/kg體質(zhì)量,美沙拉嗪組給予美沙拉嗪混懸液0.7 g/kg體質(zhì)量,模型組及正常組灌胃生理鹽水,灌胃容積均為2 mL,1次/d,持續(xù)14 d。

    1.5 檢測(cè)指標(biāo)

    1.5.1 樣本采集

    末次給藥后24 h,以100 g/L水合氯醛按3 μL/g體質(zhì)量行腹腔注射麻醉,取材。①腹主動(dòng)脈采血5 mL,于肝素抗凝管中靜置5 min,以離心半徑13.5 cm、轉(zhuǎn)速3 000 r/min 離心15 min,取血清置入EP管,凍存-80 ℃冰箱,用于ELISA檢測(cè)IL-10、IL-6。②采血后,取肛門以上2~12 cm腸段,4 ℃生理鹽水清洗,濾紙吸干;剪開腸管,肉眼觀察腸黏膜并記錄結(jié)果。此外,取一塊約1 cm病變結(jié)腸,40 g/L多聚甲醛固定,脫水、透明后石蠟包埋,制成4 μm切片,顯微鏡下觀察組織學(xué)變化。③取1 g新鮮結(jié)腸組織于-80 ℃冰箱中冰凍保存,用于實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)測(cè)定IL-6 mRNA、Janus激酶2(JAK2)mRNA、STAT3 mRNA和缺氧誘導(dǎo)因子-1α(HIF-1α)mRNA相對(duì)表達(dá)量。

    1.5.2 一般情況

    每天灌胃前觀察大鼠的活動(dòng)、飲食飲水、毛發(fā)光澤、精神狀態(tài)。

    1.5.3 疾病活動(dòng)指數(shù)(DAI)評(píng)分

    給藥的第1、14天稱量體質(zhì)量,觀察大便性狀,檢測(cè)潛血情況,進(jìn)行DAI評(píng)分[10]。計(jì)分標(biāo)準(zhǔn):體質(zhì)量無(wú)下降、下降1%~15%、下降>15%各計(jì)0、2、4分;大便正常、半稀便、稀便各計(jì)0、2、4分;大便潛血陰性、潛血陽(yáng)性、肉眼血便各計(jì)0、2、4分。DAI評(píng)分=體質(zhì)量下降評(píng)分+大便性狀評(píng)分+便血評(píng)分

    1.5.4 結(jié)腸黏膜損傷指數(shù)(CMDI)評(píng)分

    取整個(gè)結(jié)腸組織,剪開標(biāo)本、沖洗大便,腸黏膜層向上展開,平鋪在濾紙上,用大頭針兩端固定,浸沒在生理鹽水中,肉眼觀察黏膜損傷程度。按以下標(biāo)準(zhǔn)[11]進(jìn)行評(píng)分。無(wú)損傷,計(jì)0分;局部充血、水腫但未出現(xiàn)潰瘍,計(jì)1分;有潰瘍,但沒有明顯炎癥,計(jì)2分;有潰瘍,僅有一處出現(xiàn)炎癥,計(jì)3分;有多處潰瘍和炎癥,潰瘍大小l cm,計(jì)5分。

    1.5.5 結(jié)腸組織損傷指數(shù)(TDI)評(píng)分

    采用蘇木素-伊紅(HE)染色法觀察大鼠結(jié)腸組織病理變化。取石蠟切片,60 ℃烤片2h,常規(guī)脫蠟、水化,置于蘇木素染液內(nèi),鹽酸乙醇進(jìn)行分化,流水沖洗,采用伊紅染液處理2 min復(fù)染,蒸餾水沖洗充分去除染液,脫水,透明,封片,光學(xué)顯微鏡下觀察并拍照。采用以下標(biāo)準(zhǔn)[12]進(jìn)行相關(guān)評(píng)分:正常黏膜,計(jì)0分;基底隱窩缺損1/3,計(jì)1分;基底隱窩缺損2/3,計(jì)2分;隱窩缺失,僅余表面上皮,伴炎細(xì)胞浸潤(rùn),計(jì)3分;黏膜糜爛、潰瘍伴大量炎細(xì)胞浸潤(rùn),計(jì)4分。

    1.5.6 血清IL-10、IL-6水平

    按照試劑盒說(shuō)明書檢測(cè)。

    1.5.7 結(jié)腸IL-6、JAK2、STAT3、HIF-1α mRNA水平

    采用Trizol法提取RNA,將干燥RNA沉淀溶于20 μL DEPC水中。利用分光光度計(jì)檢驗(yàn)RNA純度及濃度是否合格。將總RNA放于-80 ℃冰箱內(nèi)保存以備用。

    ①反轉(zhuǎn)錄。反應(yīng)體系總體積20 μL:2 μL RNA,1 μL Oligo(dT)Primer,4 μL dNTP,4 μL 5×Hiscript Buffer,1 μL Hiscript Reverse Transcriptase,0.5 μL Ribonuclease Inhibitor,用無(wú)核糖核酸酶的去離子水補(bǔ)足至20 μL。反應(yīng)條件設(shè)置為:25 ℃反應(yīng)5 min,50 ℃反應(yīng)15 min,85 ℃反應(yīng)5 min,4 ℃反應(yīng)10 min。

    定量PCR。反應(yīng)體系總體積20 mL,其中4 μL cDNA(已稀釋3倍),0.4 μL的Forward Primer(10 μmol/L)和0.4 μL Reverse Primer(10 μmol/L),10 μL SYBR Green Master Mix,0.4 μL 50×ROX Reference Dye 2,4.8 μL ddH2O(Rnasefree)。反應(yīng)條件設(shè)置為:50 ℃ 2 min,95 ℃10 min,95 ℃ 30 s,60 ℃ 30 s,40 個(gè)循環(huán)。運(yùn)用2-△△CT法計(jì)算相對(duì)表達(dá)量。引物由北京博邁德生物技術(shù)有限公司合成。引物序列見表1。

    表1 PCR引物序列

    1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

    2 結(jié) 果

    2.1 各組大鼠一般情況對(duì)比

    正常組:從實(shí)驗(yàn)開始到結(jié)束,大鼠體質(zhì)量穩(wěn)步増長(zhǎng),精神狀況良好,毛發(fā)光亮,進(jìn)食水量正常,敏捷活潑,無(wú)便血及黏液,無(wú)腹瀉及黏液膿血便,無(wú)死亡。模型組:造模開始當(dāng)天即出現(xiàn)腹瀉;后逐漸出現(xiàn)黏液膿血便、毛發(fā)欠光澤、活動(dòng)度減少、進(jìn)食量減少、體質(zhì)量下降等表現(xiàn),肛門周圍沾有污物;2周后大鼠大便次數(shù)進(jìn)一步增多,多呈黏液膿血便,大鼠肛周污物呈暗紅色。灌胃期間大鼠無(wú)死亡。消潰湯組、美沙拉嗪組:造模后表現(xiàn)同模型組。灌胃給藥2周后,大便逐漸正常,精神好轉(zhuǎn),活動(dòng)量増多,毛發(fā)逐漸光澤,大便成形、無(wú)黏液膿血、無(wú)惡臭,肛周變清潔,飲水量增加,體質(zhì)量回升。

    2.2 各組大鼠DAI評(píng)分對(duì)比

    給藥第1天,與正常組對(duì)比,模型組、消潰湯組和美沙拉嗪組DAI評(píng)分增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。給藥第14天,與模型組對(duì)比,消潰湯組和美沙拉嗪組的DAI評(píng)分均下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);消潰湯組和美沙拉嗪組之間DAI評(píng)分對(duì)比,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);與正常組對(duì)比,其余3組的DAI評(píng)分仍然偏高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

    表2 各組大鼠DAI評(píng)分對(duì)比 分,

    2.3 各組大鼠結(jié)腸組織病理學(xué)形態(tài)、CMDI評(píng)分 和TDI評(píng)分對(duì)比

    正常組:大鼠結(jié)腸黏膜組織表面光滑完整,未見充血,潰瘍形成;光鏡下腺體分布規(guī)則,可見少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。模型組:大鼠結(jié)腸黏膜表面充血水腫,伴壞死及潰瘍形成,達(dá)結(jié)腸肌層;光鏡下可見大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn),肌層結(jié)構(gòu)紊亂,杯狀細(xì)胞減少,隱窩膿腫形成,黏膜損傷指數(shù)顯著增高。消潰湯組和美沙拉嗪組:結(jié)腸黏膜表面潰瘍基本愈合,伴有散在黏膜糜爛點(diǎn);光鏡下可見中等量炎性細(xì)胞浸潤(rùn),肌層結(jié)構(gòu)較清晰,損傷指數(shù)較模型對(duì)照組均顯著降低。見圖1。

    與正常組對(duì)比,模型組CMDI評(píng)分、TDI評(píng)分均增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與模型組對(duì)比,消潰湯組和美沙拉嗪組的CMDI評(píng)分、TDI評(píng)分均降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。消潰湯組和美沙拉嗪組之間2個(gè)指標(biāo)對(duì)比,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表3。

    表3 各組大鼠CMDI評(píng)分、TDI對(duì)比 分,

    2.4 各組大鼠血清IL-6、IL-10水平對(duì)比

    與正常組對(duì)比,模型組大鼠血清IL-6升高、IL-10降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與模型組對(duì)比,消潰湯組和美沙拉嗪組IL-6降低、IL-10增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。消潰湯組和美沙拉嗪組之間2個(gè)指標(biāo)對(duì)比,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表4。

    表4 各組大鼠血清IL-6、IL-10水平對(duì)比

    2.5 各組大鼠結(jié)腸組織IL-6、JAK2、STAT3、HIF-1α mRNA水平對(duì)比

    與正常組對(duì)比,模型組、美沙拉嗪組和消潰湯組大鼠結(jié)腸組織中IL-6、JAK2、STAT3、HIF-1α mRNA均升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與模型組對(duì)比,消潰湯組和美沙拉嗪組大鼠結(jié)腸組織中的IL-6、JAK2、STAT3、HIF-1α mRNA均降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。消潰湯組和美沙拉嗪組之間各指標(biāo)對(duì)比,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表5。

    表5 各組大鼠結(jié)腸組織IL-6 mRNA、JAK2 mRNA、STAT3 mRNA、HIF-1α mRNA水平對(duì)比

    3 討 論

    近年來(lái)UC發(fā)病率逐年增高,隨著病程的延長(zhǎng)結(jié)腸癌變的風(fēng)險(xiǎn)明顯增加[13]。UC是由多種因素引起的,包括遺傳易感性、環(huán)境因素、吸煙、飲食因素、腸道微生物群和免疫系統(tǒng)功能的變化[14]。UC屬中醫(yī)學(xué)“腸澼”“痢疾”“腸風(fēng)”等范疇。濁毒是該病發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵,是UC的病程進(jìn)展中病因和病理的統(tǒng)一。UC病因初為濕盛,濕盛化濁,濁久為痰,濕、濁、痰三者郁久化熱,熱之極為毒,終而形成濁毒[15]。其壅滯臟腑阻礙傳化糟粕的功能,壅滯經(jīng)絡(luò)損傷大腸脂膜血絡(luò),導(dǎo)致局部氣血郁結(jié),日久化熱,瘀血化為膿血。消潰湯由白頭翁、白及、石榴皮、五倍子、白蒺藜、黃連、苦參組成,具有清熱解毒、化濁收斂的功效?,F(xiàn)代藥理學(xué)研究證明,其組方中各單味藥材具有抗炎、抗腫瘤作用[16-20]。本研究證實(shí)了消潰湯治療UC的有效性。結(jié)果表明,消潰湯具有抑制炎癥反應(yīng)、改善腸道功能及恢復(fù)腸道生理結(jié)構(gòu)的作用。

    以往研究[21-22]發(fā)現(xiàn):炎癥或感染部位是結(jié)腸癌等腫瘤的高發(fā)部位,細(xì)胞突變概率的增加與炎癥環(huán)境相關(guān);炎癥可通過(guò)破壞機(jī)體免疫,進(jìn)而減弱相關(guān)療法對(duì)癌癥的治療作用。研究[23-24]表明:促炎癥細(xì)胞因子IL-6能通過(guò)STAT3信號(hào)通路誘導(dǎo)相關(guān)基因的表達(dá),進(jìn)而調(diào)控細(xì)胞增殖和凋亡,參與機(jī)體炎癥反應(yīng);同時(shí),一定程度阻斷該通路能夠?qū)Π┘?xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移發(fā)揮抑制作用,此種效應(yīng)可能通過(guò)阻斷通路傳導(dǎo)進(jìn)而調(diào)控下游相關(guān)基因表達(dá)實(shí)現(xiàn)。實(shí)驗(yàn)[25]證明,抗炎藥物能降低各種癌癥的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn),長(zhǎng)期使用可有效降低結(jié)腸癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)、死亡風(fēng)險(xiǎn),減小腫瘤體積。由此可推斷,炎癥反應(yīng)對(duì)腫瘤的發(fā)展有一定的促進(jìn)作用。

    生理狀態(tài)下,結(jié)腸黏膜的損傷與修復(fù)處于動(dòng)態(tài)平衡之中。當(dāng)黏膜的防御和修復(fù)能力低于損傷因素或炎癥攻擊時(shí),機(jī)體動(dòng)態(tài)平衡被打破,病理狀態(tài)發(fā)生。IL-6是多效性細(xì)胞因子,在所有炎癥性疾病及癌癥的病理過(guò)程中發(fā)揮著重要作用[26]。研究表明,其可激活細(xì)胞內(nèi)JAK2/STAT3信號(hào)傳導(dǎo)產(chǎn)生聯(lián)級(jí)反應(yīng),使炎癥呈瀑布樣爆發(fā)。IL-6與靶細(xì)胞表面的同源受體IL-6R識(shí)別并結(jié)合,進(jìn)一步活化細(xì)胞膜表面糖蛋白130,進(jìn)而激活JAK2,使受體酪氨酸激酶活化,并與STAT3蛋白結(jié)合,STAT3磷酸化形成二聚體,以此種形式轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)入細(xì)胞核中以誘導(dǎo)受STAT3調(diào)控的基因表達(dá),進(jìn)一步產(chǎn)生IL-6因子,以及調(diào)控下游蛋白而加重炎癥反應(yīng)[27-29]。HIF-1α是轉(zhuǎn)錄激活因子,對(duì)于腸道黏膜細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)吸收、腸道屏障功能、先天性和適應(yīng)性免疫反應(yīng)至關(guān)重要[30]。于傳宗等[31]發(fā)現(xiàn),野生蒙古口蘑多糖通過(guò)抑制JAK-STAT3和HIF-1α信號(hào)通路發(fā)揮抗炎作用,此進(jìn)一步明確了HIF-1α參與了潰瘍性結(jié)腸炎的發(fā)生機(jī)制。

    本研究結(jié)果顯示,消潰湯組的血清IL-6水平較模型組降低,IL-10水平升高,表明消潰湯能抑制IL-6分泌并促進(jìn)IL-10的分泌,間接證明消潰湯能提高大鼠機(jī)體內(nèi)單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的功能,減少致炎因子的釋放。炎癥介質(zhì)可分為促炎介質(zhì)和抑炎介質(zhì)兩類,兩者的平衡關(guān)系被打破就會(huì)導(dǎo)致嚴(yán)重的炎癥反應(yīng)[32]。本研究證明消潰湯對(duì)促炎介質(zhì)有抑制作用,對(duì)抑炎介質(zhì)有一定的促進(jìn)作用,調(diào)控相關(guān)因子可能是消潰湯發(fā)揮其治療作用的機(jī)制之一,但消潰湯是由多種藥物配伍而成,其作用機(jī)制有待進(jìn)一步深入研究。

    實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,IL-6、JAK2、STAT3、HIF-1α與潰瘍性結(jié)腸炎具有相關(guān)性;消潰湯通過(guò)抑制IL-6、JAK2、STAT3基因的表達(dá),從而減輕腸道炎癥反應(yīng),在治療UC中其機(jī)理可能通過(guò)抑制IL-6/JAK2/STAT3信號(hào)通路來(lái)完成。消潰湯能有效抑制致炎因子IL-6的釋放,降低JAK2/STAT3通路的過(guò)度磷酸化,引起下游基因HIF-1α轉(zhuǎn)錄翻譯水平的降低,削弱炎癥聯(lián)級(jí)反應(yīng)。相關(guān)研究證實(shí)多種腫瘤的發(fā)生、進(jìn)展、侵襲和轉(zhuǎn)移與JAK/STAT信號(hào)通路過(guò)度激活密切相關(guān),病理狀態(tài)下HIF-1α過(guò)度激活會(huì)加劇腸道組織學(xué)和超微結(jié)構(gòu)的改變,導(dǎo)致腸道損傷、炎癥和結(jié)腸直腸癌的發(fā)生[33-34]。本研究表明,消潰湯是通過(guò)一系列聯(lián)級(jí)反應(yīng)對(duì)潰瘍創(chuàng)面進(jìn)行治療使之恢復(fù),并且對(duì)炎癥性腸病的癌變起到抑制作用。

    綜上所述,消潰湯治療UC大鼠作用機(jī)制通過(guò)調(diào)節(jié)IL-6/JAK2/STAT3/HIF-1α軸,降低血清IL-6水平和抑制病變組織IL-6 mRNA表達(dá),從而降低JAK2 mRNA表達(dá),減少STAT3磷酸化,引起STAT3 mRNA表達(dá)量降低,并通過(guò)HIF-1α靶點(diǎn)抑制其基因表達(dá),最終起到抗?jié)冃越Y(jié)腸炎作用,且能抑制其癌變。通過(guò)提取中藥有效成分針對(duì)IL-6/JAK2/STAT3/HIF-1α軸中相關(guān)蛋白和酶為靶點(diǎn)用于治療UC可能會(huì)成為未來(lái)研究的方向。然而JAK/STAT信號(hào)通路和其他信號(hào)通路之間的協(xié)同作用還沒有很好的解釋,尚需要進(jìn)一步研究。

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