經(jīng)典名方厚樸麻黃湯物質(zhì)基準(zhǔn)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及制劑提取工藝研究△

張昊，董慧玲，王楠，徐冰，雷海民*

1.北京中醫(yī)藥大學(xué) 中藥學(xué)院，北京 102488；

2.愛(ài)民藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司，河南 駐馬店 463500

厚樸麻黃湯出自張仲景所著《金匱要略》：“厚樸五兩，麻黃四兩，石膏如雞子大，杏仁半升，半夏半升，干姜二兩，細(xì)辛二兩，小麥一升，五味子半升。上九味，以水一斗二升，先煮小麥?zhǔn)?，去滓，?nèi)諸藥，煮取三升”[1-2]。作為《古代經(jīng)典名方目錄（第一批）》的收載方劑[3]，厚樸麻黃湯療效確切，多項(xiàng)臨床研究證實(shí)該方可有效緩解慢性支氣管炎、慢性阻塞性肺疾病及肺氣腫患者的臨床癥狀，降低血清炎性因子水平[4-6]?，F(xiàn)階段尚無(wú)厚樸麻黃湯物質(zhì)基準(zhǔn)的相關(guān)研究報(bào)道，質(zhì)量屬性不明確，限制了其進(jìn)一步的制劑開(kāi)發(fā)。本研究在遵古的基礎(chǔ)上參照《古代經(jīng)典名方中藥復(fù)方制劑物質(zhì)基準(zhǔn)的申報(bào)資料要求（征求意見(jiàn)稿）》[7]，以來(lái)自3個(gè)產(chǎn)地的15批飲片為原料制備厚樸麻黃湯的物質(zhì)基準(zhǔn)對(duì)應(yīng)實(shí)物，對(duì)出膏率、指標(biāo)性成分（厚樸酚、和厚樸酚、鹽酸麻黃堿及鹽酸偽麻黃堿）含量及特征圖譜質(zhì)量屬性進(jìn)行研究。此外，采用L9（34）正交試驗(yàn)優(yōu)化厚樸麻黃湯的提取工藝，為經(jīng)典名方新藥研發(fā)提供參考。

1 材料

1.1 儀器

Ultimate 3000 型高效液相色譜儀（美國(guó)Thermo Fisher Scientific 公司）；FA1104N 型電子分析天平（上海民橋精密科學(xué)儀器有限公司）；BT 25S 型電子分析天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）；JMB10002 型電子天平（余姚市紀(jì)銘稱(chēng)重校驗(yàn)設(shè)備有限公司）；4.0 L 煎藥鍋（景德鎮(zhèn)橙葉陶瓷有限公司）；H22-X3型九陽(yáng)電陶爐（杭州九陽(yáng)生活電器有限公司）；KQ2200DE型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；HH-6型電熱恒溫水浴鍋（北京科偉永興儀器有限公司）；NB-DZF-6051型真空干燥箱（河南南北儀器有限公司）；LC-10N-50A型臺(tái)式真空冷凍干燥機(jī)、DZTW 型電熱套（上海力辰儀器科技有限公司）；0.22 μm 有機(jī)相針式微孔濾膜（天津津騰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）。

1.2 試藥

對(duì)照品厚樸酚（批號(hào)：110729-202015，純度：99%）、和厚樸酚（批號(hào)：110730-201915，純度：99.8%）、鹽酸麻黃堿（批號(hào)：171241-201809，純度：100%）、鹽酸偽麻黃堿（批號(hào)：171237-201510，純度：99.8%）、苦杏仁苷（批號(hào)：110820-201808，純度：88.2%）、五味子醇甲（批號(hào)：110857-201815，純度：99.7%）、6-姜辣素（批號(hào)：111833-202007，純度：99.3%）、細(xì)辛脂素（批號(hào)：111899-201705，純度：100%）均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；色譜純乙腈、甲醇（美國(guó)Fisher 公司）；色譜純磷酸（天津市大茂化學(xué)試劑廠）；純凈水（杭州娃哈哈集團(tuán)股份有限公司）；去離子水（北京中醫(yī)藥大學(xué)）。

相關(guān)飲片均由愛(ài)民藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司提供，并經(jīng)北京中醫(yī)藥大學(xué)劉春生教授鑒定。經(jīng)檢測(cè)，飲片質(zhì)量均符合《中華人民共和國(guó)藥典》（以下簡(jiǎn)稱(chēng)《中國(guó)藥典》）2020年版規(guī)定。飲片信息見(jiàn)表1。

表1 厚樸麻黃湯飲片信息

2 方法與結(jié)果

2.1 15 批厚樸麻黃湯物質(zhì)基準(zhǔn)對(duì)應(yīng)實(shí)物及單味飲片陰性樣品制備

通過(guò)隨機(jī)數(shù)表獲得15批飲片組合（表2）。制法：稱(chēng)取小麥30 g 置鍋中，加去離子水2.4 L，武火（1600 W）煮沸后文火（600 W）煎煮30 min。撈出小麥，煎液浸泡剩余飲片（厚樸15 g、麻黃12 g、苦杏仁12 g、清半夏12 g、干姜6 g、細(xì)辛6 g、五味子8 g、石膏18 g）30 min，武火（1600 W）煮沸后文火（600 W）煎煮120 min，將煎液控制在600 mL 左右，趁熱以雙層200目紗布濾過(guò)，調(diào)整體積至600 mL。分取煎液100 mL 置燒杯中，-80 ℃預(yù)冷12 h后冷凍干燥（-50 ℃，0～5 Pa），研磨、混勻即得物質(zhì)基準(zhǔn)對(duì)應(yīng)實(shí)物。

表2 15批厚樸麻黃湯物質(zhì)基準(zhǔn)飲片組合

按照上述步驟，分別制備各味飲片的陰性樣品。

2.2 出膏率測(cè)定

移取2.1 項(xiàng)下煎液100 mL 至預(yù)先稱(chēng)質(zhì)量的干燥蒸發(fā)皿中，水浴加熱濃縮至濃稠狀態(tài)，移至真空干燥箱，50 ℃真空干燥至質(zhì)量恒定，測(cè)定質(zhì)量。平行重復(fù)3 次取平均值，經(jīng)體積比例換算得各批對(duì)應(yīng)實(shí)物的出膏率。1～15 批對(duì)應(yīng)實(shí)物的出膏率依次為13.04%、12.56%、11.51%、11.81%、12.66%、11.74%、12.04%、13.13%、11.68%、12.03%、11.75%、11.92%、12.13%、12.71%、11.10%，均為平均值的90%～110%。

2.3 指標(biāo)性成分含量檢測(cè)方法

2.3.1色譜條件 厚樸酚、和厚樸酚含量檢測(cè)：AkzoNobel Kromasil 100-5-C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈（A）-0.1%磷酸水溶液（B），等度洗脫（0～50 min，49%A）；流速：1.0 mL·min-1；柱溫：25 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：294 nm；進(jìn)樣量：10 μL。

鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿含量檢測(cè)：TechWay JADE-PAK Phenyl-Polar 色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈（A）-0.1%磷酸水溶液（B），等度洗脫（0～20 min，2%A）；流速：0.8 mL·min-1；柱溫：25 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：210 nm；進(jìn)樣量：10 μL。

2.3.2對(duì)照品溶液、供試品溶液、飲片陰性樣品溶液制備 精密稱(chēng)取厚樸酚14.74 mg、和厚樸酚14.00 mg 置10 mL 量瓶，加75%甲醇至刻度。精密吸取該對(duì)照品溶液2 mL 置50 mL 量瓶，加75%甲醇至刻度，得對(duì)照品儲(chǔ)備溶液Ⅰ。用75%甲醇將其稀釋為原質(zhì)量濃度的1/16，0.22 μm微孔濾膜濾過(guò)即得對(duì)照品溶液Ⅰ。精密稱(chēng)取鹽酸麻黃堿10.63 mg、鹽酸偽麻黃堿7.90 mg 置10 mL 量瓶，加75%甲醇至刻度。精密吸取該對(duì)照品溶液1 mL 置10 mL 量瓶，加75%甲醇至刻度，得對(duì)照品儲(chǔ)備溶液Ⅱ。用75%甲醇將其稀釋為原質(zhì)量濃度的1/4，0.22 μm 微孔濾膜濾過(guò)即得對(duì)照品溶液Ⅱ。

精密稱(chēng)取對(duì)應(yīng)實(shí)物0.2 g置具塞錐形瓶，精密加入75%甲醇25 mL，密塞超聲（250 W，40 kHz）20 min，加甲醇補(bǔ)足減失質(zhì)量，0.22 μm 微孔濾膜濾過(guò)即得供試品溶液。按此步驟分別制備厚樸、麻黃的陰性樣品溶液。

2.3.3專(zhuān)屬性考察 分別取2.3.2 項(xiàng)下供試品溶液、對(duì)照品溶液（Ⅰ、Ⅱ）及陰性樣品（厚樸、麻黃）溶液，按2.3.1 項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，見(jiàn)圖1～2。相應(yīng)條件下，對(duì)照品出峰處均無(wú)陰性干擾，專(zhuān)屬性良好。

圖1 厚樸酚、和厚樸酚專(zhuān)屬性考察

圖2 鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿專(zhuān)屬性考察

2.3.4線性關(guān)系考察 用75%甲醇將2.3.2項(xiàng)下對(duì)照品溶液分別稀釋為原質(zhì)量濃度的1/2、1/4、1/8、1/16、1/32、1/64，連對(duì)照品溶液一并按2.3.1 項(xiàng)下色譜條件測(cè)定。以峰面積為縱坐標(biāo)（Y），質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（X）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程（表3）。各成分在相應(yīng)質(zhì)量濃度范圍內(nèi)的線性關(guān)系良好。

表3 厚樸麻黃湯4個(gè)指標(biāo)性成分線性關(guān)系考察

2.3.5精密度試驗(yàn) 取同一份對(duì)照品溶液，按2.3.1項(xiàng)下色譜條件連續(xù)測(cè)定6 次。計(jì)算厚樸酚、和厚樸酚、鹽酸麻黃堿及鹽酸偽麻黃堿峰面積RSD 分別為0.66%、0.75%、0.29%、0.45%，表明儀器精密度良好。

2.3.6穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一份供試品溶液，按2.3.1 項(xiàng)下色譜條件，于制樣后0、2、4、6、8、10、12、24 h 測(cè)定。計(jì)算厚樸酚、和厚樸酚、鹽酸麻黃堿及鹽酸偽麻黃堿峰面積RSD 分別為1.48%、0.73%、1.09%、1.16%，表明供試品溶液24 h穩(wěn)定性良好。

2.3.7重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批對(duì)應(yīng)實(shí)物，按2.3.2項(xiàng)下方法平行制備6份供試品溶液，按2.3.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定。計(jì)算厚樸酚、和厚樸酚、鹽酸麻黃堿及鹽酸偽麻黃堿含量RSD 分別為0.88%、0.64%、1.22%、0.51%，平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為0.050%、0.048%、0.330%、0.210%，檢測(cè)方法重復(fù)性符合要求。

2.3.8加樣回收率試驗(yàn) 精密稱(chēng)取厚樸酚10.31 mg、和厚樸酚10.13 mg 置50 mL 量瓶，加75%甲醇至刻度。精密吸取該對(duì)照品溶液5 mL 置250 mL 量瓶，加75%甲醇至刻度得對(duì)照品儲(chǔ)備溶液Ⅰ。精密稱(chēng)取鹽酸麻黃堿12.79 mg、鹽酸偽麻黃堿8.35 mg置50 mL量瓶，加75%甲醇至刻度。精密吸取該對(duì)照品溶液25 mL 置250 mL 量瓶，加75%甲醇至刻度得對(duì)照品儲(chǔ)備溶液Ⅱ。取12 份與2.3.7 項(xiàng)下相同批次的對(duì)應(yīng)實(shí)物，每份0.2 g，精密稱(chēng)質(zhì)量，等分為厚樸酚、和厚樸酚組與鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿組。每份對(duì)應(yīng)實(shí)物按組別精密加入對(duì)照品儲(chǔ)備溶液Ⅰ或?qū)φ掌穬?chǔ)備溶液Ⅱ25 mL，按2.3.2 項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按2.3.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 厚樸麻黃湯4個(gè)指標(biāo)性成分加樣回收率試驗(yàn)

2.4 15 批對(duì)應(yīng)實(shí)物指標(biāo)性成分含量檢測(cè)及飲片-對(duì)應(yīng)實(shí)物轉(zhuǎn)移率

按2.3.2 項(xiàng)下方法制備15 批對(duì)應(yīng)實(shí)物供試品溶液，按2.3.1 項(xiàng)下色譜條件測(cè)定并計(jì)算各指標(biāo)性成分含量。參考《中國(guó)藥典》2020 年版規(guī)定檢測(cè)厚樸、麻黃飲片中指標(biāo)性成分含量，按公式（1）計(jì)算轉(zhuǎn)移率（表5）。

表5 15批飲片、對(duì)應(yīng)實(shí)物中4個(gè)指標(biāo)性成分質(zhì)量分?jǐn)?shù)及轉(zhuǎn)移率

以含量、轉(zhuǎn)移率平均值的70%～130%為標(biāo)準(zhǔn)范圍進(jìn)行分析。厚樸酚的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.034%～0.051%，15批均在標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi)；轉(zhuǎn)移率為1.474%～2.801%，除第14、15批外，其余批次均在標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi)。和厚樸酚的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.030%～0.059%，除第14 批外，其余批次均在標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi)；轉(zhuǎn)移率為2.154%～4.241%，除第5 批外，其余批次均在標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi)。鹽酸麻黃堿的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.309%～0.377%，轉(zhuǎn)移率為23.278%～37.774%，15 批均在標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi)。鹽酸偽麻黃堿的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.138%～0.233%，轉(zhuǎn)移率為27.417%～47.658%，15 批均在標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi)。

2.5 特征圖譜檢測(cè)方法

2.5.1色譜條件 AkzoNobel Kromasil 100-5-C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈（A）-0.15%磷酸水溶液（B），梯度洗脫（0～5 min，5%～7%A；5～15 min，7%～8%A；15～18 min，8%～13%A；18～29 min，13%～20%A；29～38 min，20%～32%A；38～46 min，32%～60%A；46～55 min，60%～72%A；55～61 min，72%～95%A；61～71 min，95%A；71.0～71.1 min，95%～5%A；71.1～86.0 min，5%A）；流速：1.0 mL·min-1；柱溫：25 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：210 nm；進(jìn)樣量：10 μL。

2.5.2混合對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性樣品溶液制備 精密稱(chēng)取鹽酸麻黃堿6.63 mg、鹽酸偽麻黃堿6.39 mg、苦杏仁苷6.81 mg、6-姜辣素2.30 mg 置10 mL 量瓶，加75%甲醇至刻度得對(duì)照品儲(chǔ)備溶液Ⅰ。精密稱(chēng)取五味子醇甲10.16 mg、厚樸酚7.12 mg、和厚樸酚7.58 mg、細(xì)辛脂素7.62 mg 置10 mL 量瓶，加75%甲醇至刻度。精密吸取該對(duì)照品溶液1 mL 置10 mL 量瓶，加75%甲醇至刻度得對(duì)照品儲(chǔ)備溶液Ⅱ。精密吸取對(duì)照品儲(chǔ)備溶液Ⅰ2 mL、對(duì)照品儲(chǔ)備溶液Ⅱ5 mL 置50 mL 量瓶，加75%甲醇至刻度，0.22 μm 微孔濾膜濾過(guò)即得混合對(duì)照品溶液。

按照2.3.2 項(xiàng)下方法分別制備供試品溶液及陰性樣品溶液。

2.5.3精密度試驗(yàn) 取同一份供試品溶液，按2.5.1項(xiàng)下色譜條件連續(xù)測(cè)定6 次。以13 號(hào)峰為參照，各特征峰相對(duì)保留時(shí)間RSD 均小于1%，相對(duì)峰面積RSD 均小于5%，表明儀器精密度良好。

2.5.4穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一份供試品溶液，按2.5.1 項(xiàng)下色譜條件分別于制樣后0、2、4、6、8、10、12、24 h 測(cè)定。以13 號(hào)峰為參照，各特征峰相對(duì)保留時(shí)間RSD 均小于1%，相對(duì)峰面積RSD 均小于5%，表明供試品溶液24 h穩(wěn)定性良好。

2.5.5重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批對(duì)應(yīng)實(shí)物，按2.5.2項(xiàng)下方法平行制備6份供試品溶液，按2.5.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定。以13 號(hào)峰為參照，各特征峰相對(duì)保留時(shí)間RSD 均小于1%，相對(duì)峰面積RSD 均小于5%，表明檢測(cè)方法重復(fù)性良好。

2.6 15批對(duì)應(yīng)實(shí)物特征圖譜檢測(cè)及相似度評(píng)價(jià)

按2.5.2 項(xiàng)下方法制備15 批對(duì)應(yīng)實(shí)物供試品溶液，按2.5.1 項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，見(jiàn)圖3。通過(guò)“中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)”（2012 版）評(píng)價(jià)0～60 min 圖譜的相似度，以第1 批為參照，時(shí)間窗參數(shù)為0.1 min，中位數(shù)法擬合對(duì)照?qǐng)D譜，發(fā)現(xiàn)17 個(gè)特征峰，見(jiàn)圖4。15 批對(duì)應(yīng)實(shí)物特征圖譜與對(duì)照?qǐng)D譜相似度分別為0.996、0.988、0.990、0.988、0.997、0.998、0.995、0.996、0.997、0.997、0.998、0.998、0.991、0.996、0.998。對(duì)17 個(gè)特征峰進(jìn)行飲片歸屬，見(jiàn)圖5。3、5、7、8、10、11、15（和厚樸酚）、17（厚樸酚）號(hào)峰來(lái)自厚樸；1（鹽酸麻黃堿）、2（鹽酸偽麻黃堿）、9 號(hào)峰來(lái)自麻黃；4（苦杏仁苷）號(hào)峰來(lái)自苦杏仁；12（6-姜辣素）號(hào)峰來(lái)自干姜；16（細(xì)辛脂素）號(hào)峰來(lái)自細(xì)辛；13（五味子醇甲）、14 號(hào)峰來(lái)自五味子。6 號(hào)峰的飲片歸屬不明確，應(yīng)該為多個(gè)飲片的共有成分。

圖3 15批厚樸麻黃湯物質(zhì)基準(zhǔn)特征圖譜疊加圖

圖4 厚樸麻黃湯物質(zhì)基準(zhǔn)對(duì)照?qǐng)D譜及17個(gè)特征峰

圖5 厚樸麻黃湯物質(zhì)基準(zhǔn)特征峰歸屬

2.7 制劑提取工藝

2.7.1正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果 設(shè)計(jì)L9（34）正交試驗(yàn)優(yōu)化厚樸麻黃湯的提取工藝，考察液料比（A）、提取時(shí)間（B）、提取次數(shù)（C）對(duì)于提取效果的影響，各因素水平設(shè)計(jì)見(jiàn)表6[8]。按2.1 項(xiàng)下處方，以第1 批對(duì)應(yīng)實(shí)物所用飲片為原料，按正交試驗(yàn)表回流提取，合并相應(yīng)工藝提取液。按2.1 項(xiàng)下方法制備提取液凍干粉，按2.2、2.3 項(xiàng)下方法檢測(cè)出膏率、指標(biāo)性成分含量，按公式（2）計(jì)算轉(zhuǎn)移率。

表6 厚樸麻黃湯制劑提取工藝L9（34）正交試驗(yàn)考察因素及水平設(shè)計(jì)

按公式（3）計(jì)算各工藝的綜合加權(quán)評(píng)分（Y）。

其中，Ya、Yb、Yc、Yd、Ye為分別各工藝的出膏率、厚樸酚轉(zhuǎn)移率、和厚樸酚轉(zhuǎn)移率、鹽酸麻黃堿轉(zhuǎn)移率、鹽酸偽麻黃堿轉(zhuǎn)移率，Yamax、Ybmax、Ycmax、Ydmax、Yemax為各指標(biāo)的最大值。對(duì)Y進(jìn)行直觀分析、方差分析（表7～8）。

表7 厚樸麻黃湯制劑提取工藝L9（34）正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)、結(jié)果及直觀分析

表8 厚樸麻黃湯制劑提取工藝L9（34）正交試驗(yàn)方差分析

方差分析顯示，C對(duì)Y的影響差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），結(jié)合直觀分析選擇C3。A、B對(duì)Y的影響差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且2 個(gè)因素第2、第3 水平提取效果接近，結(jié)合工業(yè)生產(chǎn)實(shí)際及后續(xù)制劑加工，選擇A2、B2。確定最優(yōu)工藝為提取3 次，分別加8、6、6倍水，分別提取1.0、1.0、0.5 h。

2.7.2工藝驗(yàn)證 按2.1 項(xiàng)下處方，以第1 批對(duì)應(yīng)實(shí)物所用飲片為原料，按2.7.1 項(xiàng)下最優(yōu)工藝進(jìn)行3次驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)出膏率、指標(biāo)性成分轉(zhuǎn)移率并計(jì)算RSD，見(jiàn)表9。

表9 厚樸麻黃湯制劑提取工藝驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)

2.7.3制劑特征圖譜檢測(cè)及相似度評(píng)價(jià) 按2.5 項(xiàng)下方法檢測(cè)2.7.2 項(xiàng)下提取物特征圖譜，見(jiàn)圖6。按2.6項(xiàng)下方法，以第1批為參照，擬合制劑對(duì)照?qǐng)D譜（圖7）并計(jì)算其與3批提取物的相似度分別為0.991、0.989、0.999。以2.6 項(xiàng)下物質(zhì)基準(zhǔn)對(duì)照?qǐng)D譜為參照，計(jì)算其與制劑對(duì)照?qǐng)D譜的相似度為0.924。

圖6 3批厚樸麻黃湯制劑提取工藝驗(yàn)證特征圖譜

圖7 厚樸麻黃湯制劑提取工藝對(duì)照?qǐng)D譜

3 討論

3.1 指標(biāo)性成分的選擇及量值傳遞

厚樸麻黃湯中厚樸味辛、苦，性溫，可祛濕化痰、下氣平喘，為君藥。麻黃味辛、微苦，性溫，主祛風(fēng)散寒、宣肺平喘，為臣藥。參考《中國(guó)藥典》2020 年版中厚樸、麻黃的質(zhì)量檢測(cè)項(xiàng)目，選擇厚樸酚、和厚樸酚、鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿作為厚樸麻黃湯的指標(biāo)性成分。研究表明，厚樸酚對(duì)病毒、膿毒癥導(dǎo)致的動(dòng)物肺部炎性損傷具有保護(hù)作用[9-10]，和厚樸酚可通過(guò)Toll 樣受體2（TLR2）、TLR4 抑制磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）信號(hào)通路，改善哮喘小鼠肺組織炎性病變[11]。鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿是麻黃平喘的物質(zhì)基礎(chǔ)，可松弛支氣管平滑肌、降低血管通透性，兩者也常被選作含麻黃制劑的質(zhì)量控制成分[12-13]。

含量檢測(cè)結(jié)果中，第14 批和厚樸酚含量與標(biāo)準(zhǔn)范圍下限相比降低10%左右，屬于明顯離散數(shù)據(jù)。溯源發(fā)現(xiàn)，第14 批所用飲片和厚樸酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)（0.908%）較低，提示在物質(zhì)基準(zhǔn)研究中應(yīng)重視飲片指標(biāo)性成分含量，尤其是下限的設(shè)置。第14、15 批厚樸酚與第5批和厚樸酚轉(zhuǎn)移率均出現(xiàn)偏高離散，溯源發(fā)現(xiàn)，上述批次所用飲片相關(guān)成分含量均較低，但相應(yīng)批次的對(duì)應(yīng)實(shí)物成分含量均在標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi)，造成轉(zhuǎn)移率相對(duì)偏高。15 批對(duì)應(yīng)實(shí)物鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿的含量、轉(zhuǎn)移率均在標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi)，傳遞過(guò)程較為穩(wěn)定。

《中國(guó)藥典》2020 年版中厚樸、麻黃的含量檢測(cè)均將相應(yīng)成分總含量（厚樸為厚樸酚加和厚樸酚，麻黃為鹽酸麻黃堿加鹽酸偽麻黃堿）作為指標(biāo)。參照此規(guī)定，15 批對(duì)應(yīng)實(shí)物相應(yīng)成分總含量均在平均值的70%～130%。據(jù)此，建立厚樸麻黃湯物質(zhì)基準(zhǔn)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)：本品為棕黃色粉末，出膏率為11.10%～13.13%，厚樸酚、和厚樸酚總質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.065%～0.105%，鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿總質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.479%～0.579%，特征圖譜與對(duì)照?qǐng)D譜相似度在0.9以上。

3.2 特征圖譜

本研究前期對(duì)特征圖譜檢測(cè)波長(zhǎng)進(jìn)行考察，在220 nm 以上時(shí)，鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿無(wú)色譜峰信息，苦杏仁苷色譜峰信息不明顯。250 nm 以上時(shí)，色譜峰峰高較低，峰數(shù)量明顯減少。210 nm 處色譜峰信息較為豐富，因此將210 nm 作為檢測(cè)波長(zhǎng)。在流動(dòng)相考察中，以純水為水相時(shí)，鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿無(wú)色譜峰信息，在添加磷酸后出峰。磷酸體積分?jǐn)?shù)為0.15%、0.20%時(shí)各色譜峰分離效果相近，考慮到色譜柱使用壽命，選擇0.15%磷酸水溶液為水相。在相同洗脫梯度下，與乙腈相比，以甲醇為有機(jī)相時(shí)柱壓明顯升高，色譜峰分離效果較差，基線發(fā)生明顯漂移，因此選擇乙腈為有機(jī)相。在建立的檢測(cè)方法下，各飲片在《中國(guó)藥典》2020 年版中含量檢測(cè)項(xiàng)下的指標(biāo)性成分在特征圖譜中均有所體現(xiàn)，并經(jīng)過(guò)對(duì)照品指認(rèn)，所建立的特征圖譜可較為全面地反映厚樸麻黃湯的質(zhì)量信息。

3.3 制劑提取工藝

本研究依據(jù)傳統(tǒng)工藝制備厚樸麻黃湯物質(zhì)基準(zhǔn)，與現(xiàn)代制劑提取工藝有較大區(qū)別。為推動(dòng)方劑的后續(xù)開(kāi)發(fā)，通過(guò)正交試驗(yàn)優(yōu)化其制劑提取工藝為提取3 次，分別加8、6、6 倍水，分別提取1.0、1.0、0.5 h。3 批驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)的出膏率、成分轉(zhuǎn)移率RSD 均小于5%，且特征圖譜相似度在0.9 以上，證明工藝穩(wěn)定可靠。與傳統(tǒng)工藝相比，制劑工藝的出膏率及厚樸酚、和厚樸酚轉(zhuǎn)移率有所提高，但兩者對(duì)照?qǐng)D譜相似度仍在0.9 以上，保證了兩個(gè)工藝間的一致性。

4 結(jié)論

本研究結(jié)合出膏率、指標(biāo)性成分含量及特征圖譜對(duì)厚樸麻黃湯物質(zhì)基準(zhǔn)的質(zhì)量屬性進(jìn)行全面分析，所建立的檢測(cè)方法準(zhǔn)確、穩(wěn)定，可初步建立其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。同時(shí)，通過(guò)正交試驗(yàn)優(yōu)化其制劑提取工藝，在保證質(zhì)量屬性與傳統(tǒng)工藝相一致的前提下，制劑工藝的提取效果有所提升，可為后續(xù)開(kāi)發(fā)提供參考。