MiRNA-208水平與老年慢性心力衰竭病人心功能及臨床預(yù)后的關(guān)系

何香 張郁青

CHF是心室收縮和(或)舒張功能障礙的一種綜合征。據(jù)統(tǒng)計(jì)，老年人群的CHF發(fā)病率為10%～20%[1-2]。然而目前CHF發(fā)生和發(fā)展機(jī)制仍有待深入研究[3]。微小RNA(MiRNA)因可調(diào)節(jié)多種疾病發(fā)生過程中相關(guān)基因的表達(dá)，逐漸成為現(xiàn)代心臟病學(xué)研究中的熱點(diǎn)。MiRNA-208可通過引起心肌重構(gòu)、心律失常以及心肌肥大等影響心臟功能，有可能成為心肌損傷的潛在標(biāo)記物[4]。多個(gè)動(dòng)物模型研究證實(shí)，MiRNA-208對心力衰竭(心衰)的轉(zhuǎn)歸有重要影響。本研究檢測老年CHF病人血清中MiRNA-208的水平，探討其與病人心功能及其臨床預(yù)后的關(guān)系。

1 對象和方法

1.1 研究對象 選擇2017～2018年期間到我院就診的107例老年CHF病人(CHF組)，心功能NYHA分級：Ⅱ級33例，Ⅲ級51例，Ⅳ級23例。另選取同期健康體檢人群45例為對照組，對照組在性別、年齡、BMI等一般情況上與CHF組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。本試驗(yàn)獲得醫(yī)院倫理委員會(huì)審批；所有納入對象經(jīng)溝通，對研究內(nèi)容充分知情，簽署知情同意書。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn)和排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)根據(jù)相關(guān)指南[5]進(jìn)行診斷并符合診斷要求，且心功能NYHA分級為Ⅱ～Ⅳ級；(2)年齡60～80歲；(3)初次治療或試驗(yàn)前3個(gè)月內(nèi)未使用過心血管相關(guān)藥物；(4)病人原始資料齊全。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)有先天性或家族性心臟病史者；(2)伴發(fā)心肌炎、心肌梗死等心臟相關(guān)疾病者；(3)合并有臟器功能嚴(yán)重受損者；(4)患感染類相關(guān)疾病、血液類疾病、惡性腫瘤或精神方面疾病者。

1.3 方法

1.3.1 儀器與試劑：RNeasyPlus Mini Kit試劑盒購自O(shè)MEGA公司；逆轉(zhuǎn)錄試劑盒購自MBI fermentas公司；實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(qRT-PCR)試劑盒購自賽默飛公司；BioRad-1Q5型qRT-PCR儀購自Bio-Rad公司；ND-1000超微粒分光光度計(jì)購自美國Nanodrop公司；彩色超聲儀購自美國ACUSON公司。

1.3.2 qRT-PCR檢測MiRNA-208水平：病人入組后第2日清晨空腹條件下，采集肘靜脈血5 mL，離心后取上層血清置于-80 ℃環(huán)境保存。按照試劑盒說明書進(jìn)行血清總RNA的提取和純化，并計(jì)算RNA濃度[6]。將所提RNA按照試劑盒說明書進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物進(jìn)行qRT-PCR反應(yīng)，采用2-ΔΔCt方法計(jì)算MiRNA-208水平。

1.3.3 心功能測定：檢測位置位于病人胸骨長軸水平線旁，應(yīng)用彩超拍攝左心室二維圖像；再依次沿左心室長軸檢測左室舒張末期內(nèi)徑(LVEDD)、左室收縮末期內(nèi)徑(LVESD)、室間隔厚度(IVSD)、后壁舒張末期厚度(PWD)及后壁收縮末期厚度(PWS)；左心室的室間隔末期收縮期厚度(IVSS)、舒張末期容積(IVEDV)、LVEF及收縮期末容積(LVESV)則通過Simpson方法從四尖室測量。心肌重量(LVM)=0.8×1.04[(PWD+LVEDD+IVSD)+PWD)3-(LVEDD)3]+0.6(g)；心肌質(zhì)量指數(shù)(LVMI)=LVM/體表面積(BSA)；平均室壁應(yīng)力(MWS)=(LVEDD+LVESD)/4(PWS+IVSS+IVSD+PWD)/4×SBP。

1.3.4 預(yù)后評估：所有病人出院后均進(jìn)行回訪，于第6個(gè)月評估其病情轉(zhuǎn)歸、中途是否出現(xiàn)再次住院或死亡，以及病人是否有心臟相關(guān)事件發(fā)生。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 本研究所有數(shù)據(jù)均使用SPSS 25.0軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，2組比較采用t檢驗(yàn)，多組比較采用單因素方差分析；采用Pearson相關(guān)系數(shù)描述MiRNA-208水平與心功能指標(biāo)的相關(guān)性。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 2 組MiRNA-208水平及心功能指標(biāo)比較 CHF組MiRNA-208、MWS及LVMI水平均明顯高于對照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；不同心功能分級CHF病人血清MiRNA-208、LVMI及MWS水平差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 2組MiRNA-208水平及心功能指標(biāo)比較

2.2 血清MiRNA-208水平與心功能指標(biāo)的相關(guān)性 Pearson相關(guān)分析顯示，血清MiRNA-208水平與MWS、LVMI均呈正相關(guān)(r=0.723、0.756，P均<0.001)。

2.3 血清MiRNA-208水平對老年CHF病人預(yù)后的影響 出院半年后隨訪發(fā)現(xiàn)，CHF病人中有25例發(fā)生了心臟相關(guān)事件。依據(jù)是否發(fā)生心臟相關(guān)事件進(jìn)行分組分析發(fā)現(xiàn)，無心臟事件組入院時(shí)MiRNA-208水平、MWS、LVMI顯著低于有心臟事件組(P<0.05)。見表2。

表2 MiRNA-208水平對老年CHF病人預(yù)后影響

3 討論

隨著介入心臟病學(xué)的發(fā)展及神經(jīng)體液-內(nèi)分泌系統(tǒng)藥物的應(yīng)用，人們對CHF治療的信心大大增強(qiáng)。但是，心衰發(fā)生、發(fā)展機(jī)制復(fù)雜，目前針對CHF仍缺乏強(qiáng)有力的控制措施和治療手段[7]。我國人口基數(shù)大且趨向老齡化，患CHF的老年病人比例仍在持續(xù)上升[2]。據(jù)統(tǒng)計(jì)，心衰病人4年死亡率超過50%，嚴(yán)重者1年死亡率超過半數(shù)，給社會(huì)及經(jīng)濟(jì)造成極大負(fù)擔(dān)。

作為多種疾病的調(diào)節(jié)因子，MiRNA在心血管疾病中的作用，尤其是在心肌重構(gòu)方面的作用受到越來越多的關(guān)注[8]。心室重構(gòu)與神經(jīng)-內(nèi)分泌因子、炎性相關(guān)因子等的激活密切相關(guān)[9]。近年來大量研究已證實(shí),MiRNA-208的異常表達(dá)影響病人心肌重構(gòu)，導(dǎo)致心肌收縮無力，泵血功能減弱，最終惡化為心衰[5,10]。有研究表明，MiRNA-208可作為心臟性死亡和心衰的有力預(yù)測標(biāo)記物[11]。本研究發(fā)現(xiàn)CHF組MiRNA-208水平顯著高于對照組，且隨著心功能的惡化，MiRNA-208水平逐步升高，該結(jié)果提示，MiRNA-208水平與心衰的發(fā)生和發(fā)展存在聯(lián)系。

CHF發(fā)生機(jī)制復(fù)雜，主要表現(xiàn)為心肌收縮力減弱[12]。超聲技術(shù)的發(fā)展為客觀評價(jià)心衰病人的左心室功能提供可能。MWS和LVMI為常用的衡量心室重構(gòu)的指標(biāo)，能夠有效反映發(fā)生CHF時(shí)病人心肌功能的改變及肥厚水平[13]。本研究通過測定老年CHF病人的MWS和LVMI水平，發(fā)現(xiàn)CHF組明顯高于對照組，且隨疾病加重，MWS和LVMI值越高，提示在心衰的發(fā)展過程中，可能伴隨心室重構(gòu)的嚴(yán)重病理變化。本研究結(jié)果證實(shí)，老年CHF病人的血清MiRNA-208水平與心功能指標(biāo)MWS和LVMI均呈正相關(guān)(r=0.723，0.756、P均<0.001)，提示CHF導(dǎo)致的心室重構(gòu)與血清中的MiRNA-208表達(dá)關(guān)系密切。

影響心臟疾病的因素很多，有研究發(fā)現(xiàn)MiRNA-208可作為獨(dú)立危險(xiǎn)因素發(fā)生作用，增加心臟疾病發(fā)生率。賈亭街等[14]研究發(fā)現(xiàn)，急性心肌梗死病人的血清MiRNA-208a水平迅速升高，且隨著疾病發(fā)作時(shí)間延長而明顯改變，3 h左右最高，可達(dá)正常表達(dá)值數(shù)十倍。本研究對CHF病人隨訪半年發(fā)現(xiàn)，并發(fā)心臟相關(guān)事件的病人血清MiRNA-208水平較未并發(fā)心臟相關(guān)事件者明顯升高。由此可推測，血清MiRNA-208水平高低可間接反映并發(fā)心臟相關(guān)事件的風(fēng)險(xiǎn)，MiRNA-208水平越高提示老年CHF病人預(yù)后越差。

綜上，老年CHF病人血清MiRNA-208表達(dá)水平與心功能指標(biāo)呈正相關(guān)，可作為老年CHF的診斷及預(yù)后預(yù)測因子。但本研究樣本量小，隨訪時(shí)間短，研究結(jié)果存在一定的局限性，需要進(jìn)一步研究證實(shí)。