不同產(chǎn)地沉香的藥效學比較研究

丘文戈，張百榮，范華娜，桂蓓，呂茜婷，鐘啟騰，梁玉華，田俊宏，冼明輝，陳艷芬

（1.惠州市中心人民醫(yī)院，廣東 惠州 516001；2.廣東藥科大學中藥學院，廣東 廣州 510006）

沉香以頂級香料以及名貴藥材聞名，有“眾香之首”“藥中黃金”的美稱[1]，作為藥用在中國已有1 000多年歷史，2020版《中國藥典》規(guī)定其為瑞香科植物白木香Aquilariasinensis（Lour.）Gilg含有樹脂的木材[2]。中醫(yī)理論認為沉香歸脾、胃、腎經(jīng)，具有行氣止痛、納氣平喘、溫中止嘔的功效，常用于胸腹脹悶疼痛、胃寒嘔吐呃逆、腎虛氣逆喘急?，F(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)，沉香具有促進胃腸運動[3]、鎮(zhèn)痛抗炎[4-7]、鎮(zhèn)靜等作用。

近年來由于過度砍伐、生存環(huán)境惡化等原因，我國沉香樹種的野生資源急劇減少，野外自然產(chǎn)沉香已無法滿足市場需求。廣東省作為我國沉香樹種人工種植歷史最悠久的地區(qū)，1978年開始引種柯拉斯那沉香，并于2006年后開始廣泛種植白木香[8]?；葜葑鳛槌料愕闹鳟a(chǎn)地之一，具有種植沉香得天獨厚的地理環(huán)境、氣候條件，在博羅、惠東等均有野生沉香林分布和人工種植基地，具有很大的開發(fā)利用價值。目前國內(nèi)外主要通過化學分析方法對不同產(chǎn)地沉香品質(zhì)進行分級，但因其依據(jù)的有效化學成分指標不同，分級也有所不同。沉香作為傳統(tǒng)中藥，藥用效果也是判斷中藥品質(zhì)的重要依據(jù)之一，因此本研究根據(jù)沉香的主要功效主治，以鎮(zhèn)痛、促胃腸運動、抗?jié)冏饔脼橹?，對不同產(chǎn)地沉香的藥理活性進行評價，以期為相應的沉香藥材品質(zhì)比較和進一步研究及應用提供實驗依據(jù)。

1 材料

1.1 動物

SPF級昆明小鼠，雌雄兼用，體質(zhì)量18～22 g，購自廣東省醫(yī)學實驗動物中心，生產(chǎn)許可證號：SCXK（粵）2018-0002。

1.2 實驗儀器

YLS-6B智能熱板儀（濟南益延科技發(fā)展有限公司）；AUY120電子天平（日本島津公司）。

1.3 藥物與試劑

瑞香科植物白木香1號（沉香1號），產(chǎn)地：海南，購自廣州至信中藥飲片有限公司，批號：批號201001。瑞香科植物白木香2號（沉香2號），產(chǎn)地：惠州市博羅縣，惠州市某沉香種植股份有限公司提供，批號：20191201；瑞香科植物白木香3號（沉香3號），產(chǎn)地：惠州市惠城區(qū)，惠州市某生態(tài)農(nóng)業(yè)股份有限公司提供，批號：202101001；藥材采用連續(xù)回流提取法，取沉香原藥材80 g，粉碎，95%（φ）乙醇依次回流提取，提取液合并，減壓濃縮得到浸膏。由浸膏加去離子水，蒸發(fā)濃縮配成500 mL質(zhì)量濃度為0.2 g/mL的藥液，冷藏以備用。

鹽酸雷尼替丁膠囊（雷利雅有限公司，批號：國藥準字H44021231）；枸櫞酸莫沙必利分散片（亞寶藥業(yè)，國藥準字H20090158）；羅通定片（云鵬制藥，批號：國藥準字H14020787）；冰乙酸、羧甲基纖維素、甲醛、乙醇（國藥集團化學試劑有限公司，批號：20170505、20181019、20190926、20200926）；吲哚美辛腸溶片（廣東華南藥業(yè)集團有限公司，批號：國藥準字H44020701）。

2 方法

2.1 不同沉香樣品的鎮(zhèn)痛作用比較

2.1.1 對熱刺激所致小鼠疼痛反應的影響

采用智能熱板儀，記錄小鼠從放入熱板（55±0.5）℃至出現(xiàn)舔后足反應所需時間（s），小于5 s或大于30 s或跳躍的均棄之不用。取篩選合格的雌性小鼠72只，按體質(zhì)量隨機分為空白對照組、陽性對照羅通定組、沉香1號組、沉香2號組、沉香3號組，各藥物組連續(xù)7 d灌胃給予相應藥物0.2 mL/10 g，空白對照組給予等量0.5%CMC-Na溶液，陽性對照組給予羅通定（0.5%CMC-Na混懸），于末次給藥后30、60、90、120 min時測量小鼠痛閾值。以小鼠舔后足反應作為痛閾指標，若小鼠在熱板上60 s仍無痛覺反應，即取出，按60 s計。

2.1.2 對冰乙酸所致小鼠扭體反應的影響

小鼠60只，按體質(zhì)量隨機分為5組，組別及給藥同“2.1.1”項，其中陽性對照組給予吲哚美辛（0.5%CMC-Na混懸）。末次給藥后1 h，腹腔注射0.7%冰乙酸0.1 mL/10 g，記錄各組小鼠20 min內(nèi)扭體反應（小鼠腹部內(nèi)凹，軀干與后肢伸長，臀部高起）次數(shù)，比較各組的扭體次數(shù)，并計算抑制率。

抑制率=（對照組扭體次數(shù)-給藥組扭體次數(shù)）/對照組扭體次數(shù)×100%。

2.1.3 對甲醛所致小鼠疼痛強度的影響

雄性小鼠60只，按體質(zhì)量隨機分為5組，組別及給藥同“2.1.1”項，其中陽性對照組給予吲哚美辛（0.5%CMC-Na混懸）。末次給藥1 h后，在小鼠右足被皮下注射2.5%甲醛溶液（0.02 mL/只）。甲醛疼痛分計算：給藥后將小鼠放置于一透明容器中，觀察其足部反應，各個時間段觀察15 s，按分級標準[9]記錄15 s內(nèi)該小鼠的最高疼痛強度分值：小鼠舔足、咬足、抖足均計3分，提高足部計2分，足部輕觸地面但不負重或跛行計1分，正常負重、走動自如則計0分。分別記錄各組小鼠 1 min、10 min、20 min、30 min、40 min的疼痛反應分值。

2.2 不同沉香樣品的抗胃潰瘍作用比較

2.2.1 乙醇誘導胃潰瘍實驗 小鼠60只，按體質(zhì)量隨機分為空白對照組、陽性對照雷尼替丁組、沉香1號組、沉香2號組、沉香3號組，各藥物組連續(xù)7 d灌胃給予相應藥物0.2 mL/10 g，空白對照組給予等量0.5%CMC-Na溶液。末次給藥前禁食不禁水24 h，末次給藥1 h后每只小鼠灌胃給予0.4 mL無水乙醇，1 h后處死小鼠，取出全胃，沿胃大彎剪開，用生理鹽水沖洗，再將胃浸泡于4%（φ）甲醛溶液中5～10 min，以固定胃內(nèi)外層。將胃展平在玻璃板上，觀察、測量胃損傷并按Guth法計算潰瘍指數(shù)。Guth法：點狀損傷計0.5分；條索狀損傷1 mm計1分；斑塊狀損傷（長和寬＞2 mm），按面積計分，相加即為潰瘍指數(shù)。

2.2.2 吲哚美辛誘導胃潰瘍實驗 小鼠60只，按體質(zhì)量隨機分為5組，組別及給藥同“2.2.1”項。末次給藥前禁食不禁水24 h，末次給藥1 h后每只小鼠皮下注射吲哚美辛0.2 mL/10 g，7 h后處死小鼠，取出全胃，沿胃大彎剪開，生理鹽水沖洗，于4%甲醛中浸泡5～10 min，將胃展平，觀察、測量胃損傷并按Guth法計算潰瘍指數(shù)。

2.3 不同沉香樣品對胃排空及腸推進的影響

小鼠55只，隨機分為空白對照組、陽性對照枸櫞酸莫沙必利組、沉香1號組、沉香2號組、沉香3號組。各藥物組連續(xù)7 d灌胃相應藥液（0.2 mL/10 g），空白對照組灌胃等量0.5%CMC-Na溶液。末次給藥前禁食不禁水12 h，末次給藥40 min后，灌胃含炭末的營養(yǎng)性半固體糊0.8 mL/只。20 min后，處死小鼠，打開腹腔，取全胃稱重，隨后沿胃大彎剪開并置于生理鹽水中清洗，稱量胃凈重，計算胃殘留率。測量從幽門至半固定營養(yǎng)糊前端的長度，幽門至盲腸的長度，計算小腸推進率。

胃殘留率=（胃全重-胃凈重）/灌胃半固體營養(yǎng)糊質(zhì)量×100%。

小腸推進率=米糊前端與幽門的距離/小腸全長×100%。

2.4 統(tǒng)計方法

3 結(jié)果

3.1 不同沉香樣品的鎮(zhèn)痛作用比較

3.1.1 對熱刺激所致小鼠疼痛反應的影響 實驗結(jié)果如表1所示，與空白對照組相比，3個沉香組的小鼠痛閾值有一定提高，但差異無統(tǒng)計學意義，而陽性對照藥羅通定能顯著提高不同時間點小鼠的痛閾值（P＜0.01）。

表1 不同沉香樣品對熱刺激所致小鼠疼痛反應的影響Table 1 Effects of different eaglewood samples on pain response induced by heat stimulation in mice(±s,n=10)

表1 不同沉香樣品對熱刺激所致小鼠疼痛反應的影響Table 1 Effects of different eaglewood samples on pain response induced by heat stimulation in mice(±s,n=10)

與空白對照組比較：**P＜0.01。

給藥后痛閾值/s組別劑量/（g·kg-1）給藥前痛閾值/s 120 min 13.49±6.32 58.25±6.06**14.16±4.82 14.68±7.12 14.81±6.82空白對照組羅痛定沉香1號沉香2號沉香3號-0.16 4 4 4 14.31±3.06 12.72±3.93 12.63±4.69 12.40±4.14 13.34±5.50 30 min 15.02±6.36 43.79±16.49**12.86±3.38 19.34±11.02 16.28±4.25 60 min 11.06±4.05 60.00±0.00**13.13±3.68 18.98±13.32 15.05±5.28 90 min 12.16±6.07 60.00±0.00**13.85±4.26 13.67±3.58 17.95±6.28

3.1.2 對甲醛致小鼠疼痛強度的影響 由表2可知，與空白對照組相比，各沉香組和吲哚美辛組在1～10 min內(nèi)差異均無統(tǒng)計學意義；20 min時，吲哚美辛組和各沉香組均能顯著降低小鼠疼痛（P＜0.01，P＜0.05）；30～40 min各沉香組也能不同程度降低甲醛致小鼠的疼痛值，其中尤以沉香2號組和3號組較為明顯，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01或P＜0.05）。

表2 不同沉香樣品對甲醛致小鼠疼痛強度的影響Table 2 Effects of different eaglewood samples on pain response induced by formaldehyde in mice(±s,n=12)

表2 不同沉香樣品對甲醛致小鼠疼痛強度的影響Table 2 Effects of different eaglewood samples on pain response induced by formaldehyde in mice(±s,n=12)

與空白對照組比較：*P＜0.05，**P＜0.01。

疼痛分值40 min 6.33±4.81 2.92±1.73*3.83±3.24 2.50±2.81**2.83±3.13*組別劑量/（g·kg-1）空白對照組吲哚美辛組沉香1號沉香2號沉香3號-0.06 4 4 4 1 min 10.92±7.37 14.83±6.52 11.17±3.49 12.42±3.87 10.75±4.29 10 min 3.33±2.71 2.42±1.62 3.25±2.26 2.67±2.71 3.08±2.61 20 min 9.33±5.74 4.83±3.01**5.50±2.84*5.58±4.60*4.01±3.81**30 min 7.58±4.36 3.92±3.09**4.58±2.64*5.33±2.27 4.00±3.36**

3.1.3 對乙酸致小鼠扭體反應的影響 如表3所示，與空白對照組相比，各沉香組在一定程度均能減少小鼠的扭體次數(shù)，其中以沉香2號組以及沉香3號組抑制作用更為明顯，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。

表3 不同沉香樣品對乙酸致小鼠扭體反應的影響Table 3 Effects of different eaglewood samples on writhing induced by acetic acid in mice(±s,n=12)

表3 不同沉香樣品對乙酸致小鼠扭體反應的影響Table 3 Effects of different eaglewood samples on writhing induced by acetic acid in mice(±s,n=12)

與空白對照組比較：*P＜0.05，**P＜0.01。

扭體次數(shù)（20 min/次）34.78±22.13 7.55±6.82**20.11±14.81 16.00±16.56*15.11±10.99*組別空白對照組吲哚美辛沉香1號沉香2號沉香3號劑量/（g·kg-1）-0.06 4 4 4

3.2 不同沉香樣品的抗胃潰瘍作用比較

3.2.1 對乙醇誘導小鼠胃潰瘍的影響 結(jié)果見表4，與空白對照組相比，各給藥組小鼠胃潰瘍指數(shù)均有顯著降低（P＜0.01或P＜0.05），其中尤以沉香1號組胃潰瘍指數(shù)降低最為明顯。從圖1可見，肉眼觀察模型組胃黏膜損傷嚴重，有明顯的條索狀或片狀損傷面，明顯充血、糜爛。其他各用藥組有不同程度的改變，偶見斑點狀或較小條狀損傷，尤以沉香1號組保護作用較強。

圖1 乙醇誘導小鼠胃潰瘍實驗的胃解剖照片F(xiàn)igure 1 Anatomical pictures of stomach of ethanol-induced gastric ulcer in mice

表4 不同沉香樣品對乙醇誘導小鼠胃潰瘍的影響Table 4 Effects of different eaglewood samples on gastric ulcer induced by ethanol in mice(±s,n=12)

表4 不同沉香樣品對乙醇誘導小鼠胃潰瘍的影響Table 4 Effects of different eaglewood samples on gastric ulcer induced by ethanol in mice(±s,n=12)

與空白對照組比較：*P＜0.05，**P＜0.01。

組別空白對照組雷尼替丁組沉香1號沉香2號沉香3號劑量/（g·kg-1）-0.06 4 4 4潰瘍指數(shù)26.70±22.92 12.37±11.64*11.16±12.18**12.04±13.58*13.29±12.17*

3.2.2 對吲哚美辛誘導小鼠胃潰瘍的影響 結(jié)果見表5，與空白對照組相比，沉香1號組小鼠胃潰瘍指數(shù)明顯下降（P＜0.05），而沉香3號組能極顯著降低小鼠胃潰瘍指數(shù)（P＜0.01）。從圖2可見，肉眼觀察模型組胃黏膜損傷嚴重，有明顯的潰瘍損傷面，可見充血、糜爛。其他各用藥組有不同程度的改善。

圖2 吲哚美辛誘導小鼠胃潰瘍實驗的胃解剖照片F(xiàn)igure 2 Anatomical pictures of stomach of indomethacininduced gastric ulcer in mice

表5 不同沉香樣品對吲哚美辛誘導小鼠胃潰瘍的影響Table 5 Effects of different eaglewood samples on gastric ulcer induced by indometacin in mice(±s,n=12)

表5 不同沉香樣品對吲哚美辛誘導小鼠胃潰瘍的影響Table 5 Effects of different eaglewood samples on gastric ulcer induced by indometacin in mice(±s,n=12)

與空白對照組比較：*P＜0.05，**P＜0.01。

潰瘍指數(shù)10.18±7.30 4.18±3.57*5.09±4.94*5.95±5.68 4.14±4.02**組別空白對照組雷尼替丁組沉香1號沉香2號沉香3號劑量/（g·kg-1）-0.06 4 4 4

3.3 對小鼠胃排空及腸推進的影響

由表6可知，與空白對照組相比，莫沙必利組小鼠胃殘留率顯著降低（P＜0.01），小腸推進率顯著上升（P＜0.01）；沉香1號組、沉香3號組小鼠胃殘留率均有所降低（P＜0.05），小腸推進率均有不同程度增加（P＜0.05）。

表6 不同沉香樣品對小鼠胃腸運動的影響Table 6 Effects of different eaglewood samples on gastrointestinal motility in mice(±s,n=11)

表6 不同沉香樣品對小鼠胃腸運動的影響Table 6 Effects of different eaglewood samples on gastrointestinal motility in mice(±s,n=11)

與空白對照組比較：*P＜0.05，**P＜0.01。

組別空白對照組莫沙必利組沉香1號沉香2號沉香3號劑量/（g·kg-1）-0.03 4 4 4胃殘留率/%62.07±7.76 42.49±8.37**48.51±12.21*49.99±20.57 45.65±21.26*腸推進率/%59.56±19.36 77.20±12.83**74.65±11.50*67.52±9.52 77.78±12.85*

4 討論

沉香為名貴的傳統(tǒng)藥材和香料，自然情況下白木香樹須受到外界傷害后，才在其生長過程中緩慢形成沉香[10]，但這種自然情況發(fā)生幾率不高，不能滿足市場需要。為了減少對野生沉香資源的依賴，我國從上世紀就開始大力發(fā)展白木香種植，并探索人工結(jié)香方法，目前魏建和等[11]發(fā)明的通體結(jié)香技術已成為我國主要沉香產(chǎn)區(qū)應用最廣泛的結(jié)香技術。多項研究表明[12-13]，通體香的質(zhì)量符合《中國藥典》的規(guī)定，藥理活性與野生沉香相當，可代替野生沉香入藥。最新研究[14]采用超高效液相色譜串聯(lián)四級桿飛行時間質(zhì)譜和氣相色譜質(zhì)譜結(jié)合非靶向代謝組學和指紋圖譜，對通體香與野生沉香的乙醇提取物和揮發(fā)性成分進行分析，結(jié)果證實通體香和野生沉香在形成過程中產(chǎn)生的主要化學成分相同。

沉香在臨床應用廣泛，多以復方形式應用，如四磨湯、沉香化氣膠囊、八味沉香丸、沉香散等，主要用于治療消化系統(tǒng)疾病、心腦血管疾病、泌尿系統(tǒng)疾病，其中尤以消化系統(tǒng)疾病應用最廣泛，包括功能性消化不良、慢性胃炎、返流性食管炎、消化性潰瘍、胃痛、腸梗阻、功能性便秘等疾病的治療應用[15]。國內(nèi)外學者還對沉香葉或沉香木進行了研究，如Kakino等[16]以沉香葉乙醇提取物對小鼠通便作用證明其對便秘的良好治療效果，李紅念等[7，17]對沉香葉以及沉香藥材的鎮(zhèn)痛、抗炎作用進行對比，證明了沉香葉在鎮(zhèn)痛、抗炎方面與沉香藥材作用近似。本研究通過不同沉香的抗?jié)冏饔帽容^研究發(fā)現(xiàn)，不同產(chǎn)地的3種沉香對乙醇誘導的小鼠胃潰瘍和吲哚美辛誘導的小鼠胃潰瘍均有抑制作用，其中1號沉香和3號沉香作用更為明顯；通過沉香對小鼠胃腸運動影響的實驗研究發(fā)現(xiàn)，3種沉香均有促進胃腸運動的作用，尤以1號沉香和3號沉香作用更佳。對沉香的鎮(zhèn)痛作用研究結(jié)果顯示，不同產(chǎn)地的沉香對物理性刺激和化學性刺激誘發(fā)的疼痛有不同程度的鎮(zhèn)痛作用，其鎮(zhèn)痛部位主要是在外周；與空白組比較，3號沉香鎮(zhèn)痛作用更為明顯。海南產(chǎn)地沉香是海南地道藥材之一，具有色深、香味濃、油脂多等特色，廣東在幾百年前也已成為沉香的重要產(chǎn)地，故民間認為海南產(chǎn)和廣東產(chǎn)沉香均為佳品[18]。有學者利用Illumina HiSeq測序平臺對沉香木中真菌基因組測序并進行生物信息學分析，結(jié)果表明海南和廣東不同地區(qū)沉香木的優(yōu)勢種群不同。

綜上所述，廣東惠州產(chǎn)地的沉香在鎮(zhèn)痛、抗胃潰瘍及促胃腸運動方面的作用均較為顯著，為沉香的品質(zhì)評價和開發(fā)應用提供了實驗依據(jù)。今后還可對各產(chǎn)地沉香的化學成分進一步研究，為不同產(chǎn)地沉香的品質(zhì)評價提供深入的理論基礎和科學驗證。