阿西美辛分散片在兔體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)和相對(duì)生物利用度

劉振華 趙長(zhǎng)祺 金 英 李忠思

(承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院藥劑科，河北 承德 067000)

阿西美辛是一種新的非甾體消炎鎮(zhèn)痛藥，具有較好的抗炎效果和耐受性，并能明顯減輕吲哚美辛的胃腸道不良反應(yīng)，臨床上主要用于風(fēng)濕性、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎等疾病的消炎鎮(zhèn)痛，目前有膠囊和緩釋膠囊兩種劑型〔1，2〕。筆者曾采用正交試驗(yàn)制備阿西美辛分散片〔3〕，并用高效液相色譜法測(cè)定其含量〔4〕。本研究分析單次口服阿西美辛分散片在兔體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)過程和相對(duì)生物利用度，為臨床用藥提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器 KQ-300型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);JA-2003電子天平(上海天平儀器廠);GT16-3型高速臺(tái)式離心機(jī)(北京時(shí)代北利離心機(jī)有限公司);ZH-2自動(dòng)漩渦混合器(天津藥典標(biāo)準(zhǔn)儀器廠);JASCO高效液相色譜儀(UV-1575檢測(cè)器，PU-1580泵，日本分光公司)。

1.1.2 試劑與藥品 阿西美辛分散片(承德醫(yī)學(xué)院中藥研究所自制，批號(hào):100401，規(guī)格:30 mg/0.3 g);阿西美辛膠囊(承德醫(yī)學(xué)院中藥研究所自制，批號(hào):100501，規(guī)格:30 mg/0.3 g);吲哚美辛(石藥集團(tuán)歐意藥業(yè)有限公司，批號(hào):2175110646，含量:99.4%);酮洛芬(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào):100337-201003);甲醇、乙腈均為色譜純;其余試劑均為分析純;水為重蒸餾水。

1.1.3 動(dòng)物 健康家兔6只，雌雄各半，體重(2.7±0.3)kg，承德醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物室提供，給藥前禁食12 h，自由給水。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件〔5，6〕色譜柱:Hypersil BDSC18(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流動(dòng)相為 pH4.5 醋酸鹽緩沖液-乙腈-甲醇(50∶40∶10)，流速 0.6 ml/min，柱溫 25℃，檢測(cè)波長(zhǎng) 250 nm，進(jìn)樣量20 μl。

1.2.2 給藥方法及血樣采集 采用自身對(duì)照單劑量雙周期交叉給藥方案，將6只家兔隨機(jī)分成A、B兩組，A組灌胃給藥阿西美辛分散片，B組灌胃給藥阿西美辛膠囊，給藥劑量均為30 mg/kg(以阿西美辛計(jì))，給藥后4 h禁食，于給藥前及給藥后 0.5、1、2、4、6、8、10、12、24 h 耳緣靜脈取血 1 ml。給藥 1 w后，兩組交叉給藥，相同時(shí)間點(diǎn)取血。采集的血樣均置于肝素化離心管中，3 000 r/min離心10 min，分離上層血漿，置－20℃冰箱中保存待測(cè)。

1.2.3 血漿樣品的處理 精密量取待測(cè)血漿樣品200μl，置于離心管中，加入200μl乙腈，酮洛芬內(nèi)標(biāo)溶液(50 mg/L)20μl，渦旋混合1 min后，12 000 r/min離心15 min，取上清液20 μl進(jìn)樣。

1.2.4 方法專屬性 按照1.2.1、1.2.3方法，分別取空白血漿、空白血漿加阿西美辛對(duì)照品、吲哚美辛對(duì)照品和內(nèi)標(biāo)酮洛芬、血漿樣品加內(nèi)標(biāo)酮洛芬樣品，處理后進(jìn)樣分析。

1.2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密量取阿西美辛和吲哚美辛對(duì)照品溶液，以流動(dòng)相稀釋制成濃度分別為0.16、0.32、0.64、1.28、2.56、5.12、10.24 mg/L 以 及 0.12、0.24、0.48、0.96、1.92、3.84、7.68 mg/L的系列溶液，備用。精密量取空白血漿200μl，分別加入阿西美辛和吲哚美辛對(duì)照品溶液200μl以及酮洛芬內(nèi)標(biāo)溶液20μl，照1.2.3方法處理，在1.2.1色譜條件下進(jìn)樣20μl，測(cè)定阿西美辛和吲哚美辛的峰面積，以濃度(mg/L)對(duì)峰面積進(jìn)行線性回歸。

1.2.6 精密度和穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 分別取阿西美辛和吲哚美辛對(duì)照品溶液200μl，加空白血漿200μl及酮洛芬內(nèi)標(biāo)溶液20μl，制備高、中、低三種濃度的阿西美辛和吲哚美辛血漿樣品(阿西美辛濃度分別為0.04、0.64、1.28 mg/L，吲哚美辛濃度分別為0.03、0.48、0.96 mg/L)，照1.2.1 色譜條件進(jìn)樣，連續(xù)測(cè)定3 d，測(cè)定阿西美辛和吲哚美辛峰面積，分別代入回歸方程，計(jì)算其濃度。將三種濃度血漿樣品在－20℃反復(fù)凍融2次，4℃保存48 h，常溫下放置12 h，取樣處理，測(cè)定峰面積。

1.2.7 回收率試驗(yàn) 按照1.2.6方法制備高、中、低三種濃度的阿西美辛和吲哚美辛血漿樣品，以流動(dòng)相配制三種相同濃度阿西美辛和吲哚美辛溶液，按照1.2.1色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，每個(gè)樣品測(cè)定5次，計(jì)算提取和方法回收率。

1.2.8 藥動(dòng)學(xué)研究 取兩種制劑給藥前與給藥后各時(shí)間的血漿樣品，按照1.2.3方法處理，在1.2.1色譜條件下，進(jìn)樣20μl，測(cè)定峰面積，計(jì)算阿西美辛和吲哚美辛濃度。

2 結(jié)果

阿西美辛和吲哚美辛具有良好的分離度，空白血漿和血漿樣品中的內(nèi)源性物質(zhì)在阿西美辛和吲哚美辛的保留時(shí)間處未出現(xiàn)色譜峰，對(duì)樣品測(cè)定沒有干擾。表明本實(shí)驗(yàn)血漿中阿西美辛和吲哚美辛的測(cè)定方法專屬性良好。見圖1。

圖1 血漿中阿西美辛和吲哚美辛的色譜圖

阿西美辛回歸方程Y=64 761X+768.56，r=0.999 9(n=7);吲哚美辛回歸方程Y=85 138X+600.47，r=0.999 9(n=7)。結(jié)果表明，阿西美辛在0.04～2.56 mg/L、吲哚美辛在0.03～1.92 mg/L濃度范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

阿西美辛和吲哚美辛的回收率見表1。阿西美辛三種濃度的日間精密度RSD分別為1.56%、3.24%、1.97%，日內(nèi)精密度RSD分別為2.48%、3.11%、1.65%;吲哚美辛三種濃度的日間精密度RSD分別為0.93%、3.14%、1.69%，日內(nèi)精密度RSD分別為1.45%、3.08%、1.23%，精密度良好。三種濃度血漿樣品中阿西美辛和吲哚美辛的濃度RSD均＜4%，表明樣品在上述條件下穩(wěn)定。

表1 樣品中阿西美辛和吲哚美辛的回收率(n=5，%)

表2 兩種制劑的血藥濃度(x ±s，n=6，mg/L)

表2中兩種制劑的阿西美辛的血藥濃度均無(wú)法計(jì)算藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，表3中的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)是按吲哚美辛的血藥濃度以3p97軟件處理而得。阿西美辛分散片和阿西美辛膠囊口服后，在兔體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)過程符合一室模型。在給藥方式和給藥劑量相同的情況下，與阿西美辛膠囊相比，阿西美辛分散片的tmax略短，Cmax明顯增高，相對(duì)生物利用度為186%。

表3 兩種制劑的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)(n=6，均數(shù))

3 討論

本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定兔血漿中阿西美辛和吲哚美辛的濃度，兩種藥物與內(nèi)標(biāo)分離完全，且不受血漿中雜質(zhì)的影響，方法專屬性強(qiáng)，具有精確、靈敏、重復(fù)性好等特點(diǎn)，可以滿足阿西美辛分散片的兔體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)和生物利用度的研究需要。

阿西美辛為非甾體消炎鎮(zhèn)痛藥，是吲哚美辛的前體，口服后不顯示任何藥理作用，大部分經(jīng)小腸吸收再經(jīng)肝臟轉(zhuǎn)化為吲哚美辛才顯示療效〔2〕。本實(shí)驗(yàn)的相對(duì)生物利用度結(jié)果也驗(yàn)證了阿西美辛分散片和阿西美辛膠囊體外溶出度實(shí)驗(yàn)〔3〕，說明阿西美辛分散片的生物利用度明顯優(yōu)于膠囊劑，也為進(jìn)一步的人體藥動(dòng)學(xué)實(shí)驗(yàn)和臨床用藥提供了參考。

1 甘黎光.口服非甾體抗炎藥的發(fā)展與動(dòng)向〔J〕.中國(guó)新藥雜志，1994;3(4):53.

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3 李忠思，王玉平，劉振華.阿西美辛分散片的制備及其溶出度評(píng)價(jià)〔J〕.中國(guó)藥房，2011;22(1):39-41.

4 李忠思，張 玲，王竹君，等.HPLC法測(cè)定阿西美辛分散片的含量〔J〕.中國(guó)藥房，2011;22(9):839-41.

5 胡玉欽，劉會(huì)臣，馬 銳，等.高效液相色譜法測(cè)定人血清中阿西美辛和吲哚美辛〔J〕.色譜，1999;17(6):586-7.

6 龐家蓮，談恒山.高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定人血漿中阿西美辛及其代謝物吲哚美辛的濃度〔J〕.中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志，2004;24(4):246-7.