芪參益氣滴丸對(duì)急性心肌梗死大鼠心肌細(xì)胞凋亡及心功能的影響

王 靜 劉桂華 王愛(ài)玲

(常州市第三人民醫(yī)院心內(nèi)科，江蘇 常州 213001)

急性心肌梗死(AMI)系缺血性心臟病(IHD)的一種，心肌組織中Rho激酶的表達(dá)升高，導(dǎo)致心肌細(xì)胞凋亡增加〔1〕，近期并發(fā)心力衰竭、心律失常、休克的可能性大，年齡、前壁梗死、心功能、心絞痛史是遠(yuǎn)期預(yù)后的顯著危險(xiǎn)因素〔2〕。芪參益氣滴丸(QS)是由黃芪、丹參、三七、降香提取精制而成的純中藥制劑，具有益氣通脈、活血止痛的功效，廣泛用于心血管疾病的治療。本實(shí)驗(yàn)著重研究QS對(duì)AMI大鼠心肌細(xì)胞凋亡及心功能的影響。

1 材料與方法

1.1 試劑與設(shè)備 QS(天津天士力藥業(yè)集團(tuán))，HX-300動(dòng)物呼吸機(jī)(成都泰盟科技有限公司)，BL-420E生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)(成都泰盟科技有限公司)，原位細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(Roche公司)，Bcl-2，Bax抗體(美國(guó)Santa Cruz公司)。

1.2 動(dòng)物模型制備 取體重220～280 g的健康雌雄SD大鼠(購(gòu)自安徽省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心)，腹腔注射用10%水合氯醛麻醉，插管后接通動(dòng)物呼吸機(jī)，調(diào)節(jié)參數(shù)(潮氣量14 ml，吸呼比為1∶1，呼吸頻率為70次/min)，使用BL-420E生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)進(jìn)行心電監(jiān)測(cè)，縱行切開心尖部皮膚約3 cm，逐層組織分離至第4肋間進(jìn)胸，剪開心包膜，暴露心臟，在左心耳根部下方2 mm處進(jìn)針，深度大約0.5 mm左右，等心電圖恢復(fù)穩(wěn)定10 min后，從心肌表層至肺動(dòng)脈圓錐旁用7-0縫線結(jié)扎，觀察心電圖變化情況，當(dāng)ST段弓背向上抬高并持續(xù)30 min認(rèn)為造模成功，復(fù)位心臟，逐層縫合。假手術(shù)組手術(shù)過(guò)程與上述相同，但只穿線不結(jié)扎冠狀動(dòng)脈。

1.3 分組及給藥 24 h存活大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、AMI組、QS治療組各10只。QS治療組給予0.135 g·kg－1·d－1的QS混濁液灌胃，AMI組及假手術(shù)組均給予生理鹽水灌胃，給藥持續(xù)4 w。

1.4 觀察指標(biāo) 術(shù)后4 w后，進(jìn)行血流動(dòng)力學(xué)檢測(cè)，采用BL-420E生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)，收集血流動(dòng)力學(xué)參數(shù)，包括外周動(dòng)脈收縮壓(SBP)、動(dòng)脈舒張壓(DBP)、左室收縮壓(LVSP)、左室舒張末壓(LVEDP)、左室內(nèi)壓最大上升和下降速率(±dp/dtmax)和心率(HR)，參數(shù)收集完后處死大鼠，制作心臟切片，每只大鼠隨機(jī)取5張切片，采用TUNEL法檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡情況，計(jì)算凋亡指數(shù)(AI)=凋亡心肌細(xì)胞數(shù)/心肌細(xì)胞總數(shù)，采用免疫組化法檢測(cè)Bcl-2、Bax基因蛋白表達(dá)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS13.0軟件，數(shù)據(jù)以x±s表示，組間比較采用t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 大鼠血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)測(cè)定 AMI術(shù)后4 w 3組HR差異不顯著(P＞0.05)。與假手術(shù)組相比，AMI組LVSP及+dp/dtmax顯著降低，LVEDP及－dp/dtmax顯著增高;與AMI組比較，QS治療組LVSP及+dp/dtmax顯著增高，LVEDP及－dp/dtmax顯著降低(均P＜0.05)。見表1。

2.2 心肌組織Bcl-2和Bax蛋白的表達(dá) 與假手術(shù)組相比，AMI組Bcl-2 A值顯著降低(P＜0.05)，Bax A值顯著增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);與AMI組比較，QS治療組Bcl-2 A值顯著增高(P＜0.05)，Bax A值顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表1。

表1 AMI術(shù)后4 w各組大鼠血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)變化及Bcl-2、Bax蛋白表達(dá)(x ± s，n=10)

2.3 QS對(duì)AMI大鼠細(xì)胞凋亡的影響 凋亡心肌細(xì)胞核呈棕色，分布不均。假手術(shù)組、AMI組、QS治療組凋亡指數(shù)分別為(18.1±1.7)%、(12.5±0.9)%及(23.7±2.1)%，與假手術(shù)組相比，AMI組心肌組織細(xì)胞凋亡明顯增多(P＜0.05);與AMI組相比，QS治療組凋亡發(fā)生率顯著降低(P＜0.05)。

3 討論

IHD的發(fā)病機(jī)制是由于心肌缺血，缺血區(qū)心肌細(xì)胞存在不同程度喪失，引起的心臟電生理信號(hào)傳導(dǎo)改變，從而引起心力衰竭、心源性休克或嚴(yán)重的心律失常，導(dǎo)致心肌細(xì)胞喪失的重要途徑之一是細(xì)胞凋亡〔3〕，因此，治療IHD的關(guān)鍵目標(biāo)是阻止心肌細(xì)胞的喪失，即阻止心肌細(xì)胞凋亡。

Bcl-2基因是原癌基的一種，是調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡的第1個(gè)基因，心肌細(xì)胞中的Bcl-2基因能抑制p53，從而阻止心肌細(xì)胞凋亡，且還具有保護(hù)心室肌細(xì)胞的作用，與p53表達(dá)的改變無(wú)關(guān)〔4〕。Bax基因的功能與Bcl-2相反，其表達(dá)產(chǎn)物Bax蛋白能抑制Bcl-2的抗凋亡作用。Bcl-2基因與Bax基因的比值決定細(xì)胞在受到誘導(dǎo)刺激后是凋亡還是存活，多種促存活因子可通過(guò)調(diào)節(jié) Bax/Bcl-2 發(fā)揮其抗凋亡作用〔5，6〕。

LVSP、LVEDP、±dp/dtmax是反映血流動(dòng)力學(xué)的4項(xiàng)重要指標(biāo)，LVSP和±dp/dtmax反映左室收縮功能，數(shù)值越大心臟收縮功能越好，LVEDP和－dp/dtmax反映左室舒張功能，數(shù)值越大心臟舒張功能越好。本文結(jié)果表明大鼠收縮功能及舒張功能均受損，出現(xiàn)了心功能不全，采用 QS治療后 LVSP、LVEDP、±dp/dtmax有所改善，表明心功能明顯改善。

QS中黃芪及其有效成分黃芪皂甙及α-酪氨酸能夠擴(kuò)張血管，減輕心臟負(fù)荷，降低心肌耗氧量，增強(qiáng)心肌細(xì)胞抗缺氧“再給氧”損傷的能力，降低心肌細(xì)胞的損傷程度，改善心功能〔7〕。組方中丹參的有效成分為丹參酮Ⅰ、丹參酮ⅡA、丹參素等，能夠改善微循環(huán)血流，增加冠狀動(dòng)脈血流量，保護(hù)心臟〔8〕。三七能夠降低心肌耗氧量、改善心肌缺血、減慢心率、擴(kuò)血管降血壓，有效成分為三七總甙〔9〕。本結(jié)果顯示，QS能夠上調(diào)凋亡抑制基因Bcl-2和下調(diào)凋亡加速基因Bax的表達(dá)，降低Bax/Bcl-2比值，從而抑制缺血區(qū)的心肌細(xì)胞凋亡，改善心功能，抑制心室重構(gòu)，改善預(yù)后。

1 潘娜娜，譚麗娟，馬建英，等.Rho激酶在急性心肌梗死大鼠中的表達(dá)及其對(duì)心肌細(xì)胞凋亡的影響〔J〕.心臟雜志，2011;23(1):16-9.

2 岳高峰，魏俊霞.急性心肌梗死遠(yuǎn)期預(yù)后因素及生存分析〔J〕.青島醫(yī)藥衛(wèi)生，2009;41(6):408-11.

3 Louhelainen M，Vahtola E，Kaheinen P，et al.Effects of levosimendan on cardiac remodeling and cardiomyocyte apoptosis in hypertensive Dahl/Rapp rats〔J〕.Br JPharmacol，2007;150(7):851-61.

4 Gustafsson AB，Gottlieb RA.Bcl-2 family members and apoptosis，taken to heart〔J〕.Am JPhysiol Cell Physiol，2007;293(1):C45-C51.

5 Condorelli G，Morisco C，Stassi G，et al.Increased cardiomyocyte apoptosis and changes in proapoptotic and antiapoptotic genes bax and bcl-2 during left ventricular adaptations to chronic pressure overload in the rat〔J〕.Circulation，1999;99(23):3071-8.

6 Iida KT，Suzuki H，Sone H，et al.Insulin inhibits apoptosis of macrophage cell line，THP-1 cells，via phosphatidylinositol-3-kinase-dependent pathway〔J〕.Arterioscler Thromb Vasc Biol，2002;22(3):380-6.

7 Zhao P，Su G，Xiao X，et al.Chinese medicinal herb Radix Astragali suppresses cardiac contractile dysfunction and inflammation in a rat model of autoimmune myocarditis〔J〕.Toxicol Lett，2008;182(1-3):29-35.

8 Zhou R，He LF，Li YJ，et al.Cardioprotective effect of water and ethanol extract of Salvia miltiorrhiza in an experimental model of myocardial infarction〔J〕.J Ethnopharmacol，2012;139(2):440-6.

9 楊志剛，陳阿堅(jiān)，俞頌東.三七藥理研究新進(jìn)展〔J〕.上海中醫(yī)藥雜志，2005;39(4):59-60.