多發(fā)性骨髓瘤患者NLR、β2-MG、LDH與免疫表型、細(xì)胞遺傳學(xué)及預(yù)后生存的關(guān)系

張 琪，甘宜敏，徐 陽(yáng)，衡 春△

江蘇省淮安市第一人民醫(yī)院：1.血液病研究室；2.檢驗(yàn)科，江蘇淮安 223000

多發(fā)性骨髓瘤(MM)是常見(jiàn)的血液系統(tǒng)惡性腫瘤，是一種漿細(xì)胞異常克隆增殖性疾病，目前尚無(wú)有效的治療方法，預(yù)后一般較差[1-2]。MM的致病機(jī)制尚不明確，但隨著間接熒光原位雜交技術(shù)(FISH)、基因表達(dá)譜檢測(cè)(GEP)等技術(shù)的不斷發(fā)展，MM的生物學(xué)及遺傳特征逐漸明確[3-4]。細(xì)胞遺傳學(xué)異常被認(rèn)為是影響MM預(yù)后的重要因素，但細(xì)胞遺傳學(xué)檢驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)室條件嚴(yán)格，檢查費(fèi)用高，并不適用于基層醫(yī)院，故尋找更為方便簡(jiǎn)單的方法預(yù)測(cè)MM患者預(yù)后，成為了當(dāng)前MM相關(guān)研究的熱點(diǎn)。外周血中性粒細(xì)胞/淋巴細(xì)胞比值(NLR)是一種和免疫調(diào)節(jié)功能相關(guān)的指標(biāo)，能反映體內(nèi)免疫炎癥反應(yīng)強(qiáng)度[5]。有研究表明，NLR在反映乳腺癌、卵巢癌以及膀胱癌等多種惡性腫瘤患者預(yù)后中均具有較高的價(jià)值[6]。β2微球蛋白(β2-MG)是一種單鏈多肽低分子蛋白，主要由淋巴細(xì)胞分泌，研究表明，合并惡性腫瘤患者血清β2-MG水平將大幅度升高，這可能是因?yàn)槟[瘤細(xì)胞自身能合成并分泌β2-MG以及惡性腫瘤患者機(jī)體免疫穩(wěn)定性被破壞，免疫反應(yīng)被激活，促使β2-MG分泌增加[7]。乳酸脫氫酶(LDH)是糖酵解過(guò)程中的重要代謝酶，其血清水平能提示機(jī)體缺氧、腫瘤細(xì)胞活性狀態(tài)及惡性轉(zhuǎn)化等狀況[8]。以上指標(biāo)的檢測(cè)取材方便，步驟簡(jiǎn)單。研究外周血NLR、血清β2-MG以及LDH與MM患者細(xì)胞遺傳學(xué)以及免疫表型之間的關(guān)系，進(jìn)而分析其在MM患者預(yù)后中的價(jià)值具有一定的臨床意義，基于以上背景，本課題組開(kāi)展了如下研究。

1 資料與方法

1.1一般資料 將本院2016年1月至2019年1月收治的233例MM患者以及同期100例健康體檢合格的志愿者納入研究，分別作為MM組與健康組。MM患者納入標(biāo)準(zhǔn)：患者符合2003年國(guó)際骨髓瘤工作組制定的MM相關(guān)診療標(biāo)準(zhǔn)[9]；初次被診斷為MM；參與研究前未接受過(guò)任何化療。MM患者排除標(biāo)準(zhǔn)：參與研究前已存在急性或活動(dòng)性感染者；合并自身免疫性疾病、艾滋病等可能影響NLR者；合并各類慢性炎癥者；合并其他惡性腫瘤者。233例MM患者中，男141例、女92例，年齡43～81歲、平均(65.41±13.54)歲；對(duì)照組中，男61例、女39例，年齡45～80歲、平均(66.14±14.03)歲；兩組年齡及性別構(gòu)成比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法

1.2.1外周血指標(biāo)檢測(cè) 采集被研究者空腹靜脈血6 mL，均分為3份，置于干燥潔凈的試管內(nèi)，分別用于檢測(cè)外周血NLR以及血清β2-MG、LDH水平。血清β2-MG采用放射免疫法檢測(cè)，試劑盒為上海超研生物科技有限公司生產(chǎn)。NLR及LDH均采用日立7600全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)。

1.2.2患者免疫表型、細(xì)胞遺傳學(xué)檢查結(jié)果的收集 收集MM患者的檢查結(jié)果，包括常規(guī)染色體核型、骨髓免疫分型、細(xì)胞遺傳學(xué)、FISH檢查結(jié)果。染色體核型檢測(cè)包括常規(guī)染色體核型(中期R+G顯帶)、FISH(間期)檢測(cè)，復(fù)雜染色體核型指常規(guī)中期R+G顯帶染色體檢測(cè)存在≥3個(gè)染色體核型異?；蚨鄠€(gè)預(yù)后不良染色體核型異常。

1.2.3分組比較及隨訪 首先比較MM組與對(duì)照組以及MM不同DS分期患者外周血NLR及血清β2-MG、LDH水平。并根據(jù)MM患者外周血NRL及血清β2-MG、LDH的中位水平，將其分為高、低NLR組，高、低β2-MG水平組，高、低LDH水平組，分別比較各亞組患者免疫表型以及細(xì)胞遺傳學(xué)特點(diǎn)；隨訪3年，繪制生存曲線，分析外周血NLR及血清β2-MG、LDH水平對(duì)MM患者生存情況的影響。

2 結(jié) 果

2.1MM組與對(duì)照組外周血NLR、血清β2-MG以及LDH水平比較 MM組外周血NLR及血清β2-MG、LDH水平均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 MM組與對(duì)照組外周血NLR、血清β2-MG以及LDH水平比較

2.2不同DS分期MM患者外周血NLR、血清β2-MG以及LDH水平比較 DS分期Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期患者外周血NLR、血清β2-MG以及LDH水平比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。進(jìn)一步兩兩比較顯示，不同DS分期患者外周血NLR、血清β2-MG、LDH水平：Ⅰ期<Ⅱ期<Ⅲ期，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 不同DS分期MM患者外周血NLR、血清β2-MG以及LDH水平比較

2.3NLR水平與MM患者免疫表型及細(xì)胞遺傳學(xué)的關(guān)系分析 MM組中233例患者外周血NLR中位值為1.96，以NLR中位水平作為分組標(biāo)準(zhǔn)，將233例MM患者分為高NLR組(n=72)與低NLR組(n=161)。比較發(fā)現(xiàn)，高NLR組患者CD56、TP53、RB-1以及復(fù)雜核型檢出率均高于低NLR組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 NLR水平與MM患者免疫表型及細(xì)胞遺傳學(xué)的關(guān)系分析[n(%)]

2.4血清β2-MG水平與MM患者免疫表型及細(xì)胞遺傳學(xué)的關(guān)系分析 MM組患者血清β2-MG中位水平為3.94 mg/L，以此作為分界點(diǎn)，將233例MM患者分為β2-MG高水平組(n=55)與β2-MG低水平組(n=178)。比較發(fā)現(xiàn)，β2-MG高水平組TP53、RB-1以及復(fù)雜核型檢出率均高于β2-MG低水平組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表4。

表4 血清β2-MG水平與MM患者免疫表型及細(xì)胞遺傳學(xué)的關(guān)系分析[n(%)]

2.5血清LDH水平與MM患者免疫表型及細(xì)胞遺傳學(xué)的關(guān)系分析 233例MM患者血清LDH中位水平為196.69 U/L，以此作為分組標(biāo)準(zhǔn)，將其分為血清LDH高水平組(n=89)與LDH低水平組(n=144)，比較發(fā)現(xiàn)，LDH高水平組CD56、TP53、RB-1以及復(fù)雜核型檢出率均高于LDH低水平組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表5。

表5 血清LDH水平與MM患者細(xì)胞表型及細(xì)胞遺傳學(xué)的關(guān)系分析[n(%)]

2.6外周血NLR、β2-MG以及LDH水平與MM患者預(yù)后的關(guān)系 隨訪3年，繪制生存曲線發(fā)現(xiàn)，高NLR組MM患者中位生存時(shí)間為13個(gè)月，低NLR組MM患者中位生存時(shí)間為24個(gè)月，兩組生存曲線比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Log-rankχ2=9.577，P<0.05)，見(jiàn)圖1。β2-MG高水平組MM患者中位生存時(shí)間為16個(gè)月，β2-MG低水平組MM患者中位生存時(shí)間為20個(gè)月，兩組生存曲線比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Log-rankχ2=10.156，P<0.05)，見(jiàn)圖2。LDH高水平組MM患者中位生存時(shí)間為22個(gè)月，LDH低水平組MM患者中位生存時(shí)間為21個(gè)月，兩組生存曲線比較差異有統(tǒng)計(jì)意義(Log-rankχ2=4.177，P=0.041)，見(jiàn)圖3。

圖1 不同NLR水平MM患者生存曲線

圖2 不同β2-MG水平MM患者生存曲線

圖3 不同LDH水平MM患者生存曲線

3 討 論

MM是一種生物異質(zhì)性強(qiáng)的血液系統(tǒng)惡性疾病，雖近年來(lái)，免疫調(diào)節(jié)劑、蛋白酶體抑制劑等新藥物的使用大幅度提高了MM的生存率，但MM病死率依舊較高，借助可靠的指標(biāo)有效預(yù)測(cè)MM預(yù)后，在指導(dǎo)臨床治療工作中具有重要價(jià)值。

隨著FISH、GEP等技術(shù)的不斷發(fā)展，細(xì)胞遺傳學(xué)與MM之間的關(guān)系已逐步明了，細(xì)胞遺傳學(xué)也被證實(shí)為影響MM患者預(yù)后的重要因素[10]。有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，MM患者常伴有一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞遺傳學(xué)異常，其中1q、IgH、RB-1以及TP53陽(yáng)性等被證實(shí)為高危遺傳學(xué)異常，是影響患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素[11]。但細(xì)胞遺傳學(xué)檢查對(duì)檢測(cè)條件要求高，檢測(cè)費(fèi)用高，在臨床中并不適用。血生化指標(biāo)的檢測(cè)具有取材方便、步驟簡(jiǎn)單的優(yōu)勢(shì)，是許多疾病診斷、病情及預(yù)后判斷的常用輔助手段。

本研究以外周血NLR及血清β2-MG、LDH作為研究指標(biāo)。其中NLR是反映機(jī)體免疫炎癥狀態(tài)的敏感指標(biāo)，而腫瘤的發(fā)生及發(fā)展與機(jī)體免疫調(diào)劑功效間關(guān)系密切。淋巴細(xì)胞及中性粒細(xì)胞是機(jī)體免疫系統(tǒng)中重要的組成部分[12]。有研究表明，實(shí)體腫瘤中NLR值異常上升一般預(yù)示著預(yù)后不良。孫磊[13]研究發(fā)現(xiàn)，NLR>2.61是影響MM患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。血清β2-MG是一種單鏈多肽低分子蛋白，是組織相容性抗原Ⅰ，在正常生理?xiàng)l件下，β2-MG進(jìn)入血液循環(huán)后以非蛋白結(jié)合狀態(tài)存在，經(jīng)腎小球基底膜過(guò)濾后可被腎小管重吸收，進(jìn)一步被降解，其血清水平維持穩(wěn)定。但當(dāng)機(jī)體發(fā)生惡性病變時(shí)，血清β2-MG水平將異常升高，這與惡性腫瘤異常增生，導(dǎo)致細(xì)胞被大量破壞，促進(jìn)β2-MG釋放，并且腫瘤自身也合成大量β2-MG等因素有關(guān)。張?zhí)N玉等[14]研究表明，β2-MG在預(yù)測(cè)MM患者近期療效中的靈敏度及特異度分別為89.3%與73.6%，曲線下面積為0.865，提示血清β2-MG在反映MM療效中的價(jià)值較高。LDH廣泛分布于人體心、肝、腎等多種器官，是反映細(xì)胞代謝狀態(tài)的敏感指標(biāo)，有研究表明，惡性腫瘤細(xì)胞內(nèi)基因失調(diào)將增加LDH的合成及釋放，進(jìn)而導(dǎo)致血清中LDH水平上升[15]，故LDH在反映惡性腫瘤病情及預(yù)后中也具有一定價(jià)值。

本研究發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組相比，MM組患者外周血NLR、血清β2-MG及LDH水平均異常升高，且隨著DS分期的增加，MM組患者外周血NLR、血清β2-MG以及LDH水平均隨之上升。這說(shuō)明外周血NLR、血清β2-MG以及LDH水平在反映MM患者病情中具有一定價(jià)值。根據(jù)MM組患者外周血NLR、血清β2-MG及LDH中位水平，將其依次劃分為高、低水平的各個(gè)亞組。在檢測(cè)各亞組細(xì)胞遺傳學(xué)以及免疫表型中發(fā)現(xiàn)，高NLR組患者CD56、TP53、RB-1以及復(fù)雜核型檢出率均顯著高于低NLR組(P<0.05)；β2-MG高水平組TP53、RB-1以及復(fù)雜核型檢出率顯著高于β2-MG低水平組(P<0.05)；LDH高水平組CD56、TP53、RB-1以及復(fù)雜核型檢出率均顯著高于LDH低水平組(P<0.05)；提示MM患者外周血NLR、β2-MG以及LDH水平越高，其細(xì)胞遺傳學(xué)及免疫表型異常發(fā)生率越高。受限于研究設(shè)計(jì)及條件，本研究并未對(duì)其中的原因進(jìn)行探討。此外，本研究進(jìn)行了為期3年的隨訪，繪制生存曲線發(fā)現(xiàn)，高NLR、β2-MG高水平組以及LDH高水平組生存時(shí)間均明顯短于各低水平亞組，提示外周血NLR、β2-MG以及LDH水平在預(yù)測(cè)MM患者預(yù)后中具有一定的價(jià)值。

綜上所述，MM患者外周血NLR、β2-MG以及LDH水平越高，其發(fā)生細(xì)胞遺傳學(xué)及免疫表型異常的概率越大，生存時(shí)間也越短，提示外周血NLR、β2-MG以及LDH水平在反映MM患者病情及預(yù)后中具有一定的價(jià)值。