超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定叔胺類藥品中硫酸二甲酯基因毒性雜質(zhì)

胡?！●T笑

摘要：碘海醇（Iohexol）和碘帕醇（Iopamidol）屬于第二代碘造影劑，是目前最為暢銷的造影劑，通常在進(jìn)行CT造影診斷前注入靜脈，用于血管、泌尿系統(tǒng)、脊髓及股關(guān)節(jié)、淋巴系統(tǒng)造影，具有造影密度低，毒性低，耐受性好等優(yōu)點(diǎn)，在發(fā)達(dá)國家已全面取代了離子型造影劑。根據(jù)Newport數(shù)據(jù)，2018年全球碘海醇制劑規(guī)模超過12億美元。中國醫(yī)藥工業(yè)信息中心數(shù)據(jù)顯示，2019年國內(nèi)X射線造影劑市場(chǎng)規(guī)模約為139.45億元，其中碘帕醇的市場(chǎng)規(guī)模約為15.13億元。本文對(duì)超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定叔胺類藥品中硫酸二甲酯基因毒性雜質(zhì)進(jìn)行分析，以供參考。

關(guān)鍵詞：超高效液相色譜?串聯(lián)質(zhì)譜;衍生;硫酸二甲酯

引言

超高效液相色譜-串行光譜（UPLC-MS/MS/MS）檢測(cè)分析技術(shù)具有高效分離度和超高靈敏度的優(yōu)點(diǎn)，大大提高了數(shù)據(jù)分析和測(cè)試的可靠性和耐久性，提高了目標(biāo)化合物的分析效率和準(zhǔn)確性，是分析測(cè)試領(lǐng)域的綜合分析手段。近年來，UPLC-MS/MS分析技術(shù)廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、化學(xué)工程、生物工程、保健食品、特殊材料等多個(gè)領(lǐng)域，特別是化學(xué)和醫(yī)藥產(chǎn)品的檢測(cè)和殘留分析，以UPLC-MS/MS得到了極大的提高和改進(jìn)。

1概述

磺胺類抗生素是一類具有對(duì)位氨基苯磺酰胺結(jié)構(gòu)的抗生素總稱，是一類用于預(yù)防和治療細(xì)菌感染性疾病的化學(xué)治療藥物?；前匪幨乾F(xiàn)代醫(yī)學(xué)中常用的一類抗菌藥物，具有抗菌譜廣、可以口服、吸收較迅速、較為穩(wěn)定、不易變質(zhì)等優(yōu)點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于預(yù)防和控制水產(chǎn)養(yǎng)殖過程中的各種動(dòng)物疾病，除此之外，還被認(rèn)為是一種飼料添加劑以促進(jìn)水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物生長。其作用原理是通過競(jìng)爭(zhēng)性阻抑葉酸循環(huán)過程中的對(duì)氨基苯甲酸來達(dá)到減少和殺滅細(xì)菌核蛋白的目的。此類人工合成的抗生素具有價(jià)格低、抗菌范圍廣、高效、不易分解等特點(diǎn)，但其在動(dòng)物體內(nèi)具有作用時(shí)間較長、較慢代謝速率等問題，一部分會(huì)在動(dòng)物體內(nèi)殘留，另一部分會(huì)隨排泄物以原型或代謝物的形式排出體外。過量使用磺胺類抗生素會(huì)對(duì)環(huán)境造成一定程度的污染，進(jìn)而通過食物鏈在人體內(nèi)蓄積從而對(duì)人體健康造成潛在威脅?；前奉惪股亻L期存在于人類體內(nèi)會(huì)引起急性或慢性中毒，還會(huì)影響機(jī)體的泌尿、免疫系統(tǒng)，破壞人體的造血系統(tǒng)或產(chǎn)生耐藥性等。針對(duì)動(dòng)物組織及牛奶中的磺胺類抗生素，歐盟規(guī)定其最大殘留量為100μg/kg。我國國家標(biāo)準(zhǔn)GB31650-2019制訂了在動(dòng)物性食品中磺胺二甲嘧啶的限量為25～100μg/kg，其他磺胺類抗生素殘留總和為100μg/kg。目前，對(duì)魚肉中磺胺類抗生素的檢測(cè)多為其中一種或幾種，同時(shí)對(duì)20種以上磺胺類抗生素的檢測(cè)報(bào)道較少。而且與文獻(xiàn)報(bào)道的檢測(cè)魚肉中磺胺類抗生素的液液萃取法、加速溶劑萃取法、固相萃取法等前處理技術(shù)相比，QuEChERS法具有操作簡便、無需昂貴的儀器、試驗(yàn)成本低、應(yīng)用范圍廣等優(yōu)點(diǎn)。近年來，磺胺類抗生素的檢測(cè)方法主要有高效液相色譜法（HPLC）、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（LCMS/MS）、毛細(xì)管電泳法等。其中，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法具有靈敏度高、準(zhǔn)確度好、能同時(shí)分析多種痕量物質(zhì)等優(yōu)點(diǎn)，適用于多種磺胺類抗生素的檢測(cè)。如：HOFF等基于液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)發(fā)展了一種測(cè)定牛肝中6種磺胺類抗生素的新方法;建立了超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法分析了畜禽糞便中17種磺胺類抗生素;發(fā)展了液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定牛奶中11種磺胺類抗生素的檢測(cè)新方法。

2 UPLC-MS/MS應(yīng)用于人體化學(xué)藥品的檢測(cè)

2.1 UPLC-MS/MS檢測(cè)抗菌藥物

寶佳康蒂唑是一種三唑醇廣譜抗真菌藥物，具有功效、廣譜和低毒性等特點(diǎn)。檢測(cè)人體血漿中的藥物濃度對(duì)于監(jiān)測(cè)藥物吸收情況和指導(dǎo)臨床藥物的安全性特別重要。采用高度特異性和敏感性的UPLC-MS/MS法研制了測(cè)定血漿中普拉沙唑濃度的方法。該方法為監(jiān)測(cè)praxanax的藥物濃度提供了參考值。諾氟沙星是一種非常有效的第三代抗菌藥物，對(duì)細(xì)菌具有顯著的抑制作用，是腸道痢疾等疾病的常規(guī)治療方法。但是，其副作用是顯而易見的，特別是需要推遲未成年人的骨骼形成并影響身體的正常發(fā)育，因此未成年人不得服用這種藥物。測(cè)量人類血漿中的諾氟沙星濃度很重要。使用UPLC-MS/MS測(cè)定了人體血漿中的諾氟沙星濃度。使用甲醇作為沉淀劑來預(yù)處理血漿樣本，結(jié)果表明諾氟沙星與峰面積比值呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。批中的精密度RSD小于或等于3.35%，批間的精密度RSD小于或等于5.12%。測(cè)試方法簡單方便。

2.2 UPLC-MS/MS用于檢測(cè)艾滋病毒感染

艾滋病是當(dāng)今威脅全球健康的主要疾病之一，是由艾滋病病毒感染造成的，它攻擊人類免疫系統(tǒng)中的臨界CD4T淋巴細(xì)胞。研究表明，人發(fā)中的藥物水平與抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療的有效性呈正相關(guān)。一種高效檢測(cè)頭發(fā)中四種抗艾滋病毒藥物含量的方法，采用UPLC-MS/MS法，如lopinavir、ritonavir、zidovudine和weilun法。

3實(shí)驗(yàn)部分

ABSCIEXTripleQuad6500+超高效液相色譜?三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀（AB公司;美國）;XSE205電子天平（MettlerToledo公司，瑞士）;KQ?300GDV型恒溫?cái)?shù)控超聲器（昆山市超聲儀器有限公司）;Vor?tex?6渦旋振蕩器（海門市其林貝爾儀器制造有限公司）。甲醇、丙酮（色譜純，美國賽默飛公司），甲酸（色譜純，美國ACS公司），乙酸銨（色譜純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）。

4討論

4.1氨基比林衍生劑的選擇

吡啶是硫酸二甲酯發(fā)生甲基化反應(yīng)的常用底物，是一個(gè)含有氮雜原子的六元雜環(huán)化合物，具有芳香性，而本研究發(fā)現(xiàn)的氨基比林為含有α，β不飽和酮結(jié)構(gòu)的脂肪胺，吡啶環(huán)上的N原子相比氨基比林上的N原子因電子云軌道雜化、空間位置不同而活性較低，且硫酸二甲酯與胺的反應(yīng)屬于雙分子親核取代（SN2）反應(yīng)，在SN2反應(yīng)中，氨基比林表現(xiàn)出更強(qiáng)的親核性，反應(yīng)能夠快速進(jìn)行。與吡啶相比，氨基比林與硫酸二甲酯反應(yīng)不需要高溫，較低溫度有利于硫酸二甲酯的穩(wěn)定。吡啶與硫酸二甲酯反應(yīng)后產(chǎn)物具有季銨鹽的特性，但生成的季銨鹽不利于其芳香性的保持，不夠穩(wěn)定，但是氨基比林生成的脂肪胺季銨鹽穩(wěn)定性好，因此本研究選取的氨基比林更適合作為甲基化試劑用于硫酸二甲酯的檢測(cè)。

4.2檢出限和定量限

基于空白溶液中存在本底峰，檢出限和定量限采用《中國藥典》2020年版四部通則9101中“基于響應(yīng)值標(biāo)準(zhǔn)偏差和標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率法”測(cè)定。取空白溶液連續(xù)進(jìn)樣7次。

結(jié)束語

本文建立了超高效液相色譜?串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定氨基比林等叔胺類藥品中硫酸二甲酯基因毒雜質(zhì)含量的檢測(cè)方法，該方法將氨基比林作為衍生劑，與藥品中殘留的硫酸二甲酯發(fā)生反應(yīng)生成甲基化氨基比林，通過檢測(cè)甲基化氨基比林間接測(cè)得藥品中硫酸二甲酯的含量，進(jìn)行了方法學(xué)驗(yàn)證，并將方法用于實(shí)際樣品的測(cè)定。與現(xiàn)有技術(shù)相比，該方法離子峰峰形好，無其他碎片雜峰干擾，方法靈敏度高、精密度和重復(fù)性好，結(jié)果可靠，可用于氨基比林等藥品中硫酸二甲酯基因毒雜質(zhì)的測(cè)定。本研究有助于藥品生產(chǎn)企業(yè)對(duì)生產(chǎn)工藝中基因毒雜質(zhì)的控制，同時(shí)為藥品監(jiān)管提供技術(shù)支撐。

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