黔產(chǎn)魔芋質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究 唐成林

林昶 楊菁 張雪麗 馬蕭蕭

【摘要】目的：完善黔產(chǎn)魔芋飲片的質(zhì)量研究，初步制定其飲片標(biāo)準(zhǔn)。方法：根據(jù)飲片外觀性狀、顯微鑒別及薄層鑒別法建立其定性鑒別方法，依據(jù)《中國藥典》2020年版中相關(guān)方法對其水分、總灰分、浸出物含量定量測定，以總多糖為指標(biāo)，通過系統(tǒng)的方法學(xué)考察，建立魔芋飲片的UV含量測定方法。結(jié)果：魔芋飲片性狀、顯微特征明顯，薄層色譜與對照品相同位置處顯相同顏色斑點(diǎn)。10批魔芋飲片樣品的水分、總灰分、浸出物含量的范圍分別為11.95%～13.52%、2.87%～6.77%、12.24%～16.94%，總多糖的含量為13.10%～18.30%。結(jié)論：研究建立魔芋飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，為其開發(fā)利用提供參考。

【關(guān)鍵詞】魔芋;定性鑒別;多糖;含量測定

【中圖分類號】R282【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號】1007-8517（2022）04-0037-06

Quality Standard for Amorphophallus konjac C.Koch from Guizhou

TANG Chenglin1LIN Chang2YANG Jing2ZHANG Xueli2MA Xiaoxiao2

1.Guizhou General Station of Crop Technology Extension， Guiyang 550001，China;

2.Guizhou University of Traditional Chinese Medicine， Guiyang 550025，China

Abstract：Objective To improve the quality of Amorphophallus konjac C.Koch decoction pieces produced in Guizhou and preliminarily formulate the standard of decoction pieces.Methods The qualitative identification method of decoction pieces was established based on appearance， microscopic identification and thin layer chromatography（TLC）. According to the relevant methods in Chinese Pharmacopoeia 2020 edition，water content，total ash， and extract were also determined. Using Total Polysaccharide as indicators，the content determination with Ultraviolet Spectrophotometry（UV） in Total Polysaccharide was establelished through systematic methodological investigations respectively. Results The characters and microscopic characteristics of Amorphophallus konjac C.Koch decoction pieces were obvious， Thin layer chromatography showed the same color spots in the same position as the reference. The moisture，total ash and extract of 10 Amorphophallus konjac C.Koch samples varied in theranges of 11.95%～13.52%，2.87%～6.77%，and 12.24%～16.94%，the contents of Total Polysaccharide in 10 batches of Amorphophallus konjac C.Koch were 13.10%～18.30%.Conclusion In this study， the quality standard of konjac decoction pieces was establelished to provide basic reference for its development and utilization.

Keywords：Amorphophallus Konjac C.Koch; Qualitative Identification; Polysaccharide; Content Determination

魔芋又名蒟蒻、鬼芋、蛇六谷、花傘把等[1-2]，為天南星科植物魔芋（Amorphophallus konjac C.Koch） 的新鮮或干燥塊莖。秋、冬兩季采挖，除去雜質(zhì)，洗凈，鮮用或陰干。主要功效為解毒消腫，化痰散結(jié)，化瘀，用于治療癰腫風(fēng)毒、疔瘡、瘧疾、蛇蟲咬傷、跌打損傷等[3-5]。目前在抗腫瘤方面研究較多，對胃癌、肝癌、胰腺癌、乳腺癌及惡性淋巴瘤等惡性腫瘤有一定抑制效果[6-7]。其主要成分為魔芋葡甘聚糖，含量高達(dá)50%以上，此外還含蛋白質(zhì)、少量生物堿、黃酮類、氨基酸、揮發(fā)油及微量元素等[8-9]。

魔芋作為藥用在上海、天津、浙江等地的中藥材標(biāo)準(zhǔn)上均有記錄，如楊柳等[2，10]對魔芋進(jìn)行研究時(shí)，記述其在《上海市中藥材標(biāo)準(zhǔn)》（1994年）[11]中記作“蛇六谷”，重點(diǎn)描述其性狀及功能主治，《浙江藥用植物志》（1980年）中[12]，除外觀性狀描述還有化學(xué)成分及生境等記載;《廣東省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》（2011年版）[13]也有記載，并對其水分、灰分、浸出物做出限量控制。《貴州中草藥資源研究》（2007年）[14]、《貴陽市中草藥資源》（2005年）[15]、《黔本草》（2015年）[16]中記載魔芋在貴州作為布依族、苗族等少數(shù)民族習(xí)用藥，使用廣泛，且目前在貴州畢節(jié)（七星關(guān)區(qū)、威寧縣、金沙縣）、遵義市（務(wù)川縣、桐梓縣、湄潭縣）、六盤水市、興義市、黔東南雷山縣等地[17]，均已出現(xiàn)規(guī)模化種植，其開發(fā)利用價(jià)值顯著。

現(xiàn)有的各地方標(biāo)準(zhǔn)收載內(nèi)容略有差異，大部分僅限于性狀鑒別，少數(shù)涉及理化鑒別，在成分含量控制及主要指標(biāo)成分的控制方面有所欠缺，本實(shí)驗(yàn)建立了魔芋飲片性狀、顯微及薄層鑒別;對水分、總灰分、浸出物項(xiàng)進(jìn)行初步控制，建立魔芋UV含量測定方法，為魔芋藥材的基礎(chǔ)研究、內(nèi)在成分質(zhì)量控制奠定一定基礎(chǔ)。

1儀器與材料

1.1儀器101-1AB型電熱鼓風(fēng)干燥箱（天津市泰斯特儀器有限公司）;BX53生物顯微鏡（日本01 ympus公司）;800型離心機(jī)（上海銳騰機(jī)械廠）;OSB-2200旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海愛朗儀器有限公司）;YQ-1000A超聲控制儀（上海易凈超聲波儀器有限公司）;HH-2數(shù)顯恒溫水浴鍋（常州澳華儀器有限公司）;ME204E/02型萬分之一電子天平（上海梅特勒-托利多有限公司）;AUW220D型十萬分之一分析天平（蘇州島津儀器有限公司）;UV-5900紫外可見分光光度計(jì)（上海元析儀器有限公司）。

1.2材料硅膠G薄層板（批號：20171203，青島海洋化工廠分廠）。D-無水葡萄糖對照品（批號：GZDD-0171，貴州迪大生物科技有限責(zé)任公司）。稀甘油、水合氯醛試液、乙醇、氯仿、正丁醇、冰醋酸、磷酸、濃硫酸、苯酚、對氨基苯甲酸、氫氧化鈉等均為分析純。

實(shí)驗(yàn)用10批魔芋樣品均采集自貴州不同地區(qū)，經(jīng)貴州中醫(yī)藥大學(xué)生藥實(shí)驗(yàn)室孫慶文教授鑒定為：天南星科魔芋屬多年生草本植物魔芋（Amorphophallus konjac C.Koch）的球狀塊莖，具體采集地及批號見表1。

2方法與結(jié)果

2.1性狀本品為橫切或縱切的不規(guī)則片狀，大小不一，厚1～2 mm，外皮灰黑色或灰褐色，切面灰白色或灰褐色，表面粗糙，有多數(shù)顆粒狀突起，質(zhì)脆，斷面灰白色或灰褐色，略顯顆粒狀。氣微，味辛，略麻舌，如圖1所示。

2.2顯微鑒別本品粉末類白色至淡棕色。10批魔芋藥材粉末于顯微鏡下觀察，總結(jié)如下（如圖2所示）：淀粉粒極多，單粒型呈類球形或長圓形，臍點(diǎn)呈點(diǎn)狀、星狀、裂縫狀;復(fù)粒淀粉由2～16個(gè)分粒積聚而成;草酸鈣針晶多見，散在分布或成束分布于薄壁細(xì)胞中;草酸鈣簇晶亦較多，多散在分布，導(dǎo)管多為環(huán)紋及螺紋導(dǎo)管;木栓化細(xì)胞淡棕色，表面觀呈不規(guī)則多角形;粘液細(xì)胞圓形或橢圓形。

2.3薄層鑒別取本品粉末1 g，加400 mL去離子水溶脹24 h，抽濾，濾液置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中，減壓濃縮至25 mL左右，按一定比例加Sevag試劑除蛋白[18]，震蕩20 min，離心，重復(fù)5～7次，分離出的葡甘聚糖水溶液，依次加70%、80%、95%、100%乙醇沉降，4 ℃靜置過夜，抽濾，沉淀以適量無水乙醇洗滌3次，45 ℃烘干，得到的葡甘聚糖，加去離子水3 mL溶脹，過夜，30 ℃水浴溶脹1 h，離心，取上清液2.0 mL于10mL比色管中，進(jìn)行酸水解，操作按文獻(xiàn)[18]，水解完成后，60℃減壓至溶劑完全揮發(fā)，用70%乙醇2 mL溶解，進(jìn)行離心（3000 r/min，10 min）取上清液為供試品溶液。另取葡萄糖對照品適量，精密稱定，以相同溶劑制成每1毫升含0.1 mg的對照品溶液。照薄層色譜法（通則0502）試驗(yàn)[19]，分別吸取供試品、對照品溶液各1μL，點(diǎn)樣于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-冰醋酸-水（2∶1∶1）為展開劑[20]，上行展開，取出，晾干后，均勻噴對氨基苯甲酸溶液[21]，烘箱105 ℃加熱約10 min，于紫外光燈（365nm）下檢視。結(jié)果如圖3所示。

2.4檢查

2.4.1水分按《中國藥典》2020年版通則0832第二法[22]，測定并計(jì)算10批魔芋的水分含量（%），平行操作2次，取平均值作為結(jié)果，結(jié)果：10批魔芋的水分為11.95%～13.52%，平均值12.65%，暫定水分不超過15.0%。樣品測定結(jié)果見表3。

2.4.2總灰分按《中國藥典》2020年版通則2302總灰分測定法[23]，測定并計(jì)算10批魔芋的總灰分含量（%），平行操作2次，取平均值作為結(jié)果，結(jié)果：10批魔芋的總灰分為2.87%～6.77%，平均值5.02%，暫定總灰分不超過6.1 %。樣品測定結(jié)果見表3。

2.5浸出物按《中國藥典》2020年版通則2201浸出物測定法進(jìn)行測定[24]，考察水及不同濃度乙醇（30%、50%、70%、無水乙醇）為溶劑，熱浸法和冷浸法分別測定浸出物，平行操作兩次，取平均值作為結(jié)果。溶劑及方法選擇依據(jù)見表2;結(jié)果浸出物條件考察試驗(yàn)中，以熱浸法50%乙醇為溶劑，浸出物含量相對最高，10批魔芋的浸出物為12.24%～16.94%，平均值14.93%，暫定浸出物含量不少于12.0 %。測定結(jié)果見表3。

2.6總多糖含量測定

2.6.1對照品溶液的制備取適量無水葡萄糖對照品，精密稱定，以蒸餾水為溶劑制成每1毫升含葡萄糖0.1 mg的溶液[25]，即對照品溶液。

2.6.2供試品溶液的制備取魔芋粉末約0.2 g，精密稱定，置干燥的圓底燒瓶中，按文獻(xiàn)[26]進(jìn)行操作，即為供試品溶液。

2.6.3測定波長的選擇精密量取“2.6.1”、“2.6.2”溶液各2.0 mL，置于具塞10 mL刻度試管中。采用硫酸-苯酚法顯色后[26]，以相應(yīng)試劑為空白，按紫外-可見分光光度法（通則0401）[22]，在300～600 nm波長掃描。結(jié)果如圖4所示。

2.6.4線性關(guān)系考察以0.2 mL為增加量，分別精密量取“2.6.1”項(xiàng)下溶液0.2～1.4mL，7個(gè)不同體積溶液，至具塞10 mL刻度試管中，各加水定容至2 mL。照“2.6.3”方法在490 nm的波長處測定吸光度值，分別以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制。結(jié)果如圖5所示，其標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=48.014x+0.0096，在0.0025～0.0175 mg/mL范圍內(nèi)（R2=0.9997）呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

2.6.5精密度試驗(yàn)精密量取“2.6.1”溶液1.0 mL，用蒸餾水補(bǔ)足至2 mL，照“2.6.3”的方法，測定吸光度。同法測定6次，結(jié)果見表4;RSD為0.17%，表明該臺儀器的精密度良好。

2.6.6重復(fù)性試驗(yàn)取同一批魔芋粉末約0.2 g，共6份，精密稱定，按“2.6.2”、“2.6.3”方法制備樣品測定吸光度，計(jì)算魔芋總多糖的重量 （mg），計(jì)算，即得。結(jié)果見表5。RSD<3%，該提取方法重復(fù)性符合要求。

2.6.7穩(wěn)定性試驗(yàn)按“2.6.7”項(xiàng)下方法提取供試品1份，同時(shí)制備空白試劑，于490 nm測其吸光度，每0.5小時(shí)測1次，共測6次。結(jié)果見表6。RSD為1.7%，表明此供試品溶液在考察的2.5 h內(nèi)穩(wěn)定性較好。

2.6.8加樣回收率試驗(yàn)取已測定出含量的魔芋粉末約0.1 g，按文獻(xiàn)[26]操作，計(jì)算魔芋總多糖的重量 （mg），即得。結(jié)果見表7。平均回收率為100.5%，RSD為2.5%，表明該方法準(zhǔn)確度符合分析要求。

2.6.9樣品測定10批魔芋樣品，按“2.6.2”、“2.6.4”項(xiàng)下方法制備供試品溶液并測定吸光度值，結(jié)果：10批魔芋總多糖的含量13.10%～18.30%，平均值14.82%，暫定總多糖含量不低于11.7%。結(jié)果見表8。

3討論

實(shí)驗(yàn)考察了酸不溶性灰分的含量，所得結(jié)果均小于1%，由于含量較低，3個(gè)平行樣之間離散程度較大;查閱中國藥典（2020版），同屬天南星科植物，半夏、天南星均為塊莖類藥用，千年健、石菖蒲為根莖類，酸不溶性灰分均不在考察項(xiàng)內(nèi)，魔芋的藥用部位同為塊莖，市售藥材有去皮和不去皮，且均需經(jīng)過清洗，表面泥沙大部分已經(jīng)被洗去，結(jié)合實(shí)驗(yàn)前期研究，可能該屬植物藥用部位氧化硅及泥沙含量均較少。故本次研究不納入酸灰項(xiàng)。

以乙酸乙酯-冰醋酸-水（2∶1∶1）、正丁醇-冰醋酸-水（5∶1∶1） 、正丁醇-乙酸乙酯-吡啶-水（6∶1∶5∶4）[27]，正丁醇-冰醋酸-水（2∶1∶1）[20]、正丁醇-乙酸乙酯-水（7∶2∶1）、分別進(jìn)行點(diǎn)樣展開。結(jié)果以正文中展開劑比例最宜，熒光斑點(diǎn)清晰，不拖尾，重現(xiàn)性好，故實(shí)驗(yàn)最后選用正丁醇-冰醋酸-水（2∶1∶1）的比例展開。

浸出物實(shí)驗(yàn)過程中，可能因?yàn)槟в笾卸嗵呛枯^高，且藥材性質(zhì)特殊，以水作為溶劑測定時(shí)，藥材溶脹、體積膨大，形成膠凝的塊狀，以此溶劑熱浸法、冷浸法均無法過濾。故本實(shí)驗(yàn)只測定魔芋醇溶性浸出物。經(jīng)過對冷浸法、熱浸法以及不同乙醇濃度的考察，結(jié)果可能魔芋30%醇浸出物中多糖含量較多，過濾困難;而采用熱浸法，50%乙醇為溶劑，其浸出物較容易過濾，與考察的其他醇濃度試驗(yàn)相比浸出物含量相比而言為最高，因此，采用 50%乙醇為溶劑測定魔芋醇溶性浸出物較合理。

魔芋藥材中的主要成分為葡甘聚糖。據(jù)報(bào)道[26，28-30]，魔芋的葡甘聚糖類成分具有降低血脂、預(yù)防及輔助治療糖尿病，清理腸道、改善肥胖，此外還有抗癌、降低膽固醇等功能，其含量相對較高，經(jīng)查閱文獻(xiàn)其他成分無論是含量還是藥理研究都不如多糖深入，因此建立以魔芋總多糖為指標(biāo)的含量測定方法較為合適，研究中對料液比，提取時(shí)間，提取的溫度進(jìn)行正交試驗(yàn)，結(jié)果見文獻(xiàn)[26]，結(jié)果文中方法提取率高，重現(xiàn)性好，準(zhǔn)確度高，建議可以作為參考。

魔芋為貴州少數(shù)民族習(xí)用藥材，也是貴州部分地區(qū)特色食材，無論從食用還是藥用層次都是極具開發(fā)利用價(jià)值，其現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)在質(zhì)量控制方面的參考較少。文獻(xiàn)報(bào)道的魔芋藥材質(zhì)量研究有的藥用部位并不相同，有的完整性、規(guī)范性欠缺。目前魔芋種植量大，市場卻比較混亂，沒有科學(xué)合理的規(guī)范約束行業(yè)生產(chǎn)。本研究探討了有關(guān)魔芋藥材定性、定量方面的研究，定性研究中顯微特征明顯，薄層色譜斑點(diǎn)清晰，重現(xiàn)性佳，水分、灰分、浸出物測定方法可行;定量研究建立了以多糖為指標(biāo)的含量測定。為魔芋的質(zhì)量評價(jià)提供一定的參考，對民族藥物質(zhì)基礎(chǔ)研究及開發(fā)利用等都具有重要意義。

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（收稿日期：2021-06-25編輯：陶希睿）

基金項(xiàng)目：貴州省食品藥品監(jiān)督管理局項(xiàng)目（DBYP52388）;林下中藥材研究中心項(xiàng)目（校內(nèi)，3411-4110000520377）。

作者簡介：唐成林（1991-），男，漢族，碩士，農(nóng)藝師，研究方向?yàn)橹兴幉囊?guī)范化種植技術(shù)研究及推廣。E-mail： 673370283@qq.com

通信作者：林昶（1980-），女，漢族，碩士，副教授，研究方向?yàn)橹兴?、民族藥產(chǎn)地加工、炮制工藝及機(jī)理研究。E-mail：375718640@qq.com