探討注射用阿奇霉素含量測(cè)定樣品降解的因素

錢麗 劉凱 馬元鋒

摘 要 目的：探討注射用阿奇霉素含量測(cè)定樣品降解的影響因素，提高含量檢測(cè)結(jié)果的精密度。方法：從人、機(jī)、料、法、環(huán)、測(cè)6方面分析，開展假設(shè)性試驗(yàn)探究注射用阿奇霉素含量測(cè)定樣品降解的影響因素。結(jié)果與結(jié)論：發(fā)現(xiàn)進(jìn)樣小瓶的材質(zhì)是影響注射用阿奇霉素含量測(cè)定的一個(gè)重要因素，對(duì)提高測(cè)定結(jié)果的可靠性，具有重要的指導(dǎo)意義。

關(guān)鍵詞 注射用阿奇霉素 穩(wěn)定性 影響因素 降解

中圖分類號(hào)：R927.2； R978.15 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1006-1533（2022）07-0096-03

引用本文 錢麗， 劉凱， 馬元鋒. 探討注射用阿奇霉素含量測(cè)定樣品降解的因素[J]. 上海醫(yī)藥， 2022， 43（7）： 96-98.

Discussion on the factors affecting the content determination of azithromycin for injection sample

QIAN Li， LIU Kai， MA Yuanfeng

（Yangtze River Pharmaceutical Group Co.， Ltd.， Taizhou 225300， China）

ABSTRACT Objective： To explore the factors affecting the degradation of azithromycin for injection sample and to reduce its relative standard deviation. Methods： From the aspects of human， machine， material， method， ring and measurement， an experiment was carried out to explore the factors affecting the degradation of azithromycin for injection. Results & Conclusion： According to the test results， a clear conclusion can be drawn to guide the routine determination of the azithromycin content.

KEy wORDS azithromycin for injection； stability； influencing factor； degradation

阿奇霉素臨床應(yīng)用廣泛，其含量測(cè)定方法有許多報(bào)道[1-4]，而《中華人民共和國(guó)藥典》2015版采用抗生素微生物檢定法進(jìn)行阿奇霉素的含量分析，盡管該法能真實(shí)體現(xiàn)該藥品的抗菌活性，但檢驗(yàn)周期較長(zhǎng)、操作較繁瑣[5-6]。HPLC法專屬性強(qiáng)、靈敏度高、準(zhǔn)確度和重復(fù)性好、省時(shí)方便，因而是阿奇霉素含量測(cè)定的常用方法[7]。

日常檢測(cè)過程中發(fā)現(xiàn)，阿奇霉素含量測(cè)定隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，峰面積呈下降趨勢(shì)。為了提高檢測(cè)結(jié)果的可靠性，嚴(yán)格把控藥品質(zhì)量，以保障患者用藥安全，本研究采用魚骨圖，從人、機(jī)、料、法、環(huán)、測(cè)6方面分析，開展假設(shè)性試驗(yàn)，探究阿奇霉素含量測(cè)定中對(duì)樣品降解的影響因素，以便指導(dǎo)阿奇霉素含量測(cè)定的日常工作。

1 材料和方法

1.1 儀器

Agilent1260高效液相色譜儀（美國(guó)安捷倫公司）、 XS205電子天平（梅特勒托利多公司）。

1.2 試藥

阿奇霉素對(duì)照品（批號(hào)130593-201303，含量94.4%，中國(guó)食品藥品檢定研究院）；注射用阿奇霉素（批號(hào)18082711，揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)有限公司）；阿奇霉素（批號(hào)103-180306-11，浙江國(guó)邦藥業(yè)有限公司）；乙腈（色譜純，Merck公司）；磷酸二氫銨（優(yōu)級(jí)純）、濃氨水、磷酸氫二鉀及磷酸（分析純）均購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

1.3 材料

透明玻璃小瓶（批號(hào)5182-0864、5182-9062）、聚丙烯內(nèi)襯小瓶（批號(hào)5190-2242）、安捷倫塑料小瓶（批號(hào)5182-0567）、脫活小瓶（批號(hào)5183-2071）、A-Line惰性小瓶（批號(hào)5190-9589）均購(gòu)自安捷倫公司；塑料小瓶（批號(hào)330209，OmniGene公司）；透明塑料小瓶（批號(hào)GL0410，GL公司）；磨砂塑料小瓶（批號(hào) C4000-11，Thermo Fisher公司）。

1.4 方法

1.4.1 色譜條件

采用Waters XBridge C18色譜柱（4.6 mm×150 mm，5 mm），以磷酸鹽緩沖溶液（取0.05 mol/L磷酸氫二鉀溶液，用20%磷酸溶液調(diào)節(jié)pH至8.2）-乙腈（45∶55）為流動(dòng)相，稀釋劑：磷酸二氫銨溶液（稱取磷酸二氫銨1.73 g，加水溶解并稀釋至1 000 mL，用濃氨水調(diào)節(jié)pH至10.0±0.05）-甲醇-乙腈（7∶7∶6），檢測(cè)波長(zhǎng)210 nm，柱溫40 ℃，流速1.0 mL/min，進(jìn)樣量50 mL進(jìn)行HPLC測(cè)定，借助外標(biāo)面積法對(duì)阿奇霉素的含量進(jìn)行計(jì)算。

1.4.2 溶液

1）對(duì)照品溶液 精密稱定阿奇霉素對(duì)照品25 mg，置25 mL量瓶中，加稀釋劑稀釋至刻度，搖勻，制成每1 mL約含阿奇霉素1 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2）供試品溶液 取注射用阿奇霉素（0.5 g）約210 mg，精密稱定，置100 mL量瓶中，加水2 mL（50 mg阿奇霉素加水1 mL）溶解后，加稀釋劑稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液（質(zhì)量濃度1 mg/mL）。

2 結(jié)果

阿奇霉素樣品溶液含量測(cè)定相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差值偏高，查看阿奇霉素含量測(cè)定樣品溶液圖譜，發(fā)現(xiàn)在主峰相對(duì)保留時(shí)間（RRT）約1.4 min處有降解峰（圖1），故含量測(cè)定相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差值偏高的原因?yàn)闃悠方到狻?/p>

針對(duì)阿奇霉素樣品溶液容易發(fā)生降解這個(gè)問題，從人、機(jī)、料、法、環(huán)、測(cè)6方面分析，找出可能影響阿奇霉素降解的因素（圖2）。

通過上述分析結(jié)果，最終找到9條末端因素，其中人、機(jī)、法未發(fā)現(xiàn)問題，故著重對(duì)料、環(huán)、測(cè)進(jìn)行分析，最終確認(rèn)要因。

2.1 試劑影響

目前我們使用的乙腈是色譜級(jí)別，分別采用Fisher或Merck公司的乙腈配制稀釋劑，且將稀釋劑pH分別調(diào)節(jié)為9.4、9.6、9.8、10.0、10.2開展實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明，不同廠家的乙腈、不同pH稀釋劑配制的供試品溶液穩(wěn)定性良好，其導(dǎo)致樣品降解的因素可排除。

2.2 色譜柱影響

色譜柱使用前沖洗程序：①100%甲醇溶液沖洗20 min；②10%甲醇溶液沖洗30 min；③流動(dòng)相沖洗30～60 min。色譜柱使用后沖洗程序：①10%甲醇溶液沖洗90 min；②100%甲醇溶液沖洗120 min。

按標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程沖洗色譜柱后進(jìn)樣空白溶液測(cè)定，均未發(fā)現(xiàn)有殘留物存在（圖3），故排除色譜柱污染導(dǎo)致樣品降解。

2.3 進(jìn)樣盤溫度影響

在日常檢測(cè)過程中，進(jìn)樣盤溫度在未控溫條件下發(fā)現(xiàn)樣品降解，故考察進(jìn)樣盤于控溫5 ℃條件下樣品溶液的穩(wěn)定性，并用全新的安捷倫棕色玻璃進(jìn)樣小瓶進(jìn)樣。結(jié)果表明，對(duì)照品、原料及制劑的峰面積均呈下降趨勢(shì)，同樣存在降解，故排除未控制進(jìn)樣盤溫度而導(dǎo)致樣品降解（表1）。

2.4 進(jìn)樣小瓶材質(zhì)影響

在室溫條件下考察阿奇霉素供試品溶液在不同進(jìn)樣小瓶中存放不同時(shí)間對(duì)含量測(cè)定的影響。樣品液在全新的透明玻璃進(jìn)樣小瓶較棕色的玻璃進(jìn)樣小瓶降解速度略快，樣品液的穩(wěn)定性在經(jīng)清洗的透明舊玻璃小瓶中較新玻璃小瓶好，說明阿奇霉素含量測(cè)定溶液在硼硅玻璃中確實(shí)不穩(wěn)定，容易降解（圖4）。

進(jìn)而采用多種進(jìn)樣小瓶考察溶液的穩(wěn)定性。綜合對(duì)比表明，阿奇霉素溶液在安捷倫脫活小瓶中穩(wěn)定性很差，在安捷倫A-Line惰性玻璃進(jìn)樣小瓶中穩(wěn)定性較差，而在塑料小瓶中的穩(wěn)定性較好（圖5），但其含量測(cè)定結(jié)果均呈下降趨勢(shì)。為降低今后樣品檢測(cè)時(shí)出現(xiàn)的異常風(fēng)險(xiǎn)，盡量不使用玻璃小瓶，故在操作規(guī)程中須規(guī)定使用安捷倫塑料小瓶進(jìn)樣。

通過對(duì)上述9條末端因素的分析，表明進(jìn)樣小瓶材質(zhì)對(duì)阿奇霉素溶液的穩(wěn)定性有影響，其在硼硅玻璃小瓶中不穩(wěn)定，容易降解，應(yīng)當(dāng)選用安捷倫塑料小瓶。

3 討論

本研究發(fā)現(xiàn)阿奇霉素溶液在玻璃進(jìn)樣小瓶中穩(wěn)定性差，而在塑料進(jìn)樣小瓶中穩(wěn)定性較好，推測(cè)阿奇霉素降解與進(jìn)樣小瓶玻璃材質(zhì)有關(guān)。在中國(guó)藥典中規(guī)定進(jìn)樣小瓶材質(zhì)為塑料小瓶，在此條件下的后續(xù)含量檢測(cè)均符合規(guī)定，且阿奇霉素含量測(cè)定相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差值降低。但此次研究未發(fā)現(xiàn)玻璃進(jìn)樣小瓶導(dǎo)致阿奇霉素樣品降解的真實(shí)原因，后續(xù)將對(duì)此進(jìn)行深入研究。

參考文獻(xiàn)

[1] 王立， 王靜. HPLC測(cè)定阿奇霉素干混懸劑的含量[J]. 航空航天醫(yī)學(xué)雜志， 2010， 21（12）： 2284-2285.

[2] 潘強(qiáng). HPLC法測(cè)定阿奇霉素片的含量[J]. 中國(guó)藥品標(biāo)準(zhǔn)， 2009， 10（4）： 301-303.

[3] 劉珂， 張亞杰. HPLC法測(cè)定阿奇霉素及阿奇霉素膠囊的含量[J]. 中國(guó)藥師， 2010， 13（1）： 81-82.

[4] 韓振爽， 李瑋瑋. 高效液相色譜法測(cè)定阿奇霉素片中阿奇霉素含量[J]. 天津藥學(xué)， 2013， 25（1）： 15-16.

[5] 國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局. 國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)[S]. 第三十七冊(cè). WS1- （X-135） -2003Z.

[6] 李妍， 孫淑娟， 蘇樂群， 等. 微生物法測(cè)定阿奇霉素人體血清濃度的影響因素考察[J]. 藥學(xué)服務(wù)與研究， 2006， 6（4）： 298-300.

[7] 國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局藥品認(rèn)證管理中心. 藥品GMP指南： 質(zhì)量控制實(shí)驗(yàn)室與物料系統(tǒng)[M]. 北京： 中國(guó)醫(yī)藥科技出版社， 2011： 129-143.