不同溫度和培養(yǎng)基對(duì)秀珍菇木霉共培養(yǎng)的影響

蘭清秀，柯斌榕，盧政輝 ，馬 璐，黃晨陽(yáng)，廖劍華

（1. 福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所， 福建 福州 350013；2. 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)資源與農(nóng)業(yè)區(qū)劃研究所，北京 100081；3. 特色食用菌繁育與栽培國(guó)家地方聯(lián)合工程研究中心， 福建 福州 350014）

0 引言

【研究意義】秀珍菇學(xué)名肺形側(cè)耳[Pleurotus pulmonarius（Fr.）Quél.]，因朵型 小巧，又名袖珍菇，是中溫型結(jié)實(shí)食用菌[1]。秀珍菇不僅營(yíng)養(yǎng)豐富，富含人體必需氨基酸、蛋白質(zhì)等，風(fēng)味獨(dú)特[2?6]，還具有抗氧化、抗腫瘤、降血壓、降血糖和提高免疫力等功能[7?10]。與平菇（糙皮側(cè)耳）相比，因采收時(shí)成熟度小，質(zhì)地更為鮮嫩，口感更為滑嫩，深受消費(fèi)者喜愛(ài)。木霉是秀珍菇栽培上的重要競(jìng)爭(zhēng)性雜菌，其主要與秀珍菇菌絲競(jìng)爭(zhēng)營(yíng)養(yǎng)，由于木霉生長(zhǎng)快，繁殖能力強(qiáng)，繁殖系數(shù)高，一旦出現(xiàn)，極易爆發(fā)，嚴(yán)重時(shí)導(dǎo)致大量菌包廢棄，造成較大經(jīng)濟(jì)損失[11?12]。研究秀珍菇不同菌株適宜生長(zhǎng)條件，闡明秀珍菇與木霉共培養(yǎng)特性，對(duì)秀珍菇栽培菌種的選擇及溫度管理具有重要指導(dǎo)意義。【前人研究進(jìn)展】秀珍菇自1998 年由我國(guó)臺(tái)灣地區(qū)引入大陸，并在福建羅源試種150 萬(wàn)袋獲得成功后，在福建、浙江、河南、山東、安徽、江蘇等地開(kāi)始大面積栽培[13?16]。秀珍菇栽培地區(qū)和面積的增加也逐漸提高了產(chǎn)量，2019 年全國(guó)秀珍菇產(chǎn)量超過(guò)30 萬(wàn)t，較上一年增長(zhǎng)20.27%[17]。目前我國(guó)雖然已認(rèn)定了多個(gè)秀珍菇品種，但許多栽培者偏好于 “臺(tái)秀”57 菌株[18?19]。溫度是食用菌正常生長(zhǎng)的必要條件，主要影響食用菌菌絲的生長(zhǎng)速度，以及子實(shí)體的分化數(shù)量和質(zhì)量[20]。培養(yǎng)基質(zhì)為食用菌的生長(zhǎng)提供必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，培養(yǎng)基質(zhì)是否適宜決定了菌株菌絲和子實(shí)體的質(zhì)量。秀珍菇常用PDA 培養(yǎng)基培養(yǎng)，菌絲生長(zhǎng)良好[21]。馮志勇等研究發(fā)現(xiàn)，秀珍菇菌絲生長(zhǎng)的最適碳源、氮源組合是酵母粉和可溶性淀粉，菌絲粗壯，生長(zhǎng)速度快[22]?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】采用傳統(tǒng)方式栽培，秀珍菇菌性變化明顯，在生產(chǎn)上易引起菌棒滿菌后退菌、開(kāi)袋出菇少，甚至不出菇、易感染霉菌等現(xiàn)象，導(dǎo)致秀珍菇栽培的不穩(wěn)定性，使生產(chǎn)者遭受經(jīng)濟(jì)損失。2015-2018 年全國(guó)秀珍菇產(chǎn)值曾一度下降[23]。據(jù)栽培者經(jīng)驗(yàn)判斷，產(chǎn)生這些問(wèn)題的主要原因可能是菌種退化，導(dǎo)致秀珍菇菌種退化以及秀珍菇菌絲易受木霉病菌侵染的原因有待深入研究。【擬解決的關(guān)鍵問(wèn)題】旨從溫度和培養(yǎng)基質(zhì)方面著手，觀察秀珍菇菌絲在不同培養(yǎng)基和溫度條件下，菌絲形態(tài)和生長(zhǎng)情況。篩選出秀珍菇菌絲生長(zhǎng)的適宜溫度和培養(yǎng)基條件；探尋秀珍菇與木霉菌絲適宜生長(zhǎng)的 溫度差異，為秀珍菇科學(xué)栽培提供理論支撐。

1 材料與方法

1 .1 試驗(yàn)材料

1.1.1 供試菌株 X98ly-13、Y710-14、Xd-13 菌株保存于福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所，X903-1 與X86-1 是多孢分離獲得的新材料，親本分別為X903與X86。木霉菌株（T001）分離自秀珍菇菌包，并經(jīng)形 態(tài)學(xué)鑒定為哈茨木霉（Trichoderma harzianum）。

1.1.2 培養(yǎng)基配方 馬鈴薯瓊脂葡萄糖培養(yǎng)基（PDA）：馬鈴薯（200 g）、瓊脂粉（20 g）、葡萄糖（20 g）、水（1 000 mL）。馬鈴薯瓊脂葡萄糖+淀粉培養(yǎng)基（PDSA）：馬鈴薯（200 g）、瓊脂粉（20 g）、葡萄糖（20 g）、可溶性淀粉（5 g）、水（1 000 mL）。 馬鈴薯瓊脂葡萄糖+酵母培養(yǎng)基（PDYA）：馬鈴薯（200 g）、瓊脂粉（20 g）、葡萄糖（20 g）、酵母粉（5 g）、水（1 000 mL）。馬鈴薯瓊脂葡萄糖+淀粉+酵母培養(yǎng)基（PDSYA）：馬鈴薯（200 g）、瓊脂粉（20 g）、葡萄糖（20 g）、酵 母粉（2.5 g）、可溶性淀粉（2.5 g）、水（1 000 mL）。

1 .2 試驗(yàn)方法

1.2.1 不同溫度對(duì)秀珍菇和木霉菌絲生長(zhǎng)的影響 將秀珍菇和木霉菌絲塊接種在PDA 培養(yǎng)基質(zhì)中，分別放在不同溫度條件（25、28、30、32、34、36 ℃）的培養(yǎng)箱中，記錄萌發(fā)時(shí)間，平板菌絲生長(zhǎng)速度以平 板中菌落半徑日增長(zhǎng)量計(jì)算。

1.2.2 PDA 與半合成培養(yǎng)基對(duì)秀珍菇菌絲生長(zhǎng)的影響

將秀珍菇菌株分別接種在PDA、PDSA、PDYA和PDSYA 培養(yǎng)基，記錄萌發(fā)時(shí)間，菌絲生長(zhǎng)速度以平 板中菌落半徑日增長(zhǎng)直徑計(jì)算。

1.2.3 秀珍菇與木霉共培養(yǎng)

將秀珍菇和木霉菌塊分別接在距培養(yǎng)皿邊緣2 cm 的兩端 ，每個(gè)處理重復(fù)3 次，標(biāo)上菌株號(hào)，在不同溫度的恒溫箱中培養(yǎng)，定期 觀察。

1.3 數(shù)據(jù)分析

通過(guò)Excel 2007 和DPS 7.05，對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行記錄和差 異顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 溫度對(duì)秀珍菇菌絲生長(zhǎng)及與木霉共培養(yǎng)的影響

秀珍菇菌株在不同溫度條件下的生長(zhǎng)速度情況見(jiàn)表1。5 個(gè)菌株在25、28、30 ℃萌發(fā)時(shí)間均為24 h。當(dāng)溫度超過(guò)30 ℃，隨著溫度逐漸升高，萌發(fā)時(shí)間逐漸加長(zhǎng)。34 ℃ 5 個(gè)菌株的萌發(fā)時(shí)間均為72 h 以上。X98ly-13、Xd-13、903-1、86-1 等4 個(gè) 菌 株 在25、28、30 ℃菌絲生長(zhǎng)速度無(wú)顯著性差異，但與30 和32 ℃有極顯著差異。Y710-14菌株菌絲生長(zhǎng)最快的溫度為30 ℃，與其他4 個(gè)溫度有極顯著差異。從滿皿時(shí)間來(lái)看，菌絲最快滿皿的菌株為Xd-13，在25、28 ℃，均為5 d。Y710-14、Xd-13 菌絲在30 ℃，均為5.33 d。86-1 菌株菌絲生長(zhǎng)最慢，在32、34 ℃，滿皿時(shí)間均超過(guò)20 d。36 ℃時(shí)，秀珍菇菌絲長(zhǎng)期處于萌發(fā)狀態(tài)，生長(zhǎng)非常緩慢。

表 1 溫度對(duì)秀珍菇菌絲生長(zhǎng)速度的影響Table 1 Effects of temperature on mycelial growth of P.pulmonarius

試驗(yàn)結(jié)果表明，木霉在不同溫度下菌絲的生長(zhǎng)速度有差異（表2）。6 種溫度條件，25～32 ℃，木霉菌絲生長(zhǎng)勢(shì)旺盛，其中28 ℃木霉菌絲生長(zhǎng)最快，約2 d 長(zhǎng)滿90 mm 培養(yǎng)皿，隨著溫度升高，菌絲生長(zhǎng)速度變慢，34 ℃，木霉菌絲生長(zhǎng)速度明顯減弱，約3 d 長(zhǎng)滿90 mm 培養(yǎng)皿。36 ℃，木霉菌絲生長(zhǎng)非常緩慢，菌絲泛黃，生長(zhǎng)勢(shì)最弱。同時(shí)測(cè)定了Xd-13 菌絲、木霉菌絲在不同溫度下的生長(zhǎng)情況及秀珍菇菌絲與木霉菌絲的共培養(yǎng)情況（圖1）。結(jié)果表明，在相同條件下，木霉菌絲的生長(zhǎng)速度與秀珍菇菌絲的生長(zhǎng)速度有極顯著差異，秀珍菇菌絲的生長(zhǎng)速度明顯慢于木霉菌絲，且秀珍菇菌絲對(duì)木霉菌絲無(wú)拮抗現(xiàn) 象，秀珍菇菌絲很快被完全覆蓋，失去競(jìng)爭(zhēng)力。

圖1 秀珍菇（XD-13）木霉（T001）菌絲在不同溫度條件下生長(zhǎng)及共培養(yǎng)情況Fig. 1 Mycelial growth of P. pulmonarius (XD-13) and T.harzianum (T001) in cocultivation at different temperatures注：①A：秀珍菇菌絲；B：木霉菌絲；C：秀珍菇和木霉菌絲共培養(yǎng)；②圖中平皿從左到右處理溫度依次為25、28、32 ℃（上排），34、36 ℃（下排）。Note: ① A: mycelia of P. pulmonarius; B: mycelia of T. harzianum; C:mycelia of P. pulmonarius and T. harzianum. ② Plate temperatures from left to right at 25 ℃, 28 ℃, and 32 ℃ on upper row; 34 ℃ and 36 ℃ on bottom row.

表 2 木霉在不同溫度條件下菌絲生長(zhǎng)情況Table 2 Mycelial growth of T. harzianum at different temperatures

2.2 培養(yǎng)基對(duì)秀珍菇菌絲生長(zhǎng)的影響

溫度為25 ℃時(shí)，5 個(gè)秀珍菇菌株在四種培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)速度均無(wú)顯著性差異，萌發(fā)時(shí)間均為24 h，生長(zhǎng)情況見(jiàn)圖2。X98ly-13 菌株在PDYA 培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)速度稍快于PDSYA 培養(yǎng)基，在PDSA 培養(yǎng)基中菌絲生長(zhǎng)速度最慢。添加淀粉或酵母粉的培養(yǎng)基均可促進(jìn)Y710-14、Xd-13 和903-1 菌株菌絲的生長(zhǎng)，其中PDYA 培養(yǎng)基對(duì)Y710-14 菌絲日生長(zhǎng)速度最快，PDSA 培養(yǎng)基對(duì)Xd-13 菌絲生長(zhǎng)促進(jìn)作用最明顯，PDSYA 培養(yǎng)基對(duì)903-1 菌株菌絲的促進(jìn)作用最大。5 個(gè)秀珍菇菌株在PDYA 培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)勢(shì)最強(qiáng)，其次為PDSYA 培養(yǎng)基，PDSA 和PDA 培養(yǎng)基中的菌絲生長(zhǎng)勢(shì)正常。加淀粉時(shí)秀珍菇菌絲普遍比正常菌絲更白，呈現(xiàn)乳白色。

25 ℃條件下，秀珍菇不同菌株在4 種培養(yǎng)基中菌絲的生長(zhǎng)速度情況如表3 所示，Xd-13 菌絲生長(zhǎng)速度均最快；86-1 菌株生長(zhǎng)速度最慢，與其他4 個(gè)菌株的菌絲生長(zhǎng)速度有極顯著差異。PDSA 培養(yǎng)基條件下，Y710-14 菌株菌絲生長(zhǎng)速度與Xd-13 和X98ly-13 無(wú)顯著性差異，與903-1 菌株有極顯著差異。PDA 和PDSYA 培養(yǎng)基條件下，X98ly-13 菌株菌絲的生長(zhǎng)速度稍快于Y710-14 菌株，PDSA 和PDYA 培養(yǎng)基條件下，X98ly-13 菌株菌絲的生長(zhǎng)速度稍慢于Y 710-14 菌株，但它們之間均無(wú)顯著性差異。

表3 秀珍菇不同菌株在4 種培養(yǎng)基中的菌絲生長(zhǎng)情況分析Table 3 Mycelial growth of 5 strains of P. pulmonarius on 4 different culture media

3 討論與結(jié)論

不同溫度對(duì)5 種秀珍菇菌株的菌絲生長(zhǎng)均有不同程度的影響，同一溫度條件，不同菌株生長(zhǎng)速度有差異。其中4 個(gè)菌株菌絲適宜生長(zhǎng)溫度范圍均為25～30 ℃，在此溫度范圍菌絲生長(zhǎng)速度無(wú)顯著性差異，但與32 ℃和34 ℃條件有極顯著差異，最適生長(zhǎng)溫度為25 ℃，這與王再明等的研究結(jié)果一致[19,20]，Y710-14 菌株菌絲最適生長(zhǎng)溫度為30 ℃。試驗(yàn)結(jié)果表明，5 個(gè)菌株在32 ℃，菌絲生長(zhǎng)速度變慢，34 ℃秀珍菇菌絲生長(zhǎng)非常緩慢。可見(jiàn)，秀珍菇菌株菌絲正常生長(zhǎng)的臨界溫度介于32～34 ℃。這為秀珍菇生產(chǎn)上菌包包心溫度的控制提供重要參考。Y710-14 菌株菌絲最適生長(zhǎng)溫度較高，推斷其應(yīng)為中溫偏高型菌株。秀珍菇常規(guī)栽培的品種為中溫型菌株，為適應(yīng)夏季規(guī)模化生產(chǎn)，雷瀟等篩選了適宜湖南夏季設(shè)施化栽培的秀珍菇優(yōu)良菌株26 和秀58 高溫品種[24]?？梢?jiàn)，不同秀珍菇菌株菌絲生長(zhǎng)對(duì)溫度要求有差異，溫度是影響秀珍菇菌絲生長(zhǎng)的重要因子，在生產(chǎn)上應(yīng)根據(jù)地區(qū)氣候條件和種植模式情況，選擇適宜的秀珍菇菌株。秀珍菇菌絲生長(zhǎng)速度的快慢除了與溫度有關(guān)，可能還與菌株自身特性有關(guān)系，菌株菌絲生長(zhǎng)速度快慢是否影響栽培出菇的產(chǎn)量與品質(zhì)，有待更進(jìn)一步探究。

吳小平等曾通過(guò)PDA 平板篩選，發(fā)現(xiàn)香菇（Lentinula edodes）、鮑魚(yú)菇（Pleurotus cystidiosus）和杏鮑菇（Pleurotus cryngi）等食用菌菌絲對(duì)木霉都沒(méi)有抗性，但發(fā)現(xiàn)秀珍菇部分菌株對(duì)木霉有抗性[25]。本試驗(yàn)結(jié)果表明秀珍菇（XD-13）菌絲對(duì)木霉（T001）無(wú)拮抗作用。由此推斷，在生產(chǎn)中遇上高溫高濕天氣，菇房、菌包中潛在的木霉病菌大量快速繁殖，當(dāng)菌包溫度介于32～34 ℃，秀珍菇菌絲與木霉菌絲之間的生長(zhǎng)勢(shì)相差更大，秀珍菇菌絲很快就失去競(jìng)爭(zhēng)力，于是出現(xiàn)“綠包”現(xiàn)象，造成經(jīng)濟(jì)損失。要想避免秀珍菇生產(chǎn)過(guò)程中“綠包”現(xiàn)象的發(fā)生，首先菌包滅菌要徹底，保持菇房環(huán)境整潔衛(wèi)生，其次可篩選出對(duì)木霉有抗性的秀珍菇新品種。

半合成培養(yǎng)基培養(yǎng)試驗(yàn)表明，秀珍菇同一菌株在3 種添加淀粉或酵母粉的不同培養(yǎng)基上生長(zhǎng)速度與對(duì)照PDA 培養(yǎng)基無(wú)顯著性差異。但添加酵母粉及酵母粉與淀粉組合的培養(yǎng)基，菌絲的生長(zhǎng)勢(shì)明顯增強(qiáng)，菌絲更濃密，這與馮志勇等的研究結(jié)果一致[22]，且添加淀粉培養(yǎng)基的菌絲普遍比正常菌絲白，呈現(xiàn)乳白色。有關(guān)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的添加濃度，經(jīng)添加營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)培養(yǎng)的秀珍菇菌株活力是否更強(qiáng)，保藏時(shí)間是否更長(zhǎng)，在栽培出菇階段產(chǎn)量和品質(zhì)表現(xiàn)等，有待深入研究。