YAP 在特發(fā)性膜性腎病中的表達(dá)及其對C5b-9 誘導(dǎo)足細(xì)胞損傷的作用

史添立羅 貞*焦 石

(1.?？谑腥嗣襻t(yī)院腎內(nèi)科,海口 570208; 2.中山市博愛醫(yī)院腎病風(fēng)濕科,廣東 中山 510603)

膜性腎病(membranous nephropathy,MN)是導(dǎo)致原發(fā)性腎病綜合征的重要病因,嚴(yán)重威脅患者的生命健康[1]。 其中約25%～30%的MN 患者與潛在的疾病相關(guān),如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、惡性腫瘤及各種病毒或細(xì)菌引起的感染性疾病等,而當(dāng)繼發(fā)性原因不明顯時則歸為特發(fā)性膜性腎病(idiopathic membranous nephropathy,IMN),后者約占70%[2-3]。盡管近年來針對IMN 的特異性分子標(biāo)記物的研究取得了一定的進(jìn)展,但其具體病因及發(fā)病機(jī)制仍未闡明,極大影響了IMN 的治療及預(yù)后。

既往研究證實(shí)IMN 是一種原位免疫復(fù)合物或循環(huán)免疫復(fù)合物沉積于腎小球上皮細(xì)胞下,并引起補(bǔ)體的異常激活,形成補(bǔ)體膜攻擊復(fù)合物C5b-9,進(jìn)而損傷足細(xì)胞的正常結(jié)構(gòu)及功能的相關(guān)疾病[4-5]。其中亞溶解劑量的C5b-9 介導(dǎo)的足細(xì)胞損傷在IMN中得到廣泛認(rèn)可,該假說認(rèn)為亞溶解劑量的C5b-9對足細(xì)胞所產(chǎn)生的損傷并非完全溶解效應(yīng),但能夠激活足細(xì)胞中多種信號通路,進(jìn)而產(chǎn)生大量炎癥因子、活性氧(reactive oxygen species,ROS)及蛋白分子,導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)變(即表型轉(zhuǎn)化),細(xì)胞骨架紊亂乃至凋亡等,最終損傷腎小球的濾過屏障,產(chǎn)生大量蛋白尿等腎損傷現(xiàn)象[6]。 轉(zhuǎn)錄共激活因子Yes 相關(guān)蛋白(yes-associated protein,YAP)是經(jīng)典的Hippo 信號通路的重要效應(yīng)因子之一,其在調(diào)控細(xì)胞增殖、生長、分化和死亡等多個環(huán)節(jié)均具有重要地位[7-8]。 近年來,隨著對YAP/Hippo 通路在腎發(fā)育過程中作用的認(rèn)識,人們發(fā)現(xiàn)YAP 信號的異常表達(dá)也參與調(diào)控了多種腎疾病的發(fā)生進(jìn)展[8]。然而在IMN 中,YAP 在腎組織中的表達(dá)及相關(guān)作用尚鮮有報道。 本研究欲通過探究YAP 的IMN 患者中的表達(dá),并建立C5b-9 損傷腎小球足細(xì)胞的體外模型,進(jìn)而闡明其相關(guān)作用,以期進(jìn)一步揭示IMN的發(fā)病機(jī)制。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 細(xì)胞

人腎小球足細(xì)胞MPC5 細(xì)胞系購自中國科學(xué)院上海細(xì)胞庫。

1.1.2 臨床標(biāo)本來源

選取2018 年2 月至2020 年2 月于?？谑腥嗣襻t(yī)院腎內(nèi)科確診的IMN 患者121 例(IMN 組),所有患者腎活檢均證實(shí)為IMN,其中男性62 例,女性59例,平均年齡(47.1±3.9)歲。 另取年齡、性別相匹配的同時期于我院泌尿科行腎腫瘤切除術(shù)的癌旁正常對照腎組織91 例(Normal 組)。 納入標(biāo)準(zhǔn):(1)所有受試者年齡≥18 歲;(2)IMN 符合Ehrenreich-Churg 診斷標(biāo)準(zhǔn)[9],且排除經(jīng)臨床資料核查及實(shí)驗(yàn)室檢查發(fā)現(xiàn)的繼發(fā)性IMN 患者;(3)受試者入院前3 個月未使用任何免疫抑制劑、細(xì)胞毒性藥物或糖皮質(zhì)激素等;(4)臨床資料完整,且患者或家屬簽署知情同意書。 本研究符合倫理學(xué)相關(guān)要求,且經(jīng)?？谑腥嗣襻t(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)(2018AKB206-01)。

1.2 主要試劑與儀器

DMEM/HG 培養(yǎng)基,0.25%胰酶(美國Hyclone公司,批號:AD13203319、AD15802247);胎牛血清(美國Gibco 公司,批號:11416-791);TRIzol、反轉(zhuǎn)錄試劑盒、 轉(zhuǎn)染試劑Lipofectamine 2000 (美國Invitrogen 公司,批號:4339218、426019、711035);SYBR Premix Ex Taq(日本TaKaRa 公司,批號:T108241R73661);CCK-8 試劑盒,Annexin V-FITC細(xì)胞凋亡試劑盒、BCA 蛋白定量試劑盒、RIPA 蛋白裂解液、蛋白酶抑制劑(江蘇碧云天生物科技公司,批 號: C191029、 C200914、 C190518、 ST170514、ST190211);DCFH-DA 試劑盒(美國Sigma 公司,批號:EZ1911D0032);沉默YAP 的siRNA(si-YAP)及陰性對照序列si-NC(廣州銳博生物技術(shù)有限公司,批號:201029BZ);補(bǔ)體來自8 名健康體檢者新鮮血清(normal human serum,NHS);人補(bǔ)體C5b-6 復(fù)合物(美國Merck 公司,批號:M1129);大鼠抗YAP、p-YAP、β-actin 抗體(美國Cell Signaling 公司,批號:191128、200711、20120706);大鼠抗Nephrin、WT1、ZO-1 ( 美 國 Cayman 公 司, 批 號: C1908A04、C2004A16、C1811A26);兔抗Snail、Fibronectin(美國Abcam 公司,批號:ab924417、ab101732);兔抗大鼠或山羊抗兔二抗(上海愛必信生物科技有限公司,批號:A190211、A191122);qRT-PCR 引物由上海生工合成。 凝膠成像系統(tǒng),凝膠電泳儀,PCR 及qRTPCR 儀(美國Bio-Rad 公司,型號:005、X10-7、T10-9、IQ5);流式細(xì)胞儀FACS-Calibur(美國BD 公司,型號:FACSC-Ⅱ);倒置熒光顯微鏡(日本Olympic公司,型號:熒光CKX-19)。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 免疫組織化學(xué)染色(immunohistochemeistry,IHC)

將固定于4%甲醛溶液的腎組織樣本進(jìn)行常規(guī)石蠟包埋,切片機(jī)進(jìn)行連續(xù)切片后,二甲苯脫蠟,梯度乙醇脫水,3%的過氧化氫消除內(nèi)源性過氧化物酶,高壓檸檬酸鈉進(jìn)行抗原恢復(fù),5%的牛血清白蛋白封閉抗體后,加入稀釋后的YAP 抗體(1 ∶800),4℃孵育過夜,加入二抗(1 ∶1000)室溫孵育1 h,DAB 顯色,蘇木素復(fù)染,中性樹脂封片后,顯微鏡下觀察拍照。

1.3.2 細(xì)胞的培養(yǎng),轉(zhuǎn)染和分組處理

MPC5 在含10%胎牛血清和1%青鏈霉素混合液的DMEM/HG 培養(yǎng)基中,并置于37℃,5% CO2的培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。 取處于對數(shù)生長期的足細(xì)胞,0.25%的胰酶常規(guī)消化后,按5×104個/孔接種于6 孔板中,當(dāng)細(xì)胞生長融合至70%時,參考Lipofectamin 2000 轉(zhuǎn)染試劑說明書方法將Opti-MEN 稀釋后的轉(zhuǎn)染試劑及si-YAP 或si-NC 按1 ∶1 比例加入足細(xì)胞中進(jìn)行轉(zhuǎn)染,6 h 后更換為新鮮培養(yǎng),繼續(xù)培養(yǎng)48 h 后應(yīng)用qRT-PCR 及Western blot 實(shí)驗(yàn)檢測轉(zhuǎn)染效率驗(yàn)。參考文獻(xiàn)[10]方法,使用亞溶解劑量的C5b-9 與NHS進(jìn)行處理MPC5 細(xì)胞,并將細(xì)胞分為4 組,正常培養(yǎng)的MPC5 細(xì)胞(control 組),0.4 μg/mL 的C5b-9 與NHS 處理的MPC5 細(xì)胞(C5b-9 組)和0.4 μg/mL 的C5b-9 與NHS 處理的si-NC 細(xì)胞(C5b-9+si-NC 組)和0.4 μg/mL 的C5b-9 與NHS 處理的si-YAP 細(xì)胞(C5b-9+si-YAP 組)。 各組細(xì)胞均置于上述條件的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h 后進(jìn)行后續(xù)相關(guān)實(shí)驗(yàn)。

1.3.3 實(shí)時熒光定量PCR(qRT-PCR)

取各組待測足細(xì)胞,TRIzol 法提取細(xì)胞中總RNA,應(yīng)用反轉(zhuǎn)錄試劑盒反轉(zhuǎn)錄為cDNA。 參考SYBR Premix Ex Taq 試劑盒說明書確定qRT-PCR反應(yīng)體系及條件,qRT-PCR 的引物序列為:YAP-F:5’-CAAGCTGGCTAGCGTTTAAACGG-3’, YAP-R:5’-GTAGTCGGATCCTAACCACGTGAGAAAG-3’;βactin-F:5’-CCTGGCACCCAGCACAAAT-3’,β-actin-R:5’-GGGCCGGACTCGTCATAC-3’。 以β-actin 作為內(nèi)參,按照2-ΔΔCt方法計(jì)算待測細(xì)胞中目的基因的表達(dá)。

1.3.4 CCK-8 檢測足細(xì)胞增殖活力

取對數(shù)生長期各組細(xì)胞,按1×104個/孔接種至96 孔板中,于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)0、12、24、48 h 后加入10 μL CCK-8 試劑,繼續(xù)孵育1 h 后,在酶標(biāo)儀450 nm 波長處檢測各孔光密度值。 每組每個時間點(diǎn)設(shè)置3 個復(fù)孔。 統(tǒng)計(jì)軟件計(jì)算并分析各組細(xì)胞的增殖活力。

1.3.5 Annexin V-FITC 雙染法聯(lián)合流式細(xì)胞術(shù)檢測足細(xì)胞凋亡

取培養(yǎng)48 h 后上述各組細(xì)胞,常規(guī)消化細(xì)胞后,2000 r/min 離心細(xì)胞5 min 后,取細(xì)胞沉淀加入195 μL 的Annexin V-FITC 結(jié)合液進(jìn)行重懸細(xì)胞,隨后再依次加入5 μL 與10 μL 的V-FITC 與PI 染液,充分混勻后37℃避光孵育15 min,過濾細(xì)胞團(tuán)塊后,上機(jī)進(jìn)行分析。

1.3.6 細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)檢測

取對數(shù)生長期各組細(xì)胞,按5×104個/孔接種至6 孔板中,待細(xì)胞生長融合至80%時,棄去原培養(yǎng)液,每孔加入1 mL 終濃度為5 μmol/L 的DCFHDA,37℃下孵育30 min 后,PBS 洗滌細(xì)胞后,收集細(xì)胞,應(yīng)用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測。 實(shí)驗(yàn)單獨(dú)重復(fù)3 次。

1.3.7 Western blot 實(shí)驗(yàn)

取各組待測細(xì)胞,將RIPA 細(xì)胞裂解液及蛋白酶抑制劑按100 ∶1 的比例進(jìn)行混合后,提取細(xì)胞中總蛋白,4℃下24000 r/min 離心15 min,收集上清液,BCA 法進(jìn)行蛋白定量,加入蛋白上樣緩沖液后將蛋白樣品經(jīng)沸水中加熱變性5 min。 10%SDSPAGE 電泳,轉(zhuǎn)膜,5%脫脂奶粉室溫下進(jìn)行抗體封閉2 h 后,加入YAP(1 ∶500)、Nephrin(1 ∶1000)、WT1(1 ∶1000)、ZO-1(1 ∶1000)和Snail(1 ∶800)、Fibronectin(1 ∶800)及β-actin(1 ∶2000),4℃搖床孵育過夜,隨后加入相應(yīng)二抗(1 ∶10000),TBST 溶液洗膜后,加入ECL 發(fā)光液于Bio-Rad 圖像分析儀進(jìn)行蛋白條帶灰度掃描,以β-actin 為內(nèi)參,分析目的蛋白表達(dá)水平。 實(shí)驗(yàn)單獨(dú)重復(fù)3 次。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

GraphPad Prism 5.0 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,數(shù)據(jù)結(jié)果用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(ˉx±s)表示,兩組間樣本使用t檢驗(yàn),多組間比較采用單因素方差分析(one-way ANOVA),兩兩比較采用Turkey 檢驗(yàn)。 以P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 YAP 在IMN 腎組織中的表達(dá)

IHC 染色結(jié)果顯示,Normal 組腎小球中有少量YAP 蛋白表達(dá),且主要表達(dá)于細(xì)胞胞質(zhì)中,而在IMN 患者中,YAP 蛋白在腎小球中表達(dá)明顯增加(P＜0.05),且多數(shù)表達(dá)于細(xì)胞核中(圖1)。

注:與Normal 組相比,*P＜0.05。

2.2 C5b-9 激活足細(xì)胞中YAP 信號表達(dá)

Western blot 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,隨C5b-9 刺激時間的延長,p-YAP 蛋白表達(dá)無明顯變化,而非磷酸化YAP 蛋白表達(dá)逐漸增加,且以24 h 增加趨勢最為明顯,故足細(xì)胞中p-YAP/YAP 比值隨C5b-9 刺激時間而不斷降低(P＜0.05)。 而在細(xì)胞中p-YAP 蛋白不能進(jìn)入細(xì)胞核以激活下游靶基因的轉(zhuǎn)錄,但YAP蛋白則能夠完成上述作用,提示C5b-9 能夠激活YAP 信號表達(dá)(圖2)。

注:與Control 組相比,*P＜0.05。

2.3 轉(zhuǎn)染si-YAP 后足細(xì)胞中YAP mRNA 及蛋白的表達(dá)水平

qRT-PCR 及Western blot 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)染沉默YAP 表達(dá)的si-YAP 后足細(xì)胞中YAP mRNA及蛋白的表達(dá)水平均顯著降低(P＜0.05),而轉(zhuǎn)染si-NC 后足細(xì)胞無明顯變化(P＞0.05,圖3)。

2.4 沉默YAP 基因?qū)5b-9 刺激后的足細(xì)胞活性的影響

CCK-8 檢測結(jié)果顯示,與Control 組相比,C5b-9組、C5b-9+si-NC 組及C5b-9+si-YAP 組細(xì)胞活力均顯著降低(P＜0.05);但與C5b-9 組或C5b-9+si-NC組相比,C5b-9+si-YAP 組細(xì)胞活力顯著增加(P＜0.05),前兩組無明顯差異(P＞0.05,圖4)。

注:與Control 組相比,*P＜0.05;與C5b-9 組相比,#P＜0.05。

2.5 沉默YAP 基因?qū)5b-9 刺激后足細(xì)胞凋亡影響

Annexin V-FITC 結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)檢測各組足細(xì)胞凋亡結(jié)果表明,與Control 組相比,C5b-9 組、C5b-9+si-NC 組及C5b-9+si-YAP 組細(xì)胞凋亡比例均顯著增加(P＜0.05);但與C5b-9 組或C5b-9+si-NC 組相比,C5b-9+si-YAP 組細(xì)胞凋亡比例顯著減少(P＜0.05),前兩組無明顯差異(P＞0.05,圖5)。

注:與Control 組相比,*P＜0.05;與C5b-9 組相比,#P＜0.05。

2.6 沉默YAP 基因?qū)5b-9 刺激后足細(xì)胞中ROS 產(chǎn)生的影響

流式細(xì)胞儀檢測各組足細(xì)胞中ROS 表達(dá)的結(jié)果顯示,與Control 組相比,C5b-9 組、C5b-9+si-NC組及C5b-9+si-YAP 組細(xì)胞中ROS 含量顯著增加(P＜0.05);但與C5b-9 組或C5b-9+si-NC 組相比,C5b-9+si-YAP 組細(xì)胞中ROS 顯著減少(P＜0.05),前兩組無顯著差異(P＞0.05,圖6)。

注:與Control 組相比,*P＜0.05;與C5b-9 組相比,#P＜0.05。

2.7 沉默YAP 基因?qū)5b-9 刺激后足細(xì)胞標(biāo)志性蛋白、緊密連接蛋白和表型轉(zhuǎn)換蛋白表達(dá)的影響

Western blot 檢測各組細(xì)胞中足細(xì)胞標(biāo)志性蛋白Nephrin、WT1 及緊密連接蛋白ZO-1 和表型轉(zhuǎn)換蛋白Snail、纖連蛋白Fibronectin 的表達(dá)結(jié)果顯示,與Control 組相比,C5b-9 組、C5b-9+si-NC 組及C5b-9+si-YAP 組細(xì)胞中Nephrin、WT1 及ZO-1 蛋白表達(dá)顯著降低(P＜0.05),Snail 與Fibronectin 蛋白表達(dá)顯著增加(P＜0.05);但與C5b-9 組或C5b-9+si-NC組相比,C5b-9+si-YAP 組細(xì)胞中Nephrin、WT1 及ZO-1 蛋白表達(dá)顯著增加(P＜0.05),而Snail 與Fibronectin 蛋白表達(dá)顯著減少(P＜0.05,圖7)。

注:與Control 組相比,*P＜0.05;與C5b-9 組相比,#P＜0.05。

3 討論

足細(xì)胞是位于腎組織毛細(xì)血管球外側(cè)的終末分化細(xì)胞,其不僅是構(gòu)成腎小球過濾屏障的重要組成細(xì)胞,同時也是免疫介導(dǎo)和非免疫損傷的重要作用靶點(diǎn)[11]。 而持續(xù)的足細(xì)胞損傷則會導(dǎo)致細(xì)胞數(shù)量的減少,進(jìn)而引起腎功能不全,乃至終末期腎病的發(fā)生。 既往研究證實(shí)補(bǔ)體系統(tǒng)的異?；罨贗MN足細(xì)胞損傷中具有重要地位,而C5b-9 作為補(bǔ)體活化的終產(chǎn)物,更能直接破壞足細(xì)胞的正常結(jié)構(gòu)與功能[5]。 因此積極探究C5b-9 損傷足細(xì)胞的相關(guān)機(jī)制對闡明IMN 的發(fā)生發(fā)展具有重要意義。 本研究結(jié)果顯示,通過siRNA 轉(zhuǎn)染技術(shù)沉默在IMN 腎組織中過表達(dá)的YAP 基因能夠顯著改善C5b-9 誘導(dǎo)的足細(xì)胞損傷,這提示YAP 信號可能在IMN 的致病機(jī)制中具有重要作用。

YAP/Hippo 信號通路是近年來受到廣大學(xué)者關(guān)注的一條調(diào)控細(xì)胞增殖、分化和凋亡相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄和表達(dá)的重要信號通路[7]。 研究發(fā)現(xiàn)Hippo 途徑在動物體內(nèi)具有高度保守性,其主要由Mst1/2 激酶,Lats1/2 激酶和共轉(zhuǎn)錄激活因子YAP 或TAZ 構(gòu)成[12]。 在細(xì)胞中,上游的相關(guān)調(diào)控元件如NF2、KIBRA 等,磷酸化Mst1/2 激酶,并使其轉(zhuǎn)為激活狀態(tài),從而進(jìn)一步同樣磷酸化并活化Lats1/2 激酶,而活化Lats1/2 激酶可以直接使下游的YAP 蛋白發(fā)生磷酸化。 分子機(jī)制相關(guān)研究發(fā)現(xiàn),骨架蛋白14-3-3等能夠與磷酸化的YAP 相結(jié)合,使其滯留在胞漿中,并經(jīng)泛素化途徑被降解。 而未發(fā)生磷酸化的YAP 蛋白能夠順利進(jìn)入細(xì)胞核,并與TEAD 結(jié)合,啟動下游相關(guān)靶基因的轉(zhuǎn)錄及表達(dá),參與調(diào)控細(xì)胞的增殖與凋亡過程[13-15]。 提示未發(fā)生磷酸化的核內(nèi)YAP 才具有發(fā)揮相關(guān)生物學(xué)活性的作用。 在本研究中,我們通過免疫組織化學(xué)染色發(fā)現(xiàn)YAP 蛋白在IMN 患者腎小球足細(xì)胞中的表達(dá)異常增加,且其定位多位于細(xì)胞核內(nèi)。 這提示在IMN 中YAP 可能通過調(diào)控下游相關(guān)靶基因的轉(zhuǎn)錄導(dǎo)致參與IMN 的發(fā)生進(jìn)展。

隨著對YAP/Hippo 信號通路認(rèn)識的加深,人們發(fā)現(xiàn)主要定位于腎小球足細(xì)胞內(nèi)的YAP 蛋白與細(xì)胞的損傷,凋亡,細(xì)胞骨架的異常及間質(zhì)性表型轉(zhuǎn)換等密切相關(guān),然而其具體作用仍存在爭議。 如Campbell 等[16]研究發(fā)現(xiàn),YAP 蛋白能通過分子結(jié)構(gòu)中的WWW 結(jié)構(gòu)域與樹突蛋白dendrin 的相關(guān)序列進(jìn)行結(jié)合,從而抑制細(xì)胞核內(nèi)促凋亡信號的轉(zhuǎn)錄,避免阿霉素或星形孢菌素所誘導(dǎo)的足細(xì)胞凋亡。同樣在局灶節(jié)段性性腎小球硬化中,足細(xì)胞核內(nèi)YAP 蛋白的含量減少,加速了基質(zhì)中膠原纖維的產(chǎn)生及足細(xì)胞的丟失[17]。 這些研究提示YAP 在保護(hù)足細(xì)胞功能及維持腎小球過濾屏障中具有關(guān)鍵作用。 然而,其他研究也表明,細(xì)胞核內(nèi)YAP 信號的過度表達(dá)則會造成足細(xì)胞的損傷及凋亡。 如在糖尿病腎病(DN)中,足細(xì)胞核中異常聚集的YAP 蛋白與患者收縮壓、血尿素氮,肌酐的升高及DN 的病理分級呈正相關(guān),提示抑制YAP 活性可能具有延緩DN 進(jìn)展的作用[18]。 國內(nèi)學(xué)者謝可煒[19]在阿霉素腎病的體內(nèi)外研究中發(fā)現(xiàn),過表達(dá)足細(xì)胞中YAP 蛋白可能通過促進(jìn)周期相關(guān)蛋白CDK4 和CyclinD1 的表達(dá),從而誘導(dǎo)靜止期的足細(xì)胞重新進(jìn)入細(xì)胞周期,并發(fā)生間充質(zhì)細(xì)胞分化,嚴(yán)重影響足細(xì)胞的正常功能,并使其發(fā)生“有絲分裂災(zāi)難”,加速足細(xì)胞的丟失。 本研究通過體外建立C5b-9 損傷足細(xì)胞模型發(fā)現(xiàn),隨著C5b-9 刺激時間的延長,足細(xì)胞中非磷酸化YAP 蛋白的表達(dá)逐漸增加,而沉默YAP 基因表達(dá)能顯著緩解C5b-9 誘導(dǎo)的足細(xì)胞增殖活性降低,凋亡增加、ROS 產(chǎn)生及足細(xì)胞損傷與間質(zhì)細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化現(xiàn)象,同樣提示YAP 在足細(xì)胞的異常表達(dá)及定位可能通過損傷足細(xì)胞的功能,促進(jìn)IMN 的發(fā)生發(fā)展。

綜上,本研究結(jié)果表明YAP 蛋白在IMN 患者腎小球中的表達(dá)顯著增加,沉默足細(xì)胞中YAP 基因表達(dá)能夠明顯改善C5b-9 誘導(dǎo)的細(xì)胞功能損傷,抑制其凋亡的發(fā)生。 雖然YAP 在足細(xì)胞損傷中的具體作用機(jī)制仍需進(jìn)一步研究,但本研究有望為YAP在IMN 治療的潛在作用靶點(diǎn)提供實(shí)驗(yàn)室及理論基礎(chǔ)。