宮頸癌患者放療敏感性與癌組織中HPV16-E6、p53 mRNA表達(dá)的關(guān)系分析

喬炳禮 兌偉華 王钖 唐亞輝

作者單位：1 鄭州市第三人民醫(yī)院腫瘤科，河南 鄭州 450000

2 鄭州黃河科技學(xué)院，河南 鄭州 450000

宮頸癌發(fā)病率在女性惡性腫瘤中排第二位，而在某些發(fā)展中國(guó)家其死亡率位于首位[1]。近些年的研究顯示[2]，我國(guó)宮頸癌發(fā)病率逐年增高，其原因可能與人乳頭狀瘤病毒（human papillomavirus，HPV）感染率增高及國(guó)家對(duì)宮頸癌篩查工作的大力投入，導(dǎo)致部分隱形宮頸癌患者得以確診等有關(guān)。放療是宮頸癌主要治療方法之一，但不同個(gè)體對(duì)放療敏感度不同[3]。因此，評(píng)估患者個(gè)體的放療敏感度，并以此設(shè)計(jì)個(gè)性化的放療方案對(duì)提高放療療效具有重要意義。HPV感染是宮頸癌發(fā)生、發(fā)展的重要危險(xiǎn)因素[4]，HPV 16-E6、p53 mRNA 則是一組與宮頸癌發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)的癌/抑癌基因，但關(guān)于該組基因?qū)颊呋煰熜У挠绊?，臨床研究較少。本研究探討宮頸癌組織中人乳頭狀瘤病毒（HPV）16-E6、p53 mRNA 表達(dá)及與放療敏感性的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料選取2018年1月～2020年1月在我院治療的宮頸癌患者76 例，年齡45～62 歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：①均經(jīng)病理學(xué)確診為宮頸鱗癌；②符合國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（FIGO）分期中的Ⅰ～Ⅱ期；③患者及家屬知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：①非初治患者；②合并有肝腎功能障礙、急慢性感染、血液系統(tǒng)疾病等其他嚴(yán)重疾病者。

1.2 放療方法根治性放射治療方案：照射射線為直線加速器6/10 MV X 射線，選用X 線模擬定位，給予患者進(jìn)行體外三維適形照射，每次劑量為2Gy，每周5 次，總劑量為30Gy。同時(shí)給予患者后裝腔內(nèi)照射，每次劑量為6Gy，每周1 次，總劑量為30～42Gy。后裝放療時(shí)間需與三維適形放療錯(cuò)開，不可于同一天進(jìn)行[5]。

1.3 檢測(cè)方法根據(jù)患者放療療效分為放療敏感及放療抗拒兩組，并于放療前后活檢取樣，選用Trizol法提取RNA，取1μg RNA 進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，將獲取的DNA 作為RT-PCR 樣本。PubMed.SNP 數(shù)據(jù)庫(kù)查詢HPV16-E6、p53 基因序列，引物由上海生工提供，PCR 反應(yīng)體系為：2μl 樣本，1μl 上、下游引物，10μl PCR-mix，8μl 滅菌雙蒸水。反應(yīng)條件設(shè)置如下：95 ℃，8min；94 ℃，40s；63 ℃，38s；72 ℃，40s，共32 個(gè)循環(huán)，選用蘇州雅睿生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的MA-6000 實(shí)時(shí)熒光定量PCR 儀讀取結(jié)果。

1.4 療效標(biāo)準(zhǔn)完全緩解（CR）：病灶消失，至少維持4 周及以上；部分緩解（PR）：病灶體積較治療前縮小＞50%，至少維持4 周及以上；疾病穩(wěn)定（SD）：病灶體積較治療前縮小≤50%，或增加＜25%；疾病進(jìn)展（PD）：病灶體積較治療前≥25%或出現(xiàn)新病灶。其中放療敏感為CR+PR，放療抗拒為SD+PD。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 22.0 軟件，計(jì)量資料采用±s表示，兩組間比較使用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料比較使用χ2檢驗(yàn)，采用Pearson 進(jìn)行相關(guān)性分析。檢驗(yàn)水準(zhǔn)：雙側(cè)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 放療療效76 例患者中，放療療效達(dá)到CR 10例，PR 45 例，SD 14 例，PD 7 例，放療敏感率為72.37%；放療敏感和抗拒者年齡等一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

表1 放療敏感和抗拒者一般資料比較

2.2 放療敏感和抗拒者放療前后HPV16-E6、p53 mRNA 表達(dá)比較放療敏感和抗拒者放療后HPV16-E6 mRNA 相對(duì)表達(dá)量較放療前降低（P＜0.05），而p53 mRNA 相對(duì)表達(dá)量較放療前升高（P＜0.05）；放療敏感者放療后HPV16-E6 mRNA相對(duì)表達(dá)量明顯低于放療抗拒者（P＜0.05），而p53 mRNA 相對(duì)表達(dá)量明顯高于放療抗拒者（P＜0.05）。見表2。

表2 放療敏感和抗拒者放療前后HPV16-E6、p53 mRNA表達(dá)比較

2.3 相關(guān)性分析將患者HPV16-E6 與p53 mRNA相對(duì)表達(dá)量進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果顯示：放療前、放療后HPV16-E6 與p53 mRNA 相對(duì)表達(dá)量呈負(fù)相關(guān)（r=-0.530 和-0.754，P＜0.05）。見圖1。

3 討論

放療是一種借助放射能量破壞細(xì)胞DNA 雙鏈，進(jìn)而殺傷癌細(xì)胞的治療技術(shù)[5]。本研究76 例宮頸癌患者中，放療療效達(dá)到完全緩解（CR）10 例，部分緩解（PR）45 例，疾病穩(wěn)定（SD）14 例，疾病進(jìn)展（PD）7 例，放療敏感率為72.37%，與同類研究[6]結(jié)果相似，提示放療是一種有效的宮頸癌治療方法。宮頸癌患者放療敏感性受病理分型、病灶體積及位置、放療方案以及HPV 病毒水平等因素影響，為探討HPV 病毒相關(guān)mRNA 對(duì)宮頸癌放療敏感性的影響，我們進(jìn)行了本次研究。

HPV 屬于雙鏈?zhǔn)壬掀ば訢NA 病毒，可通過整合宿主基因并破壞E2 病毒基因及對(duì)應(yīng)染色體位點(diǎn)，進(jìn)而導(dǎo)致細(xì)胞增殖失控，最終發(fā)生惡性病變[7]。HPV 具有多種分型，其中HPV16、HPV18 等高危型是宮頸癌的獨(dú)立危險(xiǎn)因素[8]。HPV16、HPV18 具有抑制抑癌基因表達(dá)、促進(jìn)增殖基因表達(dá)、增強(qiáng)細(xì)胞惡性生物學(xué)行為等功能[9]。臨床研究顯示[10]，HPV16-E6 是宮頸癌發(fā)生、發(fā)展的重要介質(zhì)，E6 轉(zhuǎn)化基因及其功能是HPV16 誘導(dǎo)宮頸癌的關(guān)鍵。E6蛋白具有促端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶轉(zhuǎn)錄能力，并以此維護(hù)、修復(fù)染色體端粒末端重復(fù)DNA，進(jìn)而促進(jìn)細(xì)胞的不斷增殖[11]。HPV感染所引發(fā)的鱗狀上皮病變組織內(nèi)可見明顯E6 蛋白高表達(dá)情況，而應(yīng)用RNA干擾技術(shù)抑制沉默HPV16-E6 后，組織樣本內(nèi)的HPV16 DNA 表達(dá)水平顯著下降，其復(fù)制功能也隨之降低，癌細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖速度下降[12]。有研究發(fā)現(xiàn)[13]，HPV16-E6 蛋白高表達(dá)，而p53 蛋白低表達(dá)是口腔癌進(jìn)展的重要原因。p53 是抑癌基因的一種，該基因的突變是多種惡性腫瘤疾病的危險(xiǎn)因素。HPV16-E6 蛋白與野生p53 蛋白結(jié)合后，p53 蛋白結(jié)構(gòu)及其功能將隨之改變，p53 蛋白對(duì)細(xì)胞G1 期的阻滯功能將大幅衰退，細(xì)胞將快速進(jìn)入S 期，進(jìn)而出現(xiàn)增殖失控情況，最終參與腫瘤發(fā)生、發(fā)展[14]。本研究中，放療敏感者放療后HPV16-E6 mRNA 相對(duì)表達(dá)量明顯低于放療抗拒者，而p53 mRNA 相對(duì)表達(dá)量明顯高于放療抗拒者，表明HPV16-E6、p53 mRNA 異常表達(dá)與宮頸癌患者放療敏感度密切相關(guān)，分析其原因可能為：不同細(xì)胞具有的DNA 修復(fù)能力不同，細(xì)胞放療后的DNA 修復(fù)能力直接影響著患者的放療療效[15]。野生型p53 蛋白具有促細(xì)胞凋亡能力，而一旦p53 mRNA 突變，其蛋白的促細(xì)胞凋亡功能將減弱，細(xì)胞的DNA 修復(fù)能力將異?；?，放療敏感性也隨之降低。HPV16-E6 mRNA 可與突變p53 基因相互結(jié)合，并在突變p53 基因生成對(duì)應(yīng)功能前將其滅活，避免突變p53 基因誘導(dǎo)細(xì)胞惡性病變。有研究發(fā)現(xiàn)[16]，p53 基因高表達(dá)可增強(qiáng)宮頸癌患者放療敏感性，這與本研究結(jié)果相似。本研究還發(fā)現(xiàn)，放療前、放療后HPV16-E6 與p53 mRNA 相對(duì)表達(dá)量呈負(fù)相關(guān)，分析其原因可能為：HPV16-E6蛋白可通過結(jié)合p53 蛋白來影響其功能，導(dǎo)致p53蛋白失去對(duì)細(xì)胞周期的調(diào)控能力，促使細(xì)胞異常復(fù)制，進(jìn)而導(dǎo)致細(xì)胞惡性增殖能力增強(qiáng)，并降低細(xì)胞對(duì)放療的敏感性。

本研究發(fā)現(xiàn)，HPV16-E6、p53 mRNA 表達(dá)不僅與宮頸癌發(fā)生、發(fā)展有關(guān)，還與患者放療敏感性有關(guān)。臨床可在放療之前對(duì)患者HPV16-E6、p53 mRNA 表達(dá)水平進(jìn)行檢查，并根據(jù)患者HPV16-E6、p53 mRNA 表達(dá)水平選擇合理的放療方案及放療劑量，確保放療的有效性。此外，臨床還可靶向干預(yù)HPV16-E6、p53 基因的表達(dá)，以此增強(qiáng)患者的放療敏感性。受限于基礎(chǔ)條件，本研究還存在樣本量較小等不足，有待后期進(jìn)行大數(shù)據(jù)分析。

綜上所述，宮頸癌組織中HPV16-E6、p53 mRNA表達(dá)與患者放療敏感有關(guān)，值得進(jìn)一步研究。