柏子仁提取液對(duì)小鼠生發(fā)作用研究

于 陽(yáng) 崔新剛 崔海洋 張興超 孫雅欣

牡丹江醫(yī)學(xué)院，黑龍江 牡丹江 157011

人類健康的標(biāo)志是頭發(fā)，但近幾年脫發(fā)人群越來(lái)越多，而且越來(lái)越年輕化。病理性脫發(fā)是頭皮正常，頭發(fā)過(guò)度脫落，無(wú)其他特殊癥狀，病情長(zhǎng)時(shí)間反復(fù)發(fā)作的現(xiàn)象[1]。脫發(fā)嚴(yán)重影響人外觀形象，造成心理負(fù)擔(dān)，甚至妨礙人群的正常社交、學(xué)習(xí)和工作，目前現(xiàn)代醫(yī)學(xué)尚未探明發(fā)病原因，西醫(yī)對(duì)脫發(fā)的治療一般是刺激毛囊，免疫抑制劑和長(zhǎng)期激素治療，治療藥物依賴性強(qiáng)，停藥或減量后復(fù)發(fā)幾率高，且費(fèi)用高昂，經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)大[2]。

中醫(yī)藥治療脫發(fā)由來(lái)已久，在《黃帝內(nèi)經(jīng)》《本草綱目》《神農(nóng)本草經(jīng)》等眾多醫(yī)書(shū)中都有記載。《黃帝內(nèi)經(jīng)》中有“發(fā)為血之余，腎其華在發(fā)”。中醫(yī)認(rèn)為頭發(fā)的生長(zhǎng)榮枯，主要與人的精血有關(guān)，精血與心肝腎關(guān)系密切，心主血脈，肝藏血，腎藏精，精為先天之本，可轉(zhuǎn)化為血，發(fā)為血之余，精血充足，頭發(fā)自然烏黑濃密，精血虛衰，頭發(fā)也會(huì)日漸干枯脫落[3]。人的心情不暢，壓力過(guò)大，精血失養(yǎng)也易導(dǎo)致脫發(fā)。《本草綱目》中記載柏子仁“養(yǎng)心氣，潤(rùn)腎燥，安魂定魄，益智寧神；燒瀝，澤頭發(fā)”。柏子仁味甘而補(bǔ)，辛而能潤(rùn)，既養(yǎng)心腎，兼益脾腎?！渡褶r(nóng)本草經(jīng)》也把柏子仁(柏實(shí))列為上品。但中藥在治療脫發(fā)中多采用復(fù)方方劑，對(duì)于單一中藥治療脫發(fā)效果難以明確。本研究以脫發(fā)小鼠模型為研究對(duì)象，探討柏子仁的生發(fā)作用，為中藥臨床使用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 基本特性 柏子仁是常用的中藥材，為柏科植物側(cè)柏的干燥成熟種仁，《神農(nóng)本草經(jīng)》列為上品，呈橢圓形或卵形，一般表面黃白色，也有淡黃棕色，長(zhǎng)4～7 mm，直徑1.5～3 mm[4-5]。外包膜質(zhì)內(nèi)種皮，有深褐色的小點(diǎn)，頂端略尖。質(zhì)軟，富油。味淡氣微香,性平,歸心、腎、大腸經(jīng)?？绅B(yǎng)心安神，潤(rùn)腸通便，止汗。用于陰血不足，虛煩失眠，心悸怔忡，腸燥便秘，陰虛盜汗。

化學(xué)成分:柏子仁化學(xué)成分眾多，含脂肪油約14%，含柏木醇、谷甾醇、雙萜類、少量揮發(fā)油、維生素A、皂苷和蛋白質(zhì)等。研究[6]表明柏子仁的多種藥理作用都與化學(xué)成分密不可分,其在諸多方面都有較好的療效，臨床應(yīng)用非常廣泛。徐新剛等[7]采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用( GC-MS)方法對(duì)柏子仁油進(jìn)行定性鑒定和定量分析，鑒定出了柏子仁油中的幾種脂肪酸:其中飽和脂肪酸主要是2.62%硬脂酸，6.58%十六烷酸;不飽和脂肪酸占脂肪酸的87.51%，主要為54.17%亞麻酸，2.62%二十碳三烯酸，22.97%亞油酸，7.75%花生四烯酸。經(jīng)測(cè)定柏子仁生品中總皂苷0.142%，柏子仁中含有的萜類化合物主要為二萜，并以半日花烷型二萜為主，不同產(chǎn)地柏子仁中多糖含量為 4.19%～7.01%。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及造模 選用昆明小鼠50只，體重在18～22 g，隨機(jī)分為5組，每組10只，雌雄各半。劑量組分別為：高劑量組、中劑量組、低劑量組、陽(yáng)性對(duì)照組和陰性對(duì)照組。把每只小鼠背部毛發(fā)剪短，脫毛面積約2 cm×3 cm，再用脫毛劑(15%Na2S)涂于小鼠后背，約1～2 min 后，用溫水清洗，反復(fù)1～2次，至小鼠后背光滑[8]。

1.3 實(shí)驗(yàn)藥品及配置 柏子仁購(gòu)于安國(guó)藥源商貿(mào)有限公司，水為蒸餾水。柏子仁提取液制備：取柏子仁100 g加八倍水浸泡1 h后，加熱煮沸2 h，過(guò)濾，將濾渣加7倍水，加熱煮沸2 h過(guò)濾，合并二次濾液加熱濃縮至0.860 g/mL，備用。取米諾地爾用純水配置成0.15 mg/mL的溶液備用。

1.4 給藥方法 將柏子仁提取液，分別稀釋為0.860 g/mL，0.215 g/mL，0.053 g/mL的高、中、低3個(gè)劑量濃度。以蒸餾水為陰性對(duì)照組，以米諾地爾為陽(yáng)性對(duì)照組，每組小鼠按0.4 mL/20 g劑量灌胃給藥，每日1次，連續(xù)24 d。每6天對(duì)小鼠背部脫毛區(qū)毛發(fā)生長(zhǎng)評(píng)價(jià)1次。并每天記錄小鼠皮膚顏色變化(由粉變白時(shí)間，維持白色時(shí)間)，并在第24天脫頸處死小鼠，將背部脫毛區(qū)毛皮剪下，用14 mm打孔器于每鼠的脫毛區(qū)相同位置取一圓形皮片，把皮片上所有毛發(fā)用手術(shù)刀刮下，稱重[9]。在每鼠脫毛區(qū)相同位置取最長(zhǎng)毛發(fā)10根，用游標(biāo)卡尺測(cè)量其長(zhǎng)度，以10根毛的均長(zhǎng)代表每只鼠的毛均長(zhǎng)，并計(jì)算出各組小鼠毛發(fā)的均長(zhǎng)值[10]。

2 結(jié)果

2.1 柏子仁提取液對(duì)小鼠脫毛區(qū)毛發(fā)生長(zhǎng)作用的影響 第0天各劑量組評(píng)分均為0分，無(wú)差別，表明各組在實(shí)驗(yàn)過(guò)程的評(píng)分具有可比性。第6天除中劑量組外，其余各劑量組評(píng)分均為0分，表明中劑量組評(píng)分要優(yōu)于其余各組。第12天時(shí)低劑量組和陰性對(duì)照組的評(píng)分仍為0分，遠(yuǎn)低于其他三組；高劑量組評(píng)分分別與陽(yáng)性對(duì)照組和中劑量組比較均略低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；陽(yáng)性對(duì)照組評(píng)分與中劑量組比較相似，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。第18天各劑量組評(píng)分相互比較均有差異，且差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；陰性對(duì)照組評(píng)分低于低劑量組，低于高劑量組，低于陽(yáng)性對(duì)照組，低于中劑量組。第24天陰性對(duì)照組評(píng)分均低于其余各組，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；陽(yáng)性對(duì)照組評(píng)分與中劑量組比較相仿，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；且二者分別與低劑量組和高劑量組比較，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；高劑量組評(píng)分與低劑量組比較相似，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。詳見(jiàn)表1。各劑量組評(píng)分隨時(shí)間變化。如圖1所示。

表1 柏子仁提取液對(duì)小鼠脫毛區(qū)毛發(fā)生長(zhǎng)作用情況

圖1 各劑量組脫毛區(qū)體毛生長(zhǎng)評(píng)分與時(shí)間關(guān)系

評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：無(wú)毛生長(zhǎng)為0分；淺毛長(zhǎng)滿脫毛區(qū)為1分；新生毛長(zhǎng)度及密度約為未脫毛區(qū)的一半為2分；新生毛長(zhǎng)與未脫毛區(qū)無(wú)差別為3分；出現(xiàn)不規(guī)則毛生長(zhǎng)的小鼠按面積比率計(jì)算。

2.2 柏子仁提取液對(duì)小鼠脫毛區(qū)皮膚顏色變化的影響 各劑量組的皮膚由粉變白的時(shí)間比較：高劑量組與中劑量組比較相似，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；且均少于低劑量組、陰性對(duì)照組和陽(yáng)性對(duì)照組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；低劑量組、陰性對(duì)照組和陽(yáng)性對(duì)照組比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，其分別是低劑量組時(shí)間少于陽(yáng)性對(duì)照組，少于陰性對(duì)照組。各劑量組的皮膚維持白色時(shí)間比較均有差異，且差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，其分別是陰性對(duì)照組時(shí)間少于陽(yáng)性對(duì)照組，少于低劑量組，少于高劑量組，少于中劑量組。

表2 柏子仁提取液對(duì)小鼠脫毛區(qū)皮膚顏色變化的影響

2.3 柏子仁提取液對(duì)小鼠脫毛區(qū)再生體毛的毛長(zhǎng)及重量影響 柏子仁提取液對(duì)小鼠脫毛區(qū)再生體毛照片對(duì)照?qǐng)D如圖2所示。無(wú)論是毛長(zhǎng)還是毛重在各劑量組的比較中：陰性對(duì)照組與低劑量組比較相似，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；且二者均低于陽(yáng)性對(duì)照組、高劑量組和中劑量組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；陽(yáng)性對(duì)照組、高劑量組和中劑量組相互比較相似，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。詳見(jiàn)表3。

圖2 柏子仁提取液對(duì)小鼠脫毛區(qū)再生體毛照片對(duì)照?qǐng)D

表3 柏子仁提取液對(duì)小鼠脫毛區(qū)再生體毛的毛長(zhǎng)及毛重影響

3 討論

3.1 柏子仁提取液保留了柏子仁生發(fā)功效 柏子仁含有油脂、皂苷、氨基酸、萜類等多種化學(xué)成分，但經(jīng)研究[11]表明認(rèn)為柏子仁發(fā)揮主要作用的化學(xué)成分為皂苷，皂苷易溶于水，柏子仁中大約含有57.04%的油脂，其中只含有微量的揮發(fā)油，所以本實(shí)驗(yàn)使用的提取方法不會(huì)破壞柏子仁中的主要成分，最大程度的保留了柏子仁的生發(fā)功效。

3.2 柏子仁提取液對(duì)于脫發(fā)確有療效 精血虛、肝腎不足、心神不寧是脫發(fā)形成的原因?！鞍l(fā)為血之余”，肝藏血,腎藏精，精血虛,肝腎不足﹐心情不佳，壓力過(guò)大導(dǎo)致心血失養(yǎng)，多種綜合不利因素導(dǎo)致頭發(fā)失去滋養(yǎng)而脫發(fā)[12]。從中醫(yī)角度治療脫發(fā)以養(yǎng)血活血，補(bǔ)益肝腎，養(yǎng)心安神常常有好的療效。柏子仁味甘而補(bǔ)，辛而能潤(rùn)，既養(yǎng)心腎，兼益脾腎，柏子仁提取液具有滋補(bǔ)肝腎、烏須生發(fā)的功效﹐能滋補(bǔ)肝腎、養(yǎng)血生津、烏須生發(fā)。從而能加快毛發(fā)生長(zhǎng)以達(dá)到治療脫發(fā)的目的。

小鼠在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，高中低劑量組體重均增加，精神狀態(tài)良好，全部存活，中劑量組小鼠脫毛區(qū)的生長(zhǎng)評(píng)分、顏色改變、毛長(zhǎng)及毛重與陰性對(duì)照組相比均增加，與陽(yáng)性對(duì)照組相比均相似(參見(jiàn)表1、表2和表3結(jié)果)。說(shuō)明柏子仁實(shí)驗(yàn)用量的安全性高，治療脫發(fā)療效確切，為明確柏子仁單一藥物對(duì)脫發(fā)治療的作用奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

3.3 不同劑量柏子仁提取液生發(fā)效果存在差異 藥理實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,不同濃度的柏子仁提取液對(duì)小鼠脫毛區(qū)毛發(fā)的再生情況具有明顯的差異。低劑量組的小鼠脫毛區(qū)毛長(zhǎng)和毛重、開(kāi)始時(shí)的生長(zhǎng)評(píng)分與陰性對(duì)照組相似，實(shí)驗(yàn)后期的生長(zhǎng)評(píng)分及脫毛區(qū)顏色改變與陰性對(duì)照組比較略有差別；這些指標(biāo)又同時(shí)明顯差于陽(yáng)性對(duì)照組。這說(shuō)明柏子仁提取液確實(shí)有生發(fā)效果，但由于劑量較低而效果不明顯，這與其他學(xué)者在相關(guān)研究較為相似[2]。

中劑量組的毛發(fā)生長(zhǎng)評(píng)分、脫毛區(qū)顏色改變、毛長(zhǎng)和毛重與陽(yáng)性對(duì)照組比較相似或略好，同時(shí)又明顯優(yōu)于陰性對(duì)照組和低劑量組。尤其是毛發(fā)生長(zhǎng)評(píng)分隨時(shí)間變化表現(xiàn)得更為明顯，參見(jiàn)圖1。表明隨著給藥劑量不斷增加，藥物發(fā)生作用愈加明顯，對(duì)于生發(fā)效果不同劑量差異體現(xiàn)的愈加顯著，這也與王玉斐等[10]研究結(jié)果較為相似。

高劑量組的毛發(fā)生長(zhǎng)評(píng)分、脫毛區(qū)顏色改變、毛長(zhǎng)和毛重與陽(yáng)性對(duì)照組比較相似或略有不同；但與中劑量組比較時(shí)，相似或略差；同時(shí)又優(yōu)于陰性對(duì)照組和低劑量組。其首先表明與低劑量組和陰性對(duì)照組比較，隨著給藥劑量不斷增加，藥物發(fā)生作用明顯，生發(fā)效果有所提升。其次表明與中劑量組比較時(shí)，隨著給藥劑量增加，生發(fā)效果并沒(méi)有得到改善，高劑量使小鼠減慢毛發(fā)生長(zhǎng)速度，延后進(jìn)入毛發(fā)生長(zhǎng)期，縮短生長(zhǎng)周期，抑制毛發(fā)再生。體現(xiàn)出柏子仁提取液不但具有顯著的生發(fā)效果，還具有一定毒性，即在一定條件下能夠略抑制生發(fā)。中濃度都能有效促進(jìn)小鼠體表毛囊的再生或增多﹐但高濃度劑量組小鼠再生毛發(fā)生長(zhǎng)較對(duì)照組緩慢,說(shuō)明高濃度會(huì)影響小鼠體表毛囊正常的生理功能，可能由于高濃度劑量對(duì)肝腎有毒性，而頭發(fā)的生長(zhǎng)榮枯，主要與人的精血有關(guān)，精血與心肝腎關(guān)系密切，所以高劑量組體現(xiàn)出中毒的抑制作用。因各個(gè)劑量組的生發(fā)效果，可參見(jiàn)圖2。

綜上，不同劑量的柏子仁提取液對(duì)于生發(fā)效果有著一定的差異：劑量過(guò)低，達(dá)不到生發(fā)的效果；而劑量過(guò)高又會(huì)產(chǎn)生一定的抑制作用，使得生發(fā)效果略有降低，這與王常明等[13]研究其他中藥的生發(fā)結(jié)果相仿。因此，對(duì)于柏子仁在臨床用藥時(shí)，劑量要得到足夠重視。