nesfatin-1、miR-1233-3p、miR-181b在妊娠期高血壓疾病中的表達(dá)及相關(guān)性

楊 娜 王 微 張 芳 嚴(yán) 鳳*

1.河北省保定市婦幼保健院(071000)；2.河北省保定市職業(yè)技術(shù)學(xué)院

妊娠期高血壓疾病孕婦會(huì)出現(xiàn)高血壓、蛋白尿、水腫等癥狀[1-2]。人新飽食分子蛋白1(nesfatin-1)作為一種與攝食功能有關(guān)的蛋白，能夠參與調(diào)控心血管、生殖、胃腸道等系統(tǒng)的功能，同時(shí)還有升高平均動(dòng)脈壓、抗炎、抗凋亡作用。miRNA參與多種細(xì)胞因子的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)以及免疫應(yīng)答反應(yīng)[3-4]。臨床研究顯示，miRNA在維持胎盤的正常發(fā)育中發(fā)揮重要作用，miRNA表達(dá)出現(xiàn)異常可能與妊娠期高血壓疾病的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，有望成為妊娠期高血壓疾病預(yù)后評(píng)估的生物標(biāo)志物以及治療靶點(diǎn)[5-6]。本文研究對(duì)nesfatin-1、miR-1233-3p、miR-181b進(jìn)行檢測(cè)，探究其在妊娠期高血壓疾病中的表達(dá)及相關(guān)性。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

在獲得本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)后，選取2020年1月—2021年3月本院收治的妊娠期高血壓患者94例為病例組，包括妊娠期高血壓52例，輕度子癇前期35例，重度子癇前期7例；同期產(chǎn)前檢查健康孕婦90例為健康組。納入標(biāo)準(zhǔn)：妊娠期高血壓患者符合相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]；單胎妊娠；臨床資料完整；患者及家屬均簽署知情通知書。排除標(biāo)準(zhǔn)：多胎妊娠者；妊娠前有糖尿病、高血壓史；母體或胎兒存在病毒感染；近半年有非法藥物成癮史。

1.2 檢測(cè)方法

1.2.1標(biāo)本采集病例組入院后次日、健康組在體檢當(dāng)天清晨采集空腹靜脈血，離心取上清液置-80℃保存待用。

1.2.2血清nesfatin-1檢測(cè)使用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血清nesfatin-1水平。試劑盒購(gòu)自武漢優(yōu)爾生物科技股份公司。

1.2.3血清miR-1233-3p、miR-181b檢測(cè)使用RT-PCR檢測(cè)miR-1233-3p、miR-181b表達(dá)。在待測(cè)標(biāo)本內(nèi)提取總RNA，逆轉(zhuǎn)錄后獲得cDNA，使用Primer5.0軟件設(shè)計(jì)引物，采用2-△△Ct方法計(jì)算，內(nèi)參U6。設(shè)置反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)條件：25°C 10min,40°C 60min,85°C 5min；設(shè)置擴(kuò)增條件:94°C20s、72°C 30s、60°C 30s,35個(gè)循環(huán)，采用2-△△Ct方法計(jì)算mRNA表達(dá)量。miR-1233-3p上游引物序列：5'-ACCTCCAGCTGGCATTATTACTTTTGG-3'；下游引物序列：5'-TGGTGTCGTGGAGTCG-3'。miR-181b上游引物序列5'-GCGGTCACTTATTCGTGCG-3'；下游引物序列3'GTCGTCCCACATTCCAGCRT-5'。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 一般情況

病例組年齡(28.1±3.1)歲(24～32歲)，孕周(37.5±1.2)周(36～39周)，孕次(2.1±0.7)次(1～3次)，孕前體質(zhì)指數(shù)(BMI)(23.1±1.5)kg/m2(21～25kg/m2)。健康組年齡(27.1±3.12)歲(23～31歲)，孕周(38.5±1.2)周(37～40周)，孕次(2.1±1.5)次(1～4次)，孕前BMI(22.5±1.2)kg/m2(21～24kg/m2)。兩組對(duì)比無(wú)差異(P>0.05)。

2.2 血清nesfatin-1、miR-1233-3p、miR-181b表達(dá)

如表1所示，病例組nesfatin-1、miR-1233-3p、miR-181b表達(dá)高于健康組，且在妊娠期高血壓、子癇前期、重度子癇前期患者中表達(dá)依次上升(P<0.05)。

2.3 影響妊娠期高血壓疾病多因素logistic回歸分析

將妊娠期高血壓疾病嚴(yán)重程度作為因變量(賦值：發(fā)展至子癇前期=0，發(fā)生子癇前期=1)，將nesfatin-1(賦值：<8.51=0，≥5.81 ng/ml=1)、miR-1233-3p(賦值：<1.21=0，≥1.21=1)、miR-181b(賦值：≥2.15=0，<2.15=1)作為自變量，納入二分類多因素 logistic回歸模型分析。結(jié)果顯示，nesfatin-1、miR-1233-3p、miR-181b為妊娠期高血壓疾病發(fā)生危險(xiǎn)因素(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表1 各組血清nesfatin-1、miR-1233-3p、miR-181b表達(dá)對(duì)比

表2 nesfatin-1、miR-1233-3p、miR-181b與妊娠期高血壓logistic回歸分析

2.4 nesfatin-1、miR-1233-3p、miR-181b相關(guān)性

Pearson相關(guān)性分析，nesfatin-1、miR-1233-3p呈正相關(guān)(r=0.272；P=0.009)；nesfatin-1、miR-181b呈正相關(guān)(r=0.311；P=0.002)；miR-1233-3p、miR-181b呈正相關(guān)(r=0.366；P=0.001)。

3 討論

有學(xué)者認(rèn)為，妊娠期高血壓疾病機(jī)制學(xué)說(shuō)主要包括血管內(nèi)皮受損學(xué)說(shuō)、免疫學(xué)說(shuō)、胎盤缺血、氧化應(yīng)激學(xué)說(shuō)[8-9]。亦有臨床研究指出，妊娠期高血壓體內(nèi)炎癥因子水平高于正常妊娠者，所以有學(xué)者認(rèn)為妊娠期高血壓疾病很可能屬于全身性炎癥疾病[10-11]。

nesfatin-1做為一個(gè)與攝食功能有關(guān)的蛋白，主要起抑制攝食、調(diào)節(jié)肥胖、改善胰島素抵抗效果[12-13]。本研究發(fā)現(xiàn)，nesfatin-1在妊娠期高血壓中呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，原因是nesfatin-1能夠影響胰島素，且當(dāng)出現(xiàn)炎癥反應(yīng)時(shí)，機(jī)體炎癥因子會(huì)使nesfatin-1表達(dá)升高。有臨床研究顯示，nesfatin-1對(duì)心血管有作用，對(duì)側(cè)腦室注射nesfatin-1能顯提高平均動(dòng)脈壓[14]。亦有臨床研究指出，nesfatin-1在妊娠期高血壓中呈高表達(dá)[15]。本研究發(fā)現(xiàn)，妊娠期高血壓患者nesfatin-1水平呈現(xiàn)出高水平，且隨疾病加重水平上升。提示妊娠期高血壓疾病的發(fā)生與血清nesfatin-1水平升高有關(guān)，且升高幅度與疾病嚴(yán)重程度相關(guān)。推測(cè)nesfatin-1參與了妊娠期高血壓的發(fā)生發(fā)展。

miRNA作為一種內(nèi)源性非編碼RNA參與細(xì)胞基因表達(dá)的調(diào)節(jié)而影響生物體生理活動(dòng)。目前臨床外周血中檢測(cè)miRNA，有無(wú)創(chuàng)、簡(jiǎn)便易行、易重復(fù)等特點(diǎn)，能夠成為一種早期發(fā)現(xiàn)一級(jí)診斷的良好生物學(xué)標(biāo)記物[16-17]。有研究顯示，miRNA在維持胎盤正常發(fā)育中發(fā)揮重要作用，其異常表達(dá)可能與妊娠期高血壓的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，有望成為妊娠期高血壓預(yù)后評(píng)估的生物標(biāo)志物以及治療靶點(diǎn)[18]。本研究發(fā)現(xiàn)，miR-1233-3p、miR-181b在妊娠期高血壓疾病中呈現(xiàn)高表達(dá)，可能與miR-1233-3p、miR-181b表達(dá)異常升高，影響到cAMP-PKA信號(hào)通路有關(guān)。有研究顯示，cAMP-PKA信號(hào)通路能夠調(diào)節(jié)胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞分化；miR-181b在妊娠期高血壓疾病中能夠與炎癥因子相互作用，共同參與疾病的發(fā)生發(fā)展[19]；趙影庭等[20]指出，miRNA-1233在妊娠期高血壓患者胎盤中呈現(xiàn)高表達(dá)，與疾病的嚴(yán)重程度具有相關(guān)性；亦有學(xué)者認(rèn)為，妊娠期高血壓患者miR-1233-3p呈現(xiàn)高表達(dá)，能夠作為妊娠期高血壓血清檢測(cè)標(biāo)記物[21]。本研究發(fā)現(xiàn)，miR-1233-3p、miR-181b在妊娠期高血壓疾病中呈現(xiàn)高表達(dá)，且隨病情加重表達(dá)上升，且3者在妊娠期高血壓疾病中呈現(xiàn)正相關(guān)。

綜上所述， nesfatin-1、miR-1233-3p、miR-181b在妊娠期高血壓疾病中呈現(xiàn)高表達(dá)，且隨著病癥加重表達(dá)升高，且呈正相關(guān)關(guān)系。