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    基于揮發(fā)性風(fēng)味成分的湖北綠茶產(chǎn)地判別

    2022-01-08 11:43:44王雪萍鄭鵬程高士偉王勝鵬
    湖北農(nóng)業(yè)科學(xué) 2021年23期
    關(guān)鍵詞:鄂西北茶樣茶區(qū)

    王雪萍,鄭鵬程,高士偉,葉 飛,王勝鵬

    (湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院果樹茶葉研究所/湖北省農(nóng)業(yè)科技創(chuàng)新中心果茶分中心/湖北省茶葉工程技術(shù)研究中心,武漢 430064)

    香氣是綠茶的主要品質(zhì)之一,是決定茶葉品質(zhì)與風(fēng)味的重要因素。茶葉中的揮發(fā)性香氣物質(zhì)主要包括萜烯類及其衍生物、脂肪類衍生物(醇類、醛類、酮類、酯類、酸類等)、芳香族化合物及呋喃、吡啶、吡嗪等其他化合物[1]。不同產(chǎn)地茶葉有其各自香氣品質(zhì)特征,基于香氣組分的多元統(tǒng)計分析可將不同產(chǎn)地茶葉進(jìn)行有效區(qū)分[2-5]。湖北是產(chǎn)茶大省,已形成鄂西武陵山富硒綠茶和宜昌三峽名優(yōu)綠茶及宜紅茶區(qū)、鄂西北秦巴山高香綠茶區(qū)、鄂東大別山優(yōu)質(zhì)綠茶區(qū)、鄂南幕阜山名優(yōu)早茶及邊銷茶區(qū)等四大優(yōu)勢茶區(qū)。本研究對來自湖北不同茶區(qū)具代表性的春季名優(yōu)綠茶,采用頂空-固相微萃取結(jié)合氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法檢測樣品揮發(fā)性香氣組分,再利用SPSS、SIMCA-P 等數(shù)據(jù)分析軟件對不同茶區(qū)綠茶樣品香氣組分進(jìn)行統(tǒng)計分析[6],揭示不同茶區(qū)綠茶樣品香氣組分差異,探討基于揮發(fā)性風(fēng)味組分對湖北不同茶區(qū)綠茶樣品進(jìn)行有效區(qū)分的可行性。

    1 材料與方法

    1.1 材料與儀器

    40 份春季名優(yōu)綠茶分別來自鄂西武陵山及宜昌三峽茶區(qū)的宜昌市7 份、恩施州6 份,鄂西北秦巴山茶區(qū)的襄陽市5 份、十堰市10 份、隨州市3 份,鄂東大別山茶區(qū)的孝感市3 份、黃岡市3 份,鄂南幕阜山茶區(qū)的咸寧市3 份。茶葉生產(chǎn)時間為4 月上旬至中旬,原料嫩度一芽一葉至一芽二葉。

    氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀,美國Agilent公司TRACE GC 2000 聯(lián)TRACE DSQ,固相微萃取(SPME)手柄和50/30 μm DVB/CAR/PDMS萃取頭,美國Supelco公司。

    1.2 方法

    1.2.1 香氣提取及色譜分析條件 稱取5.0 g 磨碎茶樣于萃取瓶中,加入50 mL 沸去離子水,將裝有萃取頭(試驗前需250 ℃老化15 min)的SPME 手持器通過瓶蓋的橡皮墊插入萃取瓶中,50 ℃水浴平衡5 min 后推出纖維頭吸附70 min,最后在氣相色譜-質(zhì)譜(GC-MS)進(jìn)樣口于230 ℃下解吸5 min。

    色譜條件:色譜柱為DB-5MS 毛細(xì)管柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm),不分流進(jìn)樣,柱流速1 mL/min,進(jìn)樣口溫度230 ℃;柱溫50~230 ℃,起始溫度50 ℃,保持5 min,再以2 ℃/min 升至180 ℃,保持1 min,再以10 ℃/min 升到230 ℃,保持1 min。

    質(zhì)譜條件:EI 離子源,電離能70 eV;離子源溫度220 ℃;50~650m/z全掃描;載氣為99.999%的高純氦氣。

    1.2.2 香氣組分定性與定量 采用NIST 譜庫對得到的質(zhì)譜圖進(jìn)行串聯(lián)檢索和人工解析,結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)報道、各香氣組分的相對保留時間等進(jìn)行定性分析,以各香氣組分的峰面積占總峰面積比值的百分?jǐn)?shù)進(jìn)行相對定量。

    1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

    香氣組分差異顯著性分析及逐步判別分析采用SPSS 19.0 數(shù)據(jù)處理軟件[7],不同茶區(qū)的特征性香氣成分分析及偏最小二乘判別分析(PLS-DA)采用SIMCA-P11.5 軟件[8,9]。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 不同茶區(qū)綠茶香氣組分分析

    40 份綠茶樣品中共鑒定出71 種香氣組分(表1),包括醇類10 種、醛類4 種、酮類9 種、酯類11 種、烷烴類5 種、芳香烴類6 種、萜烯類18 種、雜環(huán)類3種、其他5 種。醛類、酯類、烷烴類、芳香烴類、雜環(huán)類物質(zhì)的相對含量在不同茶區(qū)綠茶樣品間差異顯著(P<0.05)。鄂西武陵山及宜昌三峽茶區(qū)綠茶樣品醇類物質(zhì)含量在四大茶區(qū)中最低而烷烴類物質(zhì)含量最高;鄂西北秦巴山茶區(qū)綠茶樣品酮類物質(zhì)和其他類物質(zhì)含量高于其他茶區(qū)綠茶;鄂東大別山茶區(qū)綠茶樣品醇類、醛類、酯類和雜環(huán)類含量高于其他茶區(qū)綠茶,而烷烴類、芳香烴類、萜烯類和其他類物質(zhì)含量低于其他茶區(qū)綠茶;鄂南幕阜山茶區(qū)綠茶樣品芳香烴類、萜烯類物質(zhì)含量高于其他茶區(qū)綠茶,醛類、酮類、雜環(huán)類物質(zhì)含量低于其他茶區(qū)綠茶樣品。

    表1 不同茶區(qū)綠茶香氣組分及相對含量(單位:%)

    續(xù)表1

    2.2 香氣組分判別分析

    2.2.1 偏最小二乘判別分析(PLS-DA)采用SIMCA-P11.5 對40 份綠茶樣品香氣組分進(jìn)行偏最小二乘判別分析,以71 個揮發(fā)性組分的相對含量為自變量,建立PLS-DA 模型(擬合參數(shù)為R2Y=0.711,Q2=0.405)。由PLS-DA 得分(圖1)可知,鄂東大別山茶區(qū)的茶樣和其他茶區(qū)的茶樣可明顯區(qū)分,鄂西武陵山及宜昌三峽茶區(qū)、鄂西北秦巴山茶區(qū)的茶樣存在部分交叉,鄂南幕阜山茶區(qū)的茶樣則與鄂西武陵山及宜昌三峽茶區(qū)、鄂西北秦巴山茶區(qū)的茶樣無法區(qū)分開。將建立模型時的因變量隨機排列200 次,Q2回歸直線與Y 軸的截距為-0.290,R2=0.608,該判別模型不存在過擬合現(xiàn)象。

    圖1 PLS-DA 得分

    PLS-DA 變量投影重要度(VIP)值可量化每個變量對分類貢獻(xiàn)的大小,值越大表示貢獻(xiàn)越大,VIP值大于1的變量屬于分類鑒定中的重要標(biāo)記指標(biāo)[10]。71 種揮發(fā)性組分中28 個揮發(fā)性物質(zhì)VIP>1.0,可作為區(qū)分不同茶區(qū)綠茶香氣特征的標(biāo)志物,其中序號為28、27、36、37、64、39、31、5、38的9 個揮發(fā)性物質(zhì)變量VIP 值大于1.5。從PLS-DA 載荷(圖2)可知,十三烷、十四烷、十七烷、十五烷、2-正戊基呋喃可作為鄂西武陵山及宜昌三峽茶區(qū)綠茶的特征揮發(fā)性組分;鄰氨基苯甲酸甲酯、2,4-二甲氧基甲苯、苯乙氰可作為鄂西北秦巴山茶區(qū)綠茶的特征揮發(fā)性組分;香葉醇、藏紅花醛、丁酸-反-2-已烯酯、順-3-已烯乙酸酯、已酸-3-已烯酯、鄰苯二甲酸二丁酯可作為鄂東大別山茶區(qū)綠茶的特征揮發(fā)性組分。

    圖2 PLS-DA 因子載荷

    2.2.2 逐步判別分析 采用SPSS 軟件對不同茶區(qū)綠茶香氣組分進(jìn)行逐步判別分析,依次篩選出貢獻(xiàn)率較大的13 個判別指標(biāo):橙花醇(X1)、順-橙花叔醇(X2)、鄰氨基苯甲酸甲酯(X3)、二十烷(X4)、2-乙基-4,5-二甲基噻唑(X5)、吲哚(X6)、香葉醇(X7)、植醇(X8)、丁酸-反-2-已烯酯(X9)、順-3-已烯乙酸酯(X10)、2-甲基奈(X11)、檸檬烯(X12)、δ-杜松烯(X13),建立不同產(chǎn)區(qū)綠茶判別模型。

    提取模型前3 個典型判別函數(shù)F1、F2、F3,特征值分別為37.144、3.686、2.476,方差貢獻(xiàn)率分別為85.80%、8.50%、5.70%,對判別函數(shù)的統(tǒng)計學(xué)意義進(jìn)行檢驗,P<0.01。以40 個樣品的前兩個判別函數(shù)得分作散點(圖3),4 個不同茶區(qū)的綠茶樣品能較好地分開。對樣品進(jìn)行回代檢驗和交叉檢驗分析,回代檢驗判別率為100.00%,交叉檢驗判別率97.50%(表2)。

    表2 不同產(chǎn)區(qū)綠茶產(chǎn)地判別分析結(jié)果

    圖3 判別函數(shù)1、2 得分散點

    3 結(jié)論

    采用SPME/GC-MS 方法,從湖北4 大茶區(qū)40 份春季名優(yōu)綠茶中共鑒定出71 種揮發(fā)性香氣化合物。采用偏最小二乘判別分析鑒定出鄂西武陵山及宜昌三峽茶區(qū)綠茶樣品特征揮發(fā)性組分為十三烷、十四烷、十七烷、十五烷、2-正戊基呋喃;鄂西北秦巴山茶區(qū)綠茶樣品特征揮發(fā)性組分為鄰氨基苯甲酸甲酯、2,4-二甲氧基甲苯、苯乙氰;鄂東大別山茶區(qū)綠茶樣品特征揮發(fā)性組分為香葉醇、藏紅花醛、丁酸-反-2-已烯酯、順-3-已烯乙酸酯、已酸-3-已烯酯、鄰苯二甲酸二丁酯。不同茶區(qū)綠茶樣品的特征揮發(fā)性組分在其茶區(qū)綠茶樣品中的含量明顯高于其他茶區(qū)。

    偏最小二乘判別分析可將不同茶區(qū)綠茶樣品初步區(qū)分,逐步判別分析能較好地將不同茶區(qū)樣品區(qū)分開,區(qū)分判別效果優(yōu)于偏最小二乘判別分析。逐步判別分析篩選的用于不同茶區(qū)綠茶判別的13 個香氣組分中,順-橙花叔醇、鄰氨基苯甲酸甲酯等9個香氣組分在偏最小二乘判別分析中的VIP 值大于1.0,橙花醇、吲哚、2-甲基奈、檸檬烯4 個香氣組分的VIP 值小于1.0。在進(jìn)行判別分析時,可采用多種判別分析方法,本研究利用逐步判別分析可對不同茶區(qū)綠茶樣品進(jìn)行有效區(qū)分,結(jié)合偏最小二乘判別分析得出不同茶區(qū)的特征性香氣組分。

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