枸櫞酸奧芬那君緩釋片的制備及體外釋放研究

邵夢俠，胡華勝，余泓，王蓉玲，熊依銘，金牮*（.江蘇海洋大學(xué)藥學(xué)院，江蘇 連云港 005；.江蘇諦奇醫(yī)藥科技有限公司，江蘇 徐州 006）

奧芬那君是一種中樞作用（腦干）化合物，是抗組胺藥苯海拉明的同系物，具有較弱的抗組胺和局部麻醉作用[1-2]，多以鹽酸鹽和枸櫞酸鹽的形式應(yīng)用于臨床。目前，奧芬那君枸櫞酸鹽主要用于緩解骨骼肌痙攣引起的疼痛，其治療作用方式尚未明確，可能與其鎮(zhèn)痛特性有關(guān)[3-4]。

枸櫞酸奧芬那君是一種白色或近乎于白色的結(jié)晶粉末，略溶于水，微溶于乙醇。枸櫞酸奧芬那君緩釋片原研制劑由德國3M公司開發(fā)，規(guī)格為100 mg，商品名為Norflex。Norflex口服后，2 h達到最大血漿濃度，生物利用度約為81%，消除半衰期為14 h。

目前全球共有5個枸櫞酸奧芬那君緩釋片仿制產(chǎn)品在售，中國尚無枸櫞酸奧芬那君緩釋片原研進口或仿制產(chǎn)品上市，其在國內(nèi)有很大的研究價值。此外，國內(nèi)外也無關(guān)于該品緩釋片的工藝研究及體外評價方面的文獻報道。一般來說，藥物的體外溶出情況可有效反映其在體內(nèi)的吸收情況，對判斷藥物的體內(nèi)生物利用度和生物等效性（BE）具有一定的意義。將仿制藥和原研藥的釋放曲線進行對比，若兩者在多個pH釋放介質(zhì)中的相似因子f2值均大于50，則表明兩者相似；f2值越趨近于100，表明兩者相似度越高，仿制藥的BE試驗成功率也會越高[5-7]。

因此，本研究使用體外釋放曲線和相似因子評價法評估自制枸櫞酸奧芬那君緩釋片與原研緩釋片體外釋放行為的一致性，以期為BE試驗提供數(shù)據(jù)支持。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

高效液相色譜儀，包括LC-20AD高壓恒流泵和SPD-20A紫外檢測器（日本島津株氏會社）；ZRS-8GD智能溶出實驗儀、YD-35型片劑硬度測試儀（天津天大天發(fā)科技有限公司）；Mettler XSE105型電子分析天平、FE28-Standard pH計（梅特勒-托利多儀器有限公司）；FA2004電子天平（上海上平儀器有限公司）；DP30A單沖壓片機（北京國藥龍立科技有限公司）。

1.2 試藥

枸櫞酸奧芬那君原料藥（湖北信康醫(yī)藥化工有限公司，批號：20200623，含量：100.04%）；原 研 藥 品Norflex（德 國3M公 司，批 號：04150007288423，規(guī)格：100 mg）；乙基纖維素（EC，美國亞什蘭集團，N100，批號：45399；N50，批號：NPE-0041）；乳糖（德國DFE化工有限公司，批號：1011BD0）；硬脂酸鎂（安徽山河藥用輔料股份有限公司，批號：20191008）；阿拉伯膠（上海泰坦科技股份有限公司，批號：P1651500）；膠態(tài)二氧化硅（德固賽化學(xué)有限公司，批號：157091516）；無水乙醇（上海泰坦科技股份有限公司，批號：P1702475）；冰醋酸、醋酸鈉、鹽酸、氫氧化鈉、磷酸二氫銨均為分析純；乙腈、磷酸為色譜純；水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色 譜 柱：InertSustainTMC18色 譜 柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；柱溫：40℃；檢測波長：225 nm；流動相：乙腈-5.8 g·L－1磷酸二氫銨水溶液（磷酸調(diào)節(jié)至pH 3.0）＝30∶70；流速：2.0 mL·min－1；進樣量：20 μL。

2.2 釋放度測定法

參考美國藥典（USP）40版收錄的枸櫞酸奧芬那君緩釋片釋放度測定方法[8]，分別以900 mL的pH 1.0鹽酸溶液（以下簡稱pH 1.0）、pH 4.5醋酸鹽溶液（以下簡稱pH 4.5）、pH 6.8磷酸鹽溶液（以下簡稱pH 6.8）、水作為釋放介質(zhì)，溫度為（37±0.5）℃，轉(zhuǎn)速為50 r·min－1。于1、2、4、6、12 h取樣5.0 mL，并立即補進5.0 mL的釋放介質(zhì)。取樣經(jīng)0.45 μm微孔濾膜濾過，HPLC法測定續(xù)濾液中枸櫞酸奧芬那君的含量，計算枸櫞酸奧芬那君緩釋片在不同時間的平均累積釋放度。

2.3 相似因子f2評價法

采用非模型依賴的相似因子f2評價自研制劑與原研制劑體外釋放行為的相似性[9]。相似因子f2的計算公式如下：

式中：n為取樣時間點個數(shù)，Rt為原研制劑在t時刻的釋放度值，Tt為自研制劑在t時刻的釋放度值，若f2大于50，則兩制劑體外溶出相似，若f2小于50，則兩制劑體外溶出不相似。自研或原研制劑的藥物累積釋放度在85%以上的取樣點不多于1個。

2.4 枸櫞酸奧芬那君緩釋片制備

2.4.1 制備方法 稱取處方量的原料藥、乳糖、EC、阿拉伯膠、硬脂酸鎂，備用；將EC和無水乙醇按照1∶3.5的比例混合制備黏合劑，備用；將原料藥、乳糖、阿拉伯膠過40目篩，加入黏合劑制濕粒；于60℃條件下干燥3 h，20目篩整粒；加入硬脂酸鎂作為潤滑劑，混合均勻；壓片，即得。本品每片約含主藥枸櫞酸奧芬那君100 mg，片重約為300 mg。

2.4.2 處方篩選 基于與原研處方輔料組成保持一致的原理，通過預(yù)試驗對填充劑、黏合劑等進行初步考察，確定了處方1（溶出行為與原研制劑一致，可保持12 h內(nèi)片劑外觀完整不崩散），處方組成見表1。

2.4.3 EC用量考察 緩釋材料的用量是決定藥物釋放速度的重要因素，故以處方1為基礎(chǔ)，以相似因子及溶出行為為評價指標，進一步考察EC的用量。選用 EC N100作為緩釋骨架材料，制備4個處方（見表1，處方1～處方4），考察其他組分不變時，EC不同用量對藥物釋放的影響。按“2.2”項下方法測定釋放度，釋放介質(zhì)為水，并計算自研制劑與Norflex釋放行為的相似因子f2。結(jié)果見表2。

表2 不同處方在水中的釋放度(n＝6) Tab 2 Release of different prescriptions in water (n＝6)

結(jié)果顯示，處方4的f2值最大，為79.14，表明處方4制備的緩釋片與Norflex的釋藥行為最相似。因此，將EC的用量定為24 mg。

2.4.4 EC黏度考察 不同EC黏度會影響藥物的釋放機制，考察EC N50（處方5）、EC N100（處方4）兩種黏度對藥物釋放的影響，處方組成見表1。因為不同黏度的EC在酸性溶液中的穩(wěn)定性不同，故同時測定其在水和pH 1.0介質(zhì)中的釋放度，并計算自研制劑與Norflex釋放行為的相似因子f2。結(jié)果見表3。

表1 枸櫞酸奧芬那君緩釋片的單劑量處方組成(mg) Tab 1 Single-dose prescription composition of orphenadrine citrate sustained-release tablet (mg)

表3 處方4和處方5在水和pH 1.0介質(zhì)中的釋放度(n＝6) Tab 3 Release of prescription 4 and prescription 5 in water and pH 1.0 medium (n＝6)

結(jié)果表明，處方4、處方5在水和pH 1.0介質(zhì)中的f2值均大于70，但是在藥物釋放過程中觀察到處方5制備的緩釋片在pH 1.0介質(zhì)中于6 h后均崩散，與Norflex（緩釋片完整）不一致。EC作為緩釋骨架的釋藥機制是溶液穿透骨架，將藥物溶解，藥物隨之從骨架的孔隙中擴散出來，骨架控制藥物的釋放[10]。然而，不同黏度的 EC生成骨架的穩(wěn)固程度不同，一般黏度越高，骨架越穩(wěn)固。處方5中使用的EC N50黏度較小，在酸性介質(zhì)中無法長時間保持骨架完整而崩解，因此無法有效控制藥物的釋放；處方4中使用的EC N100黏度較大，能夠在酸性溶液中長時間形成穩(wěn)固的骨架，保持片劑完整，因此擬定EC黏度為N100。

2.4.5 助流劑考察 由于二氧化硅親水，具有一定的促進崩解和溶出的作用可作為助流劑[11]，因此制備處方6，考察膠態(tài)二氧化硅對藥物釋放的影響。按“2.2”項下方法進行釋放度測定，釋放介質(zhì)為水，并計算自研制劑與Norflex釋放行為的相似因子f2。結(jié)果見表4。

表4 處方4和處方6在水介質(zhì)中的釋放度(n＝6) Tab 4 Release of prescription 4 and prescription 6 in aqueous medium (n＝6)

結(jié)果顯示，處方4、處方6的f2值差異較小，表明加入1.5 mg的膠態(tài)二氧化硅對枸櫞酸奧芬那君的釋放無顯著性影響；又因本品中原料藥占比較大，所以為了工業(yè)化生產(chǎn)中能夠保證物料流動的順暢性，最終選擇處方中加入1.5 mg膠態(tài)二氧化硅。

2.4.6 最優(yōu)化處方 根據(jù)上述對EC用量、黏度及助流劑的篩選，最終得到最優(yōu)處方（見表5）。

表5 枸櫞酸奧芬那君緩釋片最優(yōu)處方 Tab 5 Optimal prescription of orphenadrine citrate sustainedrelease tablets

2.5 質(zhì)量屬性比較研究

按照2020年版《中國藥典》品種項下質(zhì)量標準對自研制劑和Norflex進行檢驗，結(jié)果見表6。

表6 不同緩釋片的質(zhì)量屬性 Tab 6 Quality attributes of different sustained-release tablets

結(jié)果表明，兩種制劑的關(guān)鍵質(zhì)量屬性具有一致性。自研制劑與原研制劑的外觀性狀、物理屬性一致；自研制劑最大單雜和總雜均不大于原研制劑；自研制劑與原研制劑的含量差異在±2%之內(nèi)?！兑运巹訉W(xué)參數(shù)為終點指標的化學(xué)藥物仿制藥人體生物等效性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》建議，口服固體制劑進行BE研究時，受試制劑與參比制劑的含量差異不應(yīng)超過±5%，否則會導(dǎo)致BE結(jié)果出現(xiàn)大的偏差。本研究控制自研制劑與參比制劑（原研制劑）含量差異在±2%，能更好地體現(xiàn)出釋放曲線數(shù)據(jù)的準確性，以指導(dǎo)后期的BE評價。

2.6 釋放曲線比較研究

取自研制劑和Norflex各6片，按“2.2”項下方法測定釋放度，其在水和pH 1.0、pH 4.5、pH 6.8與Norflex的f2分別為76.69、84.17、88.47、91.05，結(jié)果見圖1～4。

圖1 不同緩釋片在水中的釋放曲線Fig 1 Release profile of different sustained-release tablets in water

圖2 不同緩釋片在pH 1.0介質(zhì)中的釋放曲線Fig 2 Release profile of different sustained-release tablets in pH 1.0 medium

結(jié)果顯示，自研制劑和Norflex在0～12 h內(nèi)均保持片劑外觀完整、不崩散，在水、pH 1.0、pH 4.5和pH 6.8介質(zhì)中的溶出行為相似，以兩種制劑在水介質(zhì)中的溶出行為為示例（如圖5所示），表明本產(chǎn)品與Norflex的制備工藝基本一致；另外，自研制劑和Norflex在水、pH 1.0、pH 4.5和pH 6.8介質(zhì)中的釋放曲線基本重合，表明兩種制劑在4種介質(zhì)中的釋放行為相似。

圖3 不同緩釋片在pH 4.5介質(zhì)中的釋放曲線Fig 3 Release profile of different sustained-release tablets in pH 4.5 medium

圖4 不同緩釋片在pH 6.8介質(zhì)中的釋放曲線Fig 4 Release profile of different sustained-release tablets in pH 6.8 medium

圖5 不同緩釋片在水介質(zhì)中的溶出現(xiàn)象Fig 5 Dissolution appearance of different sustained-release tablets in aqueous medium

2.7 釋藥機制研究

采用模型擬合來判斷自研制劑與原研制劑的釋放機制是否相同，以此判斷兩者釋放行為的相似性，從而為BE試驗提供參考。根據(jù)優(yōu)化后的處方，將自研制劑和原研制劑的釋放度按零級、一級、Higuchi和Ritger-Peppas模型進行擬合，根據(jù)R2判斷其擬合程度，R2越大，擬合效果越好[12-13]。擬合結(jié)果如表7所示。

表7 不同緩釋片在水中釋放模型擬合 Tab 7 Fitting the release model of different sustained-release tablets in water

由表7可以看出，自研制劑與原研制劑釋放動力學(xué)方程均符合Higuchi方程，Ritger-Peppas擬合方程的釋放系數(shù)n值均小于0.43，說明自研制劑與原研制劑都是以fick擴散為主[14]，釋藥機制相同。

3 討論

EC是將纖維素鏈中的部分羥基用乙氧基取代的纖維素衍生物，其具有無毒、水不溶、多黏度等特性，在藥物制劑中常被用作緩控釋制劑的骨架材料；同時，EC可溶于乙醇制成黏合劑，作為水溶性藥物緩控釋制劑的黏合劑。EC是既不溶解也不溶蝕的材料，其在骨架片中的釋藥機制是液體穿過骨架孔隙，將藥物溶解然后從骨架的孔隙中擴散出來，藥物在釋放的全過程中，EC骨架保持完整，幾乎不會發(fā)生任何改變。EC所制備的骨架片釋藥動力學(xué)方程一般符合Higuchi方程。本文對枸櫞酸奧芬那君緩釋片關(guān)鍵輔料EC的用量及黏度進行了篩選。不同黏度的EC制得的緩釋骨架牢固度不同；低黏度的EC制備的緩釋骨架牢固度低于高黏度的EC。EC用量是決定藥物釋放速度的關(guān)鍵因素，當EC的用量足夠形成緩釋骨架時，隨著EC用量的增加，孔隙率逐漸減小，藥物釋放速度逐漸減慢。

通過對自研制劑和原研制劑的關(guān)鍵質(zhì)量屬性進行考察，發(fā)現(xiàn)兩種制劑的關(guān)鍵質(zhì)量屬性具有一致性。通過對自研制劑進行體外評價，發(fā)現(xiàn)自研制劑與原研制劑在pH 1.0、pH 4.5、pH 6.8和水介質(zhì)中溶出行為一致，釋放曲線基本重合，相似因子f2值均大于70；結(jié)合Ritger-Peppas擬合方程的釋放系數(shù)n值均小于0.43，確定自研制劑和原研制劑的釋放機制均以fick擴散為主，說明自研制劑與原研制劑在這4種釋放介質(zhì)中具有相似的釋藥行為，這將為本品在人體內(nèi)的BE試驗提供依據(jù)。