畜禽腸桿菌科細(xì)菌分離鑒定及藥敏試驗(yàn)

魏甜甜

（青島市即墨區(qū)畜牧業(yè)發(fā)展服務(wù)中心，山東 青島 266200）

腸桿菌科的細(xì)菌在動(dòng)物養(yǎng)殖方面主要可致化膿性疾病、肺炎、腦膜炎、敗血癥、心包炎、氣囊病等疾病[1-3]。腸桿菌科中某些細(xì)菌是引起動(dòng)物各種感染的重要病原[3]。隨著抗菌藥物廣泛使用，隨之很快導(dǎo)致細(xì)菌抗藥性產(chǎn)生等問(wèn)題。選擇抗菌藥物時(shí)避免同一藥物連續(xù)使用。要采取交替或者輪換的藥物使用方法。如用于治療敗血癥、心包炎、氣囊病的藥物較多，如氨芐青霉素、金霉素、凝霉素、慶大霉素、及磺胺類藥物[4]。大腸桿菌對(duì)慶大霉素、環(huán)丙沙星、新霉素等抗菌藥敏感，可以用抗生素進(jìn)行治療[5]。

1 材料與方法

1.1 病料采集

對(duì)病死豬、雞、鴨和鵝的病變組織進(jìn)行剖檢，一共采集8 份樣品，包括肝臟、心臟、肺臟等器官，4 種畜禽，各采集2 份樣品。組織放入滅菌的塑料包中，置4 ℃ 冰箱中保存以便備用[6]。

1.2 試驗(yàn)方法

無(wú)菌取病料挑菌接種于培養(yǎng)基做好標(biāo)記，恒溫環(huán)境中培養(yǎng)24 h，對(duì)分離菌株進(jìn)行革蘭氏染色后進(jìn)行鏡檢。取4 % DE1KOH 溶液10 μl 滴于潔凈的玻璃片上，接種環(huán)挑取數(shù)個(gè)菌落與KOH 溶液充分混勻，上提接種環(huán)，觀察是否出現(xiàn)3～9 mm 的拉絲的現(xiàn)象。對(duì)細(xì)菌分別進(jìn)行枸櫞酸鹽瓊脂斜面接種、五糖發(fā)酵管接種以及吲哚實(shí)驗(yàn)、MR 實(shí)驗(yàn)、VP 等實(shí)驗(yàn)[7-9]。

2 結(jié)果與分析

2.1 菌株采集分離和培養(yǎng)

麥康凱培養(yǎng)皿上共有8 種菌生長(zhǎng)，平板均生長(zhǎng)黃色及紅色兩種顏色菌落，分別挑取這兩種顏色的菌落在培養(yǎng)基上進(jìn)行2 次劃線分離。分離細(xì)菌在麥康凱培養(yǎng)基37 ℃ 恒溫培養(yǎng)24 h 后，部分形成桃紅色、光滑、中等大小的菌落，部分形成黃色半透明菌落，部分沒(méi)有細(xì)菌生長(zhǎng)。最終從4個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)，8 份樣本中，分離到8 株腸桿菌。

2.2 革蘭氏染色

將所有菌株進(jìn)行革蘭氏染色后發(fā)現(xiàn)，在鏡下觀察到短小的、淡紅色的桿狀細(xì)菌，確定8 株菌株均為革蘭陰性菌。

2.3 拉絲實(shí)驗(yàn)

結(jié)果如表1 所示，除鵝1 一株菌拉絲成陽(yáng)性外，其余菌株均出現(xiàn)拉絲情況，表明除鵝1 為革蘭氏陽(yáng)性菌，其余均為革蘭氏陰性菌。

表1 拉絲實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.4 生化實(shí)驗(yàn)

試驗(yàn)分離培養(yǎng)菌株豬1-2、雞1-2、鵝2 為大腸桿菌。分離菌株鴨2 為沙門(mén)氏菌。鵝1 不利用乳糖，I、M、V、C 為“++--”，符合志賀氏菌的特征。鴨1 利用乳糖，I、M、V、C 為“++-+”，符合變形桿菌特征。

2.5 藥敏試驗(yàn)

藥敏結(jié)果顯示，8 株腸桿菌分離株對(duì)15 種抗生素耐藥率在0 %～ 100 %。2 株雞源及2 株豬源細(xì)菌對(duì)青霉素、阿莫西林素等藥物的耐藥率達(dá)90 % 以上。2 株鴨源細(xì)菌對(duì)青霉素、氨芐西林等藥物的耐藥率達(dá)90 % 以上。2 株鵝源細(xì)菌對(duì)林可霉素、阿莫西林等藥物的耐藥率達(dá)95 % 以上。對(duì)15 種抗生素均耐藥的菌株為5 株，對(duì)12種抗生素耐藥的菌株為7 株，其多重耐藥率為87.5 %。

表2 革蘭氏染色及生化實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表3 菌株的藥物敏感性（抑菌圈直徑）測(cè)定 （mm）

3 討論與結(jié)論

本試驗(yàn)為了解青島地區(qū)腸桿菌耐藥性，共采集4 個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)內(nèi)8 份病料，經(jīng)過(guò)生化實(shí)驗(yàn)等試驗(yàn)分離出8 株腸桿菌。試驗(yàn)表明鴨和鵝分離菌株抗藥性以高度敏感為主，多粘菌素B 以中度敏感為主，林可霉素、青霉素、氨芐西林和阿莫西林以低度敏感為主。豬和雞的分離菌株耐藥性高，與養(yǎng)殖場(chǎng)內(nèi)過(guò)度使用抗生素藥物有關(guān)。15 種抗生素藥物種僅有多粘菌素B 以中度敏感為主，這可能與養(yǎng)殖場(chǎng)中更少使用這類抗生素有關(guān)。多重耐藥腸桿菌的出現(xiàn)對(duì)生物衛(wèi)生造成威脅，本試驗(yàn)表明養(yǎng)殖場(chǎng)中87.5 % 腸桿菌呈多重耐藥。

抗生素發(fā)現(xiàn)之前，細(xì)菌引起的疾病對(duì)畜牧業(yè)生產(chǎn)造成主要威脅[11-13]。由于抗生素的大量使用，動(dòng)物發(fā)病和死亡率明顯下降。隨著抗生素大量使用，特別是越來(lái)越多抗生素濫用問(wèn)題產(chǎn)生，細(xì)菌對(duì)抗生素敏感度越來(lái)越低，細(xì)菌對(duì)抗生素產(chǎn)生了抗藥性[14-15]。腸桿菌科細(xì)菌是動(dòng)物腸道內(nèi)的常在菌，也是非常敏感的菌株。腸桿菌病的產(chǎn)生與養(yǎng)殖場(chǎng)內(nèi)的飼養(yǎng)管理、合理用藥等因素有密切的關(guān)系，因此，臨床防治腸桿菌病，不僅要注意抗生素藥物使用劑量等，養(yǎng)殖場(chǎng)還應(yīng)注意飼養(yǎng)管理，不混群飼養(yǎng)，同時(shí)增強(qiáng)消毒意識(shí)，從而降低環(huán)境中致病菌的產(chǎn)生，減少致病菌對(duì)動(dòng)物機(jī)體的侵害。