帶狀皰疹T淋巴細胞亞群變化與Fas、FasL表達關系的研究

茅榮鑫 胡慶 劉展菱 劉開玲 黃琬茶 張浦 劉秋萍

【摘要】目的 探討帶狀皰疹（HZ）患者T淋巴細胞亞群變化及其與Fas、Fasl表達的相關性。方法 選取2018年6月～2018年12月本院收治的HZ患者40例，采用流式細胞儀檢測外周血T淋巴細胞亞群及淋巴細胞Fas、Fasl表達水平，選取40例健康體檢者作為對照組。結果 HZ患者外周血CD8+表達水平（31.11±5.72 %）顯著高于對照組（26.38±4.71 %），CD4+、CD4+/CD8+表達水平（29.85±3.88%，0.96±0.51）顯著低于對照組（35.62±5.58%，1.26±0.98），差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。相比對照組，HZ患者外周CD4+T淋巴細胞Fas、Fasl表達水平顯著降低，CD8+T淋巴細胞Fas、Fasl表達水平顯著增高，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。HZ患者外周血CD8+表達與CD8+淋巴細胞上的Fas、Fasl表達均呈負相關（P<0.05），CD4+表達與CD4+淋巴細胞上的Fas、Fasl表達均呈負相關（P<0.05）。結論 HZ患者存在T淋巴細胞亞群異常改變，并且可能與Fas/Fasl介導的淋巴細胞凋亡功能紊亂有關。

【關鍵詞】帶狀皰疹;T淋巴細胞亞群;Fas;Fasl

【中圖分類號】R2-06【文獻標識碼】A 【文章編號】2026-5328（2021）10-006-03

帶狀皰疹（HZ）是由水痘-帶狀皰疹病毒（VZV）感染所致，多見于老年人及免疫功能低下者，其所致疼痛嚴重影響患者生活質量[1]。目前，HZ的治療仍無特效手段，臨床療效不理想，主要原因在于其病理機制未得到完全闡明。研究發(fā)現[2]，T淋巴細胞亞群異常與HZ的發(fā)病密切相關，在受到VZV感染時，HZ患者體內T淋巴細胞凋亡增多，使得由T淋巴細胞亞群介導的細胞免疫功能降低。Fas/FasL系統(tǒng)是體內介導細胞凋亡的一對糖蛋白分子，在機體免疫功能調節(jié)上有著重要作用，其表達異常被發(fā)現與多種免疫性疾病的發(fā)生發(fā)展具有關聯性[3-4]。但目前關于帶狀皰疹患者Fas/Fasl表達水平的報道尚少見，尤其是其與T淋巴細胞亞群異常的相關性不明確。為此，本研究旨在觀察帶狀皰疹患者T淋巴細胞亞群及Fas、Fasl的表達情況，并探討二者的相關性。

1 對象與方法

1.1研究對象

選取2018年6月～2018年12月本院收治的HZ患者。納入標準：（1）均經癥狀、體征診斷為HZ;（2）急性期，病程不超過7d;（3）未經相關治療。排除標準：（1）合并嚴重心、肺等系統(tǒng)性疾病者;（2）合并自身免疫性疾病者;（3）伴嚴重中樞神經系統(tǒng)并發(fā)癥;（4）惡性腫瘤患者;（5）其他急慢性感染者;（6）孕婦或哺乳期婦女;（7）合并其他可能影響免疫功能的疾病者。共入組40例，其中男18例，女22例，年齡37～66（52.73±6.83）歲，皮疹部位：頭面6例，四肢13例，軀干21例。另選取同期性別、年齡相匹配的健康體檢者40例作為對照組，其中男20例，女20例，年齡39～67（53.58±6.71）歲，均排除合并急慢性感染、自身免疫系統(tǒng)疾病等。兩組性別、年齡比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。本研究獲得本院倫理審批通過，受試者均簽署知情同意書。

1.2研究方法

1.2.1標本采集

HZ組于就診當天、未采取相關治療措施之前，采集早晨空腹周靜脈血5ml，用肝素鈉抗凝，-80℃環(huán)境下保存待檢。對照組于健康體檢時采集標本。

1.2.2外周血T淋巴細胞亞群表達的檢測

采用美國BD公司FACS Calibur流式細胞儀進行外周血T淋巴細胞的檢測，檢測方法參照文獻[5]中方法。

1.2.3外周血淋巴細胞Fas、Fasl表達的檢測

取2支EP試管A、B;A中加入CD4+、IgG-FITC各10uL;B中加入CD4+、Fas-FITC個10uL;加100uL懸液（細胞濃度為1×106/ml）于A、B中;室溫下避光30min;用1ml PBS洗2次，離心1500r/min 5min;加1%多聚甲醛500uL上機分析 ，上機前先用標準熒光微球對流式細胞儀進行調試，以使各通道變異系數穩(wěn)定在2%以內，記錄CD4+淋巴細胞上Fas的表達情況;同法檢測FasL及CD8+淋巴細胞Fas、Fasl表達情況。

1.3統(tǒng)計學方法

應用SPSS24.0進行統(tǒng)計分析。計數資料比較用x2檢驗計量資料（正態(tài)分布）采?。ǎ┬问奖硎?，用獨立樣本t檢驗進行組間對比;變量之間的相關性分析采用Pearson相關分析;以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 HZ患者外周血T淋巴細胞亞群表達

相比對照組，HZ患者外周血CD8+顯著增高，CD4+及CD4+/CD8+顯著降低，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。見表1。

2.2 HZ患者外周血淋巴細胞Fas、Fasl表達情況

相比對照組，HZ患者外周CD4+T淋巴細胞Fas、Fasl表達水平顯著降低，CD8+T淋巴細胞Fas、Fasl表達水平顯著增高，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。見表2。

2.3 HZ患者外周血T淋巴細胞亞群表達與Fas、Fasl表達的相關性

HZ患者外周血CD8+表達與CD8+淋巴細胞上的Fas、Fasl表達均呈負相關（P<0.05），CD4+表達與CD4+淋巴細胞上的Fas、Fasl表達均呈負相關（P<0.05）。見表3。

3 討論

研究證實[6]，HZ的發(fā)生發(fā)展與機體免疫功能低下緊密關聯，而T細胞介導的細胞免疫在其中發(fā)揮著關鍵作用。在HZ病毒感染過程中，CD4+T細胞的耗竭可致使病毒載量增高。本研究顯示，HZ組外周血CD8+表達顯著增高，CD4+及CD4+/CD8+表達顯著降低，差異有統(tǒng)計學意義，這與既往報道[7]一致，說明HZ患者存在細胞免疫功能低下，表現為CD8+表達增高，CD4+/CD8+比例增高。但帶狀皰疹患者的T淋巴細胞亞群的變化是通過何種機制實現的，目前尚不完全清晰。深入闡述HZ患者T淋巴細胞亞群失衡機制對于臨床防治有著重要意義。

細胞凋亡，是指由基因控制的細胞自主的有序的死亡。細胞凋亡是一個主動過程，涉及一系列基因的激活、表達以及調控等的過程。研究表明[8]，細胞凋亡與免疫性疾病、病毒感染等有著緊密關聯，作為細胞數量減少的關鍵起始程序，其能夠通過調節(jié)T淋巴細胞亞群變化，而影響機體的免疫系統(tǒng)。Fas/FasL系統(tǒng)是體內介導細胞凋亡的一對糖蛋白分子，在免疫系統(tǒng)中發(fā)揮重要的作用。生理狀況下，Fas抗原可廣泛表達于胸腺細胞活化的T 淋巴細胞等免疫細胞表面。在很多免疫相關疾病如系統(tǒng)性紅斑狼瘡[9]、慢性光化性皮炎[10]中，已發(fā)現Fas/FasL與外周血T淋巴細胞亞群失衡有關。但目前關于HZ患者T淋巴細胞亞群失衡與Fas/FasL之間的關系尚無相關報道。本研究顯示，HZ患者外周血淋巴細胞Fas、Fasl表達水平顯著低于對照組，且外周血CD8+表達與CD8+淋巴細胞上的Fas、Fasl表達均呈負相關，CD4+表達與CD4+淋巴細胞上的Fas/Fasl表達均呈負相關，提示HZ患者Fas/Fasl表達異常，并可推測其可能參與了T淋巴細胞亞群失衡過程;外周血CD4+T細胞上Fas、Fasl表達增高，可引起CD4+T細胞凋亡增加，而Fas/Fasl介導的CD8+T細胞的凋亡功能可能受到抑制，即CD8+T細胞的增殖是增加的。本課題前期研究也發(fā)現，HZ患者存在T淋巴細胞亞群失衡，并且可能與Bcl-2調控的細胞凋亡有關[11]。這對于闡述HZ病理機制和指導臨床治療有著重要意義。

綜上，本研究表明，HZ患者外周血存在T淋巴細胞亞群失衡，表現為CD8+表達降低，CD4+和CD4+/CD8+增高;Fas、Fasl異常表達誘導淋巴細胞凋亡功能紊亂可能是導致T淋巴細胞失衡的重要機制;這有助于闡述HZ的病理機制，對臨床診治有重要指導意義。

【參考文獻】

[1]許偉，白明，苗明三. 基于數據挖掘探討中藥外用治療帶狀皰疹用藥規(guī)律[J]. 世界中醫(yī)藥，2020，15（3）：74-77.

[2]靳艷茹，楊帆，劉孝兵，等. 帶狀皰疹患者外周血T淋巴細胞亞群的表達及其與病情嚴重程度的相關性[J]. 臨床誤診誤治，2020，33（2）：101-105.

[3]Jimbo H，Nagai H，Fujiwara S，et al. Fas‐FasL interaction in cytotoxic T cell‐mediated vitiligo：The role of lesional expression of tumor necrosis factor‐α and interferon‐γ in Fas‐mediated melanocyte apoptosis[J]. Experimental Dermatology，2020，29（1）：61-70.

[4]Tan S，Liu X，Chen，et al. Fas/FasL mediates NF-κBp65/PUMA-modulated hepatocytes apoptosis via autophagy to drive liver fibrosis[J]. Cell Death & Disease，2021，12（5）：223-226.

[5]楊令云. T淋巴細胞亞群檢測在口腔扁平苔蘚治療中的應用價值[J]. 實用口腔醫(yī)學雜志，2019，35（3）：424-427.

[6]高燕，陳琪，任夢，等. 水痘-帶狀皰疹病毒糖蛋白E的原核表達及免疫反應初步評價[J]. 國際病毒學雜志，2019，26（2）：108-111.

[7]苗軍，任瑞英，劉海燕. 帶狀皰疹和皰疹后神經痛外周血T淋巴細胞亞群計數與細胞因子表達水平的變化[J]. 腦與神經疾病雜志，2019，27（7）：410-414.

[8]馬麗萍，劉小林，張哲雄，等. LAMA4通過TGF-β1/SMAD路徑調控肝癌細胞免疫逃逸因子及促進肝癌細胞凋亡[J]. 免疫學雜志，2019，35（4）：300-307.

[9]沈敏寧，蘇定雷，季曉輝，等. 系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者CD8^+T細胞亞群Fas-FasL的表達及凋亡的關系研究[J]. 現代免疫學，2009，29（6）：501-504.

[10]呂靜，江陽，劉娟娟. 慢性光化性皮炎患者最小紅斑量和T細胞亞群檢測及臨床療效觀察[J]. 中國皮膚性病學雜志，2018，32（3）：281-286.

[11]茅榮鑫，胡慶，劉展菱，等. 帶狀皰疹T淋巴細胞亞群變化及其與Bcl-2表達的關系[J]. 世界最新醫(yī)學信息文摘（電子版），2020，20（1）：159-160.

基金項目：廣西壯族自治區(qū)衛(wèi)生和計劃生育委員會自籌經費科研課題，Z20180399

第一作者簡介：茅榮鑫（1974-），男，本科，副主任醫(yī)師，主要研究方向為中西醫(yī)結合治療常見病的臨床研究。

通訊作者：胡慶（1990-），男，碩士研究生，醫(yī)師，主要研究方向為中西醫(yī)結合治療常見病的臨床研究。