益智清心顆粒對自發(fā)性高血壓大鼠主要安全性指標(biāo)的影響

郭曼萍，趙俊男，施偉麗，陳 瑤，徐鳳芹，叢偉紅

益智清心顆粒源于清宮壽桃丸，為國醫(yī)大師陳可冀院士臨床治療高血壓、認(rèn)知障礙等疾病的經(jīng)驗方。清宮壽桃丸由人參、天冬、麥冬、枸杞子、地黃、當(dāng)歸、分心木等組成，是乾隆皇帝的宮廷保健養(yǎng)生秘方，陳可冀院士在20世紀(jì)80年代主持挖掘清代宮廷醫(yī)藥檔案時將其整理并用于大眾。相關(guān)研究表明，清宮壽桃丸治療老年認(rèn)知障礙、高血壓、冠心病、糖尿病、脂代謝異常、慢性腎功能不全等方面具有較好的療效[1-6]。

中藥的有效性與安全性問題一直是關(guān)注的熱點。目前，臨床常借助常規(guī)血液學(xué)分析、血液生化檢測、尿樣分析和病理學(xué)檢查等判斷中藥的安全性[7]，血液中溶血相關(guān)指標(biāo)、肝腎功能相關(guān)指標(biāo)是常用的安全性評價指標(biāo)。本研究觀察對自發(fā)性高血壓大鼠(spontaneously hypertensive rats，SHR)給予益智清心顆粒干預(yù)11周后外周血紅細(xì)胞、血紅蛋白、膽紅素、肝腎功能等指標(biāo)改變，探討用藥安全性，以期為臨床應(yīng)用提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗材料及儀器 2 mL乙二胺四乙酸(EDTA)K3采血管，生產(chǎn)批號D160433W；5 mL血清促凝管，生產(chǎn)批號A16013WC，由西苑醫(yī)院提供；全自動生化分析儀(瑞士羅氏公司Cobas8000)、全自動血液分析儀(日本東亞SYSMEX株式會Sysmex XE-5000)由西苑醫(yī)院檢驗科提供。

1.2 實驗動物 12周齡無特定病原體(SPF)級Wistar Kyoto(WKY)大鼠12只，SPF級SHR大鼠60只，雌雄各半，購自北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司。SPF級動物房適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d后分為6組：對照組(WKY大鼠)、模型組(SHR大鼠)、厄貝沙坦+多奈哌齊組(SHR大鼠)、益智清心顆粒低劑量組(SHR大鼠)、益智清心顆粒中劑量組(SHR大鼠)、益智清心顆粒高劑量組(SHR大鼠)，每組12只，雌雄各半。給予規(guī)律光照(晝夜各12 h)，自由飲食飲水，環(huán)境溫度(20±2)℃，相對濕度45%～70%。

1.3 實驗藥物及給藥方法 厄貝沙坦片(安博維)，每片0.15 g，賽諾菲(杭州)制藥有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號：J20130049；鹽酸多奈哌齊(安理申)，每片5 mg，衛(wèi)材(中國)藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號：H20070181；益智清心顆粒(組成：枸杞子、益智仁等)，由中國中醫(yī)科學(xué)院西苑醫(yī)院制劑室提供。厄貝沙坦+多奈哌齊組按厄貝沙坦片15.50 mg/(kg·d)+鹽酸多奈哌齊0.52 mg/(kg·d)灌胃給藥；益智清心顆粒低劑量組、益智清心顆粒中劑量組、益智清心顆粒高劑量組分別按益智清心顆粒1.82 g/(kg·d)、3.64 g/(kg·d)、7.28 g/(kg·d)灌胃給藥，模型組及對照組給予等體積生理鹽水灌胃。所有大鼠均給藥11周。

1.4 觀察指標(biāo)

1.4.1 大鼠體重 各組大鼠每周測量體重1次，觀察各組大鼠體重變化。

1.4.2 大鼠溶血相關(guān)指標(biāo) 實驗結(jié)束后腹主動脈采血，檢測血漿紅細(xì)胞計數(shù)、血細(xì)胞比容、平均紅細(xì)胞體積、紅細(xì)胞體積分布、紅細(xì)胞分布寬度；血紅蛋白、平均血紅蛋白含量、平均血紅蛋白濃度；血清直接膽紅素、間接膽紅素及總膽紅素水平。

1.4.3 大鼠肝腎功能指標(biāo) 實驗結(jié)束后腹主動脈采血，檢測肝功能指標(biāo)：天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、γ谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(γ-GT)；檢測腎功能指標(biāo)：肌酐、尿酸、尿素、尿素氮。

2 結(jié) 果

2.1 藥物對大鼠體重的影響 分別統(tǒng)計雄性和雌性大鼠體重，結(jié)果顯示：與對照組比較，模型組雌鼠體重降低(P<0.01)；與模型組比較，第1周～第4周厄貝沙坦+多奈哌齊組和益智清心顆粒低劑量組、益智清心顆粒高劑量組雌鼠體重增加(P<0.01)。詳見表1。與模型組比較，厄貝沙坦+多奈哌齊組和益智清心顆粒低劑量組、益智清心顆粒中劑量組、益智清心顆粒高劑量組雄鼠體重增加(P<0.05或P<0.01)。詳見表2。

表1 各組雌鼠體重比較(±s) 單位：g

表2 各組雄鼠體重比較(±s) 單位：g

2.2 益智清心顆粒對溶血相關(guān)指標(biāo)的影響 與對照組比較，模型組紅細(xì)胞分布寬度降低(P<0.01)。詳見表3。與模型組比較，益智清心顆粒低劑量組平均血紅蛋白濃度降低(P<0.05)。詳見表4。與對照組比較，模型組間接膽紅素水平升高(P<0.05)；與模型組比較，益智清心顆粒高劑量組間接膽紅素、直接膽紅素、總膽紅素水平降低(P<0.05或P<0.01)。詳見表5。

表3 各組大鼠紅細(xì)胞相關(guān)指標(biāo)比較(±s)

表4 各組大鼠血紅蛋白相關(guān)指標(biāo)比較(±s)

表5 各組大鼠膽紅素相關(guān)指標(biāo)比較(±s) 單位：μmol/L

2.3 藥物對大鼠肝功能的影響 與對照組比較，模型組AST、γ-GT水平升高(P<0.01)。詳見表6。

表6 各組大鼠肝功能指標(biāo)比較(±s) 單位：U/L

2.4 藥物對大鼠腎功能的影響 與對照組比較，模型組尿素氮、尿酸水平升高(P<0.01)。詳見表7。

表7 各組大鼠腎功能指標(biāo)比較(±s)

3 討 論

目前，我國中醫(yī)藥事業(yè)發(fā)展迅速，同時中藥的安全性問題備受關(guān)注[8]。傳統(tǒng)觀念認(rèn)為中藥是天然的、無毒副作用，近年來發(fā)生的中草藥不良反應(yīng)給人們帶來疑惑和憂慮，因此需要科學(xué)評價中藥療效。益智清心顆粒具有補腎生精、清心肝之火的功效，陳可冀院士臨床主要用于高血壓病、老年性癡呆等心腦血管疾病的治療。相關(guān)研究表明，SHR可作為認(rèn)知功能紊亂治療藥物的動物模型[9-12]。本研究以SHR為動物模型，給藥11周后觀察益智清心顆粒對SHR紅細(xì)胞、血紅蛋白、血清膽紅素指標(biāo)的影響，同時監(jiān)測肝、腎功能相關(guān)指標(biāo)。

溶血為紅細(xì)胞完整性損害。紅細(xì)胞功能障礙與心血管疾病嚴(yán)重并發(fā)癥密切相關(guān)，如高血壓、出血、腦卒中、心律失常和炎癥，尤其是老年病人[13]。血紅蛋白在血管內(nèi)溶血期間從細(xì)胞釋放到血漿中，通過促進血小板聚集和黏附，增加血液黏度，導(dǎo)致微循環(huán)功能障礙，增加外周阻力，致血壓升高[14]。血清膽紅素包括直接膽紅素和間接膽紅素，主要是由體內(nèi)衰老的紅細(xì)胞發(fā)生裂解釋放出的血紅蛋白產(chǎn)生[15]。機體總膽紅素及直接膽紅素濃度升高反映較嚴(yán)重的肝細(xì)胞損害[16-18]。本研究結(jié)果顯示，與模型組比較，益智清心顆粒低劑量組平均血紅蛋白濃度降低(P<0.05)，益智清心顆粒高劑量組膽紅素相關(guān)指標(biāo)水平降低(P<0.05)；提示服用益智清心顆粒未導(dǎo)致明顯溶血反應(yīng)，平均血紅蛋白濃度、膽紅素相關(guān)指標(biāo)水平下降可能是益智清心顆粒的藥效作用。

藥物常見的不良反應(yīng)是對肝腎功能的影響[19-20]。本研究結(jié)果顯示，模型組AST、γ-GT、尿酸、尿素氮水平較對照組升高，提示隨著血壓升高，模型組肝腎功能出現(xiàn)一定損傷；益智清心顆粒組與模型組ALT、AST、γ-GT、尿素、尿素氮、肌酐、尿酸水平比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，提示給予益智清心顆粒治療未加重SHR肝腎損害。

本研究中益智清心顆粒高劑量組、益智清心顆粒低劑量組雌鼠體重與益智清心顆粒高劑量組、益智清心顆粒中劑量組、益智清心顆粒低劑量組雄鼠體重較對照組升高，可能與給予益智清心顆粒治療降低了SHR自發(fā)性活動有關(guān)[21]。

綜上所述，經(jīng)過11周的益智清心顆粒灌胃給藥，SHR肝腎功能未見明顯異常，且未發(fā)生溶血反應(yīng)，說明益智清心顆粒具有一定的安全性。本研究給予益智清心顆粒治療未發(fā)現(xiàn)明顯不良反應(yīng)，以上數(shù)據(jù)為益智清心顆粒在高血壓合并認(rèn)知障礙的臨床應(yīng)用提供了依據(jù)。