用HPLC法測(cè)定紅茴香注射液中槲皮苷的含量

成 程，陳向梅，馬 健，趙 氚 （中國(guó)人民解放軍總醫(yī)院醫(yī)療保障中心藥劑科，北京 100048）

紅茴香注射液是由紅茴香根皮經(jīng)提取制成的滅菌水溶液，具有消腫散瘀，活血止痛作用。臨床用于腰肌勞損，關(guān)節(jié)或肌肉韌帶傷痛等?？傸S酮是紅茴香注射液的主要成分。原標(biāo)準(zhǔn)以蘆丁為對(duì)照品，采用紫外分光光度法測(cè)定總黃酮的量，專屬性不強(qiáng)。故筆者參考《中國(guó)藥典》[1]，以槲皮苷為測(cè)定對(duì)象，采用HPLC法測(cè)定紅茴香注射液中槲皮苷的含量[2-5]獲得滿意結(jié)果, 現(xiàn)報(bào)告如下。

1 儀器和試藥

1.1 儀器

Agilent 1100系列型高效液相色譜儀；HPChemstation色譜工作站。

1.2 試藥

乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純。槲皮苷對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供 (批號(hào)：111538-200301，含量測(cè)定用), 紅茴香注射液由浙江泰康藥業(yè)有限公司提供(批號(hào)：20040730)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱為Dikma C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相為乙腈-0.1%磷酸水溶液(25∶75)，流速1.0 ml/min，柱溫 30 °C，檢測(cè)波長(zhǎng)256 nm，進(jìn)樣量為10 μl。色譜柱的理論塔板數(shù)按槲皮苷峰計(jì)算大于3 000。

2.2 溶液制備

2.2.1 對(duì)照品溶液

精密稱取槲皮苷對(duì)照品(120 ℃減壓干燥至恒重)適量, 加甲醇制成每1 ml含0.1 mg 的溶液, 搖勻, 即得。

2.2.2 供試品溶液

精密吸取本品3 ml，置25 ml 量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45 μm)濾過(guò)，取濾液作為供試品溶液。

2.2.3 陰性對(duì)照溶液

取輔料作為缺樣空白樣品，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備。

2.3 專屬性試驗(yàn)

分別取陰性對(duì)照溶液，對(duì)照品溶液及供試品溶液適量，濾過(guò)取續(xù)濾液 10 μl 注入 HPLC 儀，分別記錄色譜圖。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該方法專屬性良好，陰性對(duì)照無(wú)干擾，結(jié)果見(jiàn)圖1。

2.4 線性關(guān)系考察

精密稱取經(jīng)減壓干燥24 h的槲皮苷對(duì)照品適量，加甲醇配成每l ml含槲皮苷0.215 0 mg的對(duì)照品溶液。分別精密吸取對(duì)照品溶液，注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，記錄色譜圖，以槲皮苷峰面積的積分值為Y，進(jìn)樣量為X(μg)，回歸得線性方程Y=1 515.9X+57.088 2，r=0.999 8，表明在0.215～3.225 μg范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。

2.5 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批供試品6份（批號(hào)：20040730），分別按供試品溶液制備法制備，按“2.1”項(xiàng)色譜條件測(cè)定。結(jié)果表明含量值分別為：1.187、1.189、1.197、1.196、1.196、1.198 mg/ml，RSD為0.40%（n=6），表明此方法重復(fù)性較好。

2.6 精密度試驗(yàn)

精密吸取同一供試品溶液（批號(hào)：20040730）10 μl，重復(fù)進(jìn)樣6次, 按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定。峰面積分別為2 214.51、2 217.06、2 232.75、2 236.86、2 250.09、2 190.69，RSD為0.86%（n=6），結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取同一批號(hào)供試品溶液（批號(hào)：20040730）10 μl，分別于0、0.5、1、2、8、12、24 h測(cè)定峰面積值，結(jié)果為2 220.96、2 223.36、2 230.08、2 235.78、2 246.88、2 200.44、2 227.17，平均峰面積為2 226.38，RSD為0.64%（n=6），結(jié)果表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 加樣回收率試驗(yàn)

取已測(cè)定含量的樣品6份，每份3 ml，分別加入槲皮苷對(duì)照品溶液10 ml（濃度為0.225 4 mg/ml），按供試品溶液的制備方法操作，進(jìn)行回收率測(cè)定，結(jié)果分別為100.49%、99.33%、98.14%、99.82%、98.89%、99.65%，平均加樣回收率為99.39%，RSD為0.82%（n=6）。

2.9 樣品含量測(cè)定

分別取3批不同批號(hào)的紅茴香注射液樣品，按“2.2”項(xiàng)下制備供試品溶液，樣品測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。

3 討論

3.1 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇

取對(duì)照品溶液依法操作，在200～400 nm的波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，結(jié)果在256.6 nm處有最大吸收，因此選擇256 nm作為測(cè)定波長(zhǎng)(圖2)。

圖2 槲皮苷對(duì)照品紫外掃描圖

3.2 溶劑的選擇

槲皮苷易溶于甲醇、乙醇, 用甲醇作溶劑的峰形比用乙醇作溶劑的峰形好, 因此選擇用甲醇作為溶劑。