頂空毛細管氣相色譜法測定雷公藤多苷片中殘留溶劑

何風艷何 軼王 峰王亞丹戴 忠 馬雙成

（中國食品藥品檢定研究院，北京100050）

雷公藤多苷片為雷公藤多苷加輔料制成的片劑，具有抗炎及免疫抑制的作用［1］，臨床廣泛用于類風濕性關節(jié)炎［2?3］、腎病綜合癥［4?6］、慢性蕁麻疹［7?8］、銀屑?。??10］等疾病的治療。其主藥雷公藤多苷主含二萜內酯、生物堿、三萜等活性成分，是由衛(wèi)矛科雷公藤屬植物雷公藤Tripterygium wilfordiiHook.f.的去皮根芯木質部加水或乙醇、氯仿提取及硅膠柱色譜分離得到的脂溶性成分混合物［11?14］。由于雷公藤多苷制備過程中使用了多種有機溶劑，為了評價制劑質量，保證用藥安全，本研究參照《中國藥典》 相關指導原則［14］，采用頂空毛細管柱色譜法對制劑中4種有機溶劑殘留量進行了測定。

1 材料

7890B 氣相色譜儀、7697A 頂空進樣器、FID 檢測器（美國Agilent 公司）。N，N?二甲基甲酰胺（色譜純，國藥集團化學試劑有限公司）；甲醇，環(huán)己烷（色譜純，美國賽默飛世爾科技有限公司）；無水乙醇，氯仿（分析純，國藥集團化學試劑有限公司）。雷公藤多苷片15 批，來自10 家企業(yè)。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 B?624 毛細管柱（30 m × 0.32 mm，1.8 μm）；檢測器FID；柱體積流量1.5 mL／min；柱溫程序升溫，起始溫度40 ℃，保持5 min，再以10 ℃／min 升溫至220 ℃；進樣口溫度230 ℃；檢測器溫度300 ℃；載氣為高純氮；頂空加熱箱90 ℃，平衡時間30 min；定量環(huán)100 ℃，傳輸線110 ℃。理論塔板數(shù)以氯仿峰計算不低于10 000。色譜圖見圖1。

圖1 各成分GC圖

2.2 溶液制備

2.2.1 對照品溶液 精密稱取甲醇、乙醇、氯仿、環(huán)己烷對照品適量，加N，N?二甲基甲酰胺制成每1 mL分別含2.4、3.4、2.1、2.2 mg 的溶液，作為對照品貯備液。取對照品貯備液液適量，加N，N?二甲基甲酰胺稀釋得到每1 mL含甲醇0.001 8 mg、乙醇0.96 mg、氯仿0.14 mg、環(huán)己烷0.023 mg 的混合溶液，作為對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液 取本品1.0 g，精密稱定，置10 mL頂空瓶中，精密加入N，N?二甲基甲酰胺3 mL，密封瓶口，渦旋混勻，即得。

2.3 線性關系考察 取對照品貯備液，加N，N?二甲基甲酰胺逐級稀釋，得到系列溶液，分別吸取各溶液，進樣測定。以質量濃度為橫坐標（X），峰面積為縱坐標（Y），進行線性回歸，結果見表1。

表1 各成分線性關系

2.4 精密度試驗 精密移取對照品溶液3 mL，置10 mL頂空瓶中，在“2.1”項條件下連續(xù)進樣6 次，測得甲醇、乙醇、氯仿和環(huán)己烷峰面積RSD分別為2.5%、2.0%、2.2%、2.9%，表明儀器精密度良好。

2.5 重復性試驗 取雷公藤多苷片（S1）約1.0 g，精密稱定，平行6 份，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，在“2.1”項條件下進樣，結果甲醇含量低于線性范圍，乙醇含量為0.24%，RSD分別為1.5%，表明該方法重復性良好。

取雷公藤多苷片（S15）約1.0 g，精密稱定，平行6份，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，在“2.1”項條件下進樣，結果乙醇含量低于線性范圍，甲醇、氯仿和環(huán)己烷的含量分別為0.000 33%、0.029%、0.006 0%，RSD分別為4.2%、1.5%、0.2%，表明該方法重復性良好。

2.6 加樣回收率試驗 取雷公藤多苷片（S1）約0.5 g，精密稱定，平行6 份，置10 mL 頂空瓶中，精密加入每1 mL 含乙醇0.427 mg／mL 的對照品溶液3 mL，渦旋混勻，在“2.1”項條件下進樣測定，計算回收率，結果見表2。

取雷公藤多苷片（S15）約0.5 g，精密稱定，平行6份，置10 mL 頂空瓶中，精密加入每1 mL分別含甲醇、氯仿、環(huán)己 烷0.577、0.046、9.11 μg／ mL 的對照品溶液3 mL，渦旋混勻，在“2.1”項條件下進樣，計算回收率，結果見表2。

表2 各成分加樣回收率試驗結果（n＝6）

2.7 檢測限及定量限 取對照品貯備液，加N，N?二甲基甲酰胺逐級稀釋，精密吸取3 mL 至10 mL 頂空瓶中，測定信噪比，以信噪比為3 時的溶液濃度作為檢出限，以信噪比為10 時的溶液濃度作為定量限，結果見表1。

2.8 樣品含量測定 取雷公藤皂苷片15 批，在“2.1”項條件下進樣，結果見表3。

表3 雷公藤多苷片中殘留溶劑測定結果（%）

3 討論

傳統(tǒng)的直接進樣法氣化溫度較高，樣品可能在氣化過程中分解，并且色譜分離易受樣品基體干擾。頂空進樣法使用較低的平衡溫度，抽取氣液平衡后的氣體成分進行色譜分析，可以有效減少基體干擾。實驗曾采用直接進樣，殘留溶劑色譜峰受基體影響而峰型較差，采用頂空進樣可有效改善峰型，因此實驗中使用頂空進樣法。

頂空進樣法中，常用溶劑包括水、N，N?二甲基甲酰胺、二甲基亞砜等。雷公藤多苷為脂溶性混合物，以N，N?二甲基甲酰胺為溶劑，可快速溶解主藥及其殘留溶劑，利于檢測。同時，雷公藤多苷制備過程中可能使用的有機溶劑主要為非高沸點溶劑，N，N?二甲基甲酰胺沸點適宜，可滿足測定要求。

實驗中比較了不同頂空加熱溫度（70、80、90 ℃）和加熱時間（20、30、40 min）對殘留溶劑測定的影響。結果表明，隨著加熱溫度升高，溶劑峰面積呈增加的趨勢，而不同加熱時間對測定影響不大，最終選擇90 ℃下加熱30 min。

隨著藥品安全性保障工作的提升，制劑及藥用輔料中殘留溶劑的檢測日益受到重視。2020年版《中國藥典》 一部中三七三醇皂苷、三七總皂苷等3個提取物和心腦健片、正清風痛寧片等7個制劑品種（或主藥原料）已對殘留溶劑進行檢測。這些品種的生產(chǎn)工藝均涉及有機溶劑提取或大孔樹脂使用。雷公藤多苷由衛(wèi)矛科雷公藤屬植物雷公藤的去皮根芯木質部加水或乙醇、氯仿提取及硅膠柱色譜分離得到［11?14］。實驗中發(fā)現(xiàn)雷公藤多苷片中存在甲醇、乙醇、氯仿、環(huán)己烷4種有機溶劑。參考文獻［11，14］，主藥雷公藤多苷提取過程中可能用到乙醇和氯仿；甲醇、氯仿、環(huán)己烷都是硅膠柱色譜純化過程中常用的有機溶劑。此外，乙醇還是片劑制備中常用的潤濕劑。主藥生產(chǎn)及片劑制備工藝可能引入此4種有機溶劑。

《中國藥典》 規(guī)定藥品中甲醇、乙醇、氯仿、環(huán)己烷的限度分別為0.3%、0.5%、0.006%和0.388%［15］。對10個廠家15 批樣品的測定結果表明，B 廠家6 批樣品乙醇含量超出限度（0.63%～0.96%），J 廠家1 批樣品氯仿含量超出限度（0.029%），存在有機溶劑殘留超標情況。2種超標溶劑中，氯仿被國際癌癥研究機構列為2B 類，為疑似致癌物，危害較高［16］，應引起重視。根據(jù)本實驗結果，建議廠家進一步完善生產(chǎn)工藝，其他類似中藥制劑也應以此為鑒，加強對殘留溶劑的監(jiān)控，以避免過量有機溶劑殘留對人民用藥安全帶來的不利影響。