柴華 李上云 宋丹陽 陳晴燕(沈陽市第七人民醫(yī)院皮膚科,沈陽110003)
皮膚鱗狀細(xì)胞癌是常見的皮膚惡性腫瘤,其發(fā)病率呈逐年增長(zhǎng)趨勢(shì),危害人類生命健康[1]。由于皮膚鱗狀細(xì)胞癌在臨床和組織病理學(xué)上的多樣性,通常容易被誤診。皮膚鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)多因素、多階段、多基因參與的過程,因此,尋找在該疾病發(fā)病過程中發(fā)揮關(guān)鍵調(diào)控作用的分子對(duì)鱗癌的診斷和治療具有重要意義[2]。微小RNA(microRNA,miRNA)是一類小分子非編碼RNA,通過與靶基因mRNA的3′非編碼區(qū)(3′UTR)結(jié)合,抑制靶mRNA翻譯或降解靶mRNA,從而在轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控基因表達(dá),參與心血管、腫瘤等多種疾病的發(fā)生發(fā)展[3-4]。研究顯示,miR-22-3p在結(jié)直腸癌、肝細(xì)胞癌、腎細(xì)胞癌等腫瘤中表達(dá)異常表達(dá),參與調(diào)控腫瘤細(xì)胞的增殖、凋亡、遷移和侵襲等生物學(xué)行為,是腫瘤治療的潛在靶點(diǎn)[5-7]。目前,miR-22-3p在皮膚鱗狀細(xì)胞癌中的作用還未知。Targetscan生物信息學(xué)軟件預(yù)測(cè)顯示,結(jié)構(gòu)蛋白家族1(fectonic family member,TCTN1)的3′UTR與miR-22-3p的核苷酸序列存在連續(xù)的結(jié)合位點(diǎn),提示miR-22-3p可能調(diào)控TCTN1表達(dá)。TCTN1屬于結(jié)構(gòu)蛋白家族成員,也參與結(jié)腸癌、膠質(zhì)瘤、食管鱗狀細(xì)胞癌等腫瘤的發(fā)生發(fā)展[8-10]。但TCTN1對(duì)皮膚鱗狀細(xì)胞癌的影響尚不明確。本研究主要探討了miR-22-3p對(duì)皮膚鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響及其可否通過調(diào)控TCTN1表達(dá)發(fā)揮作用,以期為皮膚鱗狀細(xì)胞癌的靶向治療提供新靶點(diǎn)。
1.1 資料
1.1.1 組織樣本選取2014年4月至2018年9月整形外科手術(shù)切除并經(jīng)病理學(xué)確診的35例皮膚鱗狀細(xì)胞癌為研究對(duì)象,其中男性21例,女性14例,年齡37~75歲,平均年齡(56.39±4.81)歲。高分化15例,中分化11例,低分化9例;發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移14例,未發(fā)現(xiàn)遠(yuǎn)處器官轉(zhuǎn)移21例。所有患者術(shù)前均未進(jìn)行放化療等治療。同時(shí)以35例正常皮膚組織為對(duì)照,男性19例,女 性16例,年 齡35~71歲,平 均 年 齡(54.59±5.21)歲。兩組年齡、性別等一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。本研究經(jīng)本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)同意,患者或家屬自愿簽署知情同意書。
1.1.2 細(xì)胞和實(shí)驗(yàn)試劑皮膚鱗狀細(xì)胞癌A431細(xì)胞,中國科學(xué)院上海細(xì)胞庫;胎牛血清(fetal bovine serum,F(xiàn)BS)和RPMI1640培養(yǎng)基,美國Gibco公司;四甲基噻唑藍(lán)(methylthiazoletrazolium,MTT)和胰蛋白酶,美國Sigma公司;Trizol試劑、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒和PCR試劑盒,深圳晶美生物工程有限公司;膜聯(lián)蛋白V(Annexin V)-異硫氰酸熒光素(FITC)/碘化丙啶(propidium iodide,PI)凋亡試劑盒和二喹啉甲酸(bicinchoninicacid,BCA)蛋白檢測(cè)試劑盒,上海碧云天生物技術(shù)有限公司;兔抗人細(xì)胞周期蛋白D1(CyclinD1)、細(xì)胞增殖因子-67(Ki-67)多克隆抗體,美國Santa Cruz公司;兔抗人活化的caspase-3(Cleaved caspase-3)多克隆抗體,武漢博士德生物工程有限公司;LipofectamineTM2000試劑盒,美國Invitrogen公司;PCR引物,上海生工生物工程有限公司;雙熒光素酶活性檢測(cè)試劑盒,美國Promega公司;miR-22-3p模擬物mimics(5′-CUGAACGUCGTAGUUCGTUCUAU-3′)及模擬陰性序列(5′-CCCGUGCUGAUAGAUCGUAAACGUC-3′)、miR-22-3p抑制劑(5′-GCUCGCGUUAGAAUAGUAAGCUGUCC-3′)及陰性序列(5′-CUUGGCCGCUGCUAGACGUAGCUCC-3′)、TCTN1的小干擾RNA(5′-GCUCAGAUGCAUCAGUUCCUUCUCGUGAUAUC-3′)及亂序無意義陰性序列(5′-UUCUCCGAACGTGUCGCUGGACGU-3′)、TCTN1過表達(dá)載體(5′-TGGCCGATGCTAGCTGCCGGGTCCA-3′)和空載體(5′-TGGCGAATGGCGTGGCACGTGGGG-3′),廣州市銳博生物科技有限公司。
1.2 方法
1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)A431細(xì)胞復(fù)蘇后,加入含10%FBS的RPMI1640培養(yǎng)基于37℃、CO2體積分?jǐn)?shù)5%、濕度97%的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀況,每2~3 d更換1次新鮮的培養(yǎng)基。待細(xì)胞匯合至80%~90%時(shí),吸棄培養(yǎng)基,加入適量預(yù)冷的磷酸鹽緩沖液(phosphate buffered saline,PBS)清洗細(xì)胞。吸棄PBS,加入0.25%胰蛋白酶溶液消化細(xì)胞,進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞分組和轉(zhuǎn)染對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的A431細(xì)胞以1×105個(gè)/孔接種于6孔板,待細(xì)胞匯合至60%時(shí),更換無FBS的培養(yǎng)基。分別將miR-22-3p mimics(miR-22-3p組)及陰性對(duì)照(miR-NC組)、miR-22-3p抑制劑(anti-miR-22-3p組)及陰性對(duì)照(anti-miR-NC組)、TCTN1的小干擾RNA(si-TCTN1組)及陰性對(duì)照(si-NC組)以及miR-22-3p mimics與TCTN1過表達(dá)載體(miR-22-3p+pcDNA-TCTN1組)、miR-22-3p mimics與空載體(miR-22-3p+pcDNA組)轉(zhuǎn)染至A431細(xì)胞。具體操作過程參照LipofectamineTM2000試劑盒說明書。轉(zhuǎn)染48 h后,qRT-PCR和Western blot分別檢測(cè)miR-22-3p和TCTN1蛋白評(píng)價(jià)轉(zhuǎn)染效果,并收集細(xì)胞用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
1.2.3 qRT-PCR檢 測(cè)miR-22-3p和TCTN1 mRNA表達(dá)水平Trizol試劑提取組織或細(xì)胞中總RNA,經(jīng)微量核酸儀檢測(cè)純度和濃度后,參照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒操作說明,將其逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。然后以cDNA為模板,進(jìn)行PCR擴(kuò)增。miR-22-3p上游5′-AAGCTGCCAGTTGAAGAACTGTA-3′,下游5′-TTGGCGAATGCCAATGGCCGGCCA-3′;U6上 游5′-CTCGCTTCGGCAGCACA-3′,下游5′-GGCTTCCCGAATGCAAGC-3′;TCTN1上游5′-CCTTTGCGTGAATGTTGTTC-3′,下游5′-AGAGGGACTGGCTGGGTATT-3′;β-actin上游5′-GTGGACATCCGCAAAGAC-3′,下游5′-AAAGGGTGTAACGCAACTA-3′。PCR擴(kuò)增條件:95℃5 min,95℃10 s,60℃30 s,72℃30 s,共35個(gè)循環(huán)。miR-22-3p以U6為內(nèi)參,TCTN1以β-actin為內(nèi)參,采用2-ΔΔCt法計(jì)算miR-22-3p和TCTN1 mRNA的相對(duì)表達(dá)水平。
1.2.4 Western blot法檢測(cè)蛋白表達(dá)RIPA蛋白裂解液裂解細(xì)胞,12 000 r/min離心10 min,上清液即為總蛋白。采用BCA法測(cè)定蛋白濃度。取適量蛋白,加入上樣緩沖液,100℃煮沸5 min。蛋白變性后,以每泳道30μg蛋白行十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳。電泳結(jié)束后,轉(zhuǎn)至聚偏乙烯二氟膜。轉(zhuǎn)膜后,將膜置于5%脫脂牛奶中進(jìn)行封閉1 h。分別加入CyclinD1(1:600)、Ki-67(1:800)、Cleaved caspase-3(1:400)一抗,4℃孵育過夜。加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗IgG(1:400),37℃孵育1 h。加入ECL顯影液,避光顯影,凝膠成像系統(tǒng)曝光拍照,Image J軟件分析蛋白條帶灰度值。
1.2.5 MTT檢測(cè)細(xì)胞增殖各組轉(zhuǎn)染后的A431細(xì)胞以1×103個(gè)/孔接種于96孔板,于培養(yǎng)箱中分別培養(yǎng)24 h、48 h、72 h后,每孔加入20 μl濃度為5 g/L的MTT溶液。培養(yǎng)箱中繼續(xù)孵育4 h后,吸棄培養(yǎng)基,加入150μl二甲基亞砜,振蕩混合均勻,于酶標(biāo)儀490 nm處測(cè)定光密度(optical density,OD)值。
1.2.6 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡各組轉(zhuǎn)染后的A431細(xì)胞以1×104個(gè)/孔接種于24孔板。培養(yǎng)48 h后,胰酶消化,收集細(xì)胞。取1×106個(gè)細(xì)胞,PBS清洗后,加入400μl結(jié)合緩沖液。輕輕吹打混懸細(xì)胞后,加入10μl Annexin V-FITC,室溫避光孵育10 min。再加入5μl PI,室溫避光孵育5 min。最后加入100μl結(jié)合緩沖液,混合均勻后流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡。
1.2.7 雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)驗(yàn)證miR-22-3p與TCTN1靶向關(guān)系Targetscan生物信息學(xué)軟件預(yù)測(cè)顯示,TCTN1的3′UTR存在與miR-22-3p結(jié)合的核苷酸序列。PCR擴(kuò)增含miR-22-3p結(jié)合位點(diǎn)的TCTN1的3′UTR序列,構(gòu)建TCTN1野生型質(zhì)粒(WTTCTN1,5′-GGGUGGGAGUGGAUGGGCAGCUC-3′)和突變型質(zhì)粒(MUT-TCTN1,5′-GGGUGGGAGUGGAUGCCGUCGAC-3′)。分別將WT-TCTN1、MUTTCTN1與miR-22-3p mimic及陰性對(duì)照共轉(zhuǎn)染至A431細(xì)胞。轉(zhuǎn)染48 h后,收集細(xì)胞。參照雙熒光素酶活性檢測(cè)試劑盒說明書,檢測(cè)熒光素酶活性。
1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析利用SPSS22.0軟件分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。計(jì)量資料以xˉ±s表示,多組間比較采用單因素方差分析,進(jìn)一步兩兩比較采用SNK-q檢驗(yàn)。以P<0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2.1 皮膚鱗狀細(xì)胞癌組織和正常皮膚組織中miR-22-3p及TCTN1表達(dá)與正常皮膚組織相比,皮膚鱗狀細(xì)胞癌組織中miR-22-3p水平明顯降低(P<0.05),TCTN1 mRNA和蛋白水平明顯升高(P<0.05)。結(jié)果如圖1、表1所示。
表1 皮膚鱗狀細(xì)胞癌組織和正常皮膚組織中miR-22-3p和TCTN1表達(dá)(xˉ±s,n=35)Tab.1 Expression of miR-22-3p and TCTN1 in cutaneous squamous cell carcinoma tissues and normal skin tissues(xˉ±s,n=35)
圖1 Western blot檢測(cè)皮膚鱗狀細(xì)胞癌組織和正常皮膚組織中TCTN1蛋白表達(dá)Fig.1 Western blot detected expression of TCTN1 protein in cutaneous squamous cell carcinoma tissues and normal skin tissues
2.2 過表達(dá)miR-22-3p對(duì)皮膚鱗狀細(xì)胞癌A431細(xì)胞增殖的影響與miR-con組相比,miR-22-3p組miR-22-3p水平明顯升高(P<0.05),說明miR-22-3p mimics轉(zhuǎn)染成功,A431細(xì)胞中miR-22-3p過表達(dá)。與miRcon組相比,miR-22-3p組細(xì)胞活性、Ki-67和CyclinD1蛋白水平明顯降低(P<0.05)。結(jié)果如圖2、表2。
表2 過表達(dá)miR-22-3p對(duì)A431細(xì)胞增殖及Ki-67和CyclinD1蛋白表達(dá)的影響(xˉ±s,n=9)Tab.2 Effect of overexpressing miR-22-3p on A431 cell proliferation and expression of Ki-67 and CyclinD1 protein(xˉ±s,n=9)
圖2 Western blot檢 測(cè)A431細(xì) 胞Ki-67和CyclinD1蛋 白表達(dá)Fig.2 Western blot detected expression of Ki-67 and CyclinD1 protein in A431 cells
2.3 過表達(dá)miR-22-3p對(duì)皮膚鱗狀細(xì)胞癌A431細(xì)胞凋亡的影響與miR-con組相比,miR-22-3p組細(xì)胞凋亡率、Cleaved caspase-3蛋白水平明顯升高(P<0.05)。結(jié)果如圖3、表3。
表3 過表達(dá)miR-22-3p對(duì)A431細(xì)胞凋亡及Cleaved caspase-3蛋白表達(dá)的影響(xˉ±s,n=9)Tab.3 Effect of overexpressing miR-22-3p on A431 cell apoptosis and and the expression of Cleaved caspase-3 protein(xˉ±s,n=9)
2.4 miR-22-3p靶向TCTN1調(diào)控其表達(dá)Targetscan生物信息學(xué)軟件預(yù)測(cè)顯示,TCTN1的3′UTR與miR-22-3p核苷酸序列存在連續(xù)的結(jié)合位點(diǎn)。熒光素酶活性檢測(cè)結(jié)果顯示,與miR-con組相比,miR-22-3p組共轉(zhuǎn)染W(wǎng)T-TCTN1的A431細(xì)胞熒光素酶活性明顯降低(P<0.05),而共轉(zhuǎn)染MUT-TCTN1的A431細(xì)胞熒光素酶活性物無明顯變化(P>0.05),說明miR-22-3p可與TCTN1的3′UTR靶向結(jié)合。與miR-con組相比,miR-22-3p組TCTN1蛋白水平明顯降低(P<0.05);與anti-miR-con組相比,anti-miR-22-3p組TCTN1蛋白水平明顯升高(P<0.05),進(jìn)一步說明miR-22-3p在A431細(xì)胞中靶向負(fù)調(diào)控TCTN1表達(dá)。結(jié)果如圖4、表4、5。
表4 雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)結(jié)果(xˉ±s,n=9)Tab.4 Dual luciferase reported experimental results(xˉ±s,n=9)
圖4 miR-22-3p與TCTN1互補(bǔ)的核苷酸序列以及miR-22-3p調(diào)控TCTN1表達(dá)Fig.4 Complementary nucleotide sequence of miR-22-3p and TCTN1 and miR-22-3p regulate TCTN1 expression
2.5 沉默TCTN1對(duì)皮膚鱗狀細(xì)胞癌A431細(xì)胞增殖和凋亡的影響與si-con組相比,si-TCTN1組TCTN1蛋白水平明顯降低(P<0.05),說明si-TCTN1轉(zhuǎn)染成功,A431細(xì)胞中TCTN1表達(dá)沉默。與si-con組相比,si-TCTN1組細(xì)胞活性、Ki-67和CyclinD1蛋白水平明顯降低(P<0.05),凋亡率和Cleaved caspase-3蛋白水平明顯升高(P<0.05)。結(jié)果如圖5、表6。
表6 沉默TCTN1對(duì)A431細(xì)胞增殖和凋亡的影響(xˉ±s,n=9)Tab.6 Effect of silencing TCTN1 on proliferation and apoptosis of A431 cells(xˉ±s,n=9)
圖5 Western blot檢測(cè)A431細(xì)胞TCTN1、Ki-67、CyclinD1和Cleaved caspase-3蛋白表達(dá)Fig.5 Western blot detected expressions of TCTN1,Ki-67,CyclinD1 and Cleaved caspase-3 protein in A431 cells
2.6 過表達(dá)TCTN1部分逆轉(zhuǎn)miR-22-3p對(duì)皮膚鱗狀細(xì)胞癌A431細(xì)胞增殖和凋亡的影響與miR-22-3p+pcDNA組相比,miR-22-3p+pcDNA-TCTN1組細(xì)胞活性、Ki-67和CyclinD1蛋白水平明顯升高(P<0.05),凋亡率和Cleaved caspase-3蛋白水平明顯降低(P<0.05)。結(jié)果如表7、圖6。
圖6 Western blot檢測(cè)A431細(xì)胞中TCTN1、Ki-67、CyclinD1和Cleaved caspase-3蛋白表達(dá)Fig.6 Western blot detected expressions of TCTN1,Ki-67,CyclinD1 and Cleaved caspase-3 protein in A431 cells
表7 過表達(dá)TCTN1逆轉(zhuǎn)miR-22-3p對(duì)A431細(xì)胞增殖和凋亡的影響(xˉ±s,n=9)Tab.7 Overexpressing TCTN1 reversed the effect of miR-22-3p on proliferation and apoptosis of A431 cells(xˉ±s,n=9)
表5 miR-22-3p調(diào)控A431細(xì)胞中TCTN1蛋白的表達(dá)(xˉ±s)Tab.5 miR-22-3p regulated the expression of TCTN1 protein in A431 cells(xˉ±s)
皮膚鱗狀細(xì)胞癌簡(jiǎn)稱皮膚鱗癌,具有較高的侵襲性,易復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。遺傳因素、外部環(huán)境、細(xì)胞異常增殖等多種因素均可引起皮膚鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)生。誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡是腫瘤治療的途徑[11]。近年研究顯示,miRNA參與皮膚鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展[12],探討皮膚鱗狀細(xì)胞癌中異常表達(dá)的miRNA及其對(duì)皮膚鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞增殖和凋亡影響的分子機(jī)制,可為該疾病的診斷和治療提供新思路。
miR-22-3p是近年新發(fā)現(xiàn)的一種miRNA,參與調(diào)控腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為,在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中起重要作用。常永梅等[13]研究顯示,miR-22-3p在非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)組織中表達(dá)降低,過表達(dá)miR-22-3p通過靶向負(fù)調(diào)控AEG-1表達(dá)抑制NSCLC細(xì)胞增殖。LV等[14]研究顯示,miR-22-3p在宮頸癌組織中表達(dá)升高,抑制miR-22-3p表達(dá)可通過靶向上調(diào)eIF4EBP3表達(dá)誘導(dǎo)宮頸癌細(xì)胞凋亡。這說明miR-22-3p在不同腫瘤中發(fā)揮的作用不同,既可作為抑癌基因抑制腫瘤發(fā)生發(fā)展,也可作為促癌基因促進(jìn)腫瘤發(fā)生發(fā)展。目前,miR-22-3p對(duì)皮膚鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響還未知。本研究結(jié)果顯示,皮膚鱗狀細(xì)胞癌組織中miR-22-3p表達(dá)降低,過表達(dá)miR-22-3p可抑制皮膚鱗狀細(xì)胞癌A431細(xì)胞增殖,促進(jìn)細(xì)胞凋亡。CyclinD1在細(xì)胞周期G1至S期發(fā)揮調(diào)控作用,促進(jìn)細(xì)胞增殖[15]。Ki-67是細(xì)胞增殖狀態(tài)的標(biāo)記抗原,表達(dá)增加說明細(xì)胞增殖活躍[16]。Caspase級(jí)聯(lián)反應(yīng)在細(xì)胞凋亡過程中發(fā)揮重要作用,caspase-3是細(xì)胞凋亡的“執(zhí)行者”,活化的caspase-3(Cleaved caspase-3)促進(jìn)細(xì)胞凋亡[17]。本研究顯示,過表達(dá)miR-22-3p可抑制A431細(xì)胞中CyclinD1和Ki-67蛋白表達(dá),促進(jìn)Cleaved caspase-3蛋白表達(dá),提示miR-22-3p通過影響與增殖、凋亡相關(guān)的蛋白表達(dá)抑制A431細(xì)胞增殖,促進(jìn)細(xì)胞凋亡。
為了進(jìn)一步探討miR-22-3p影響皮膚鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞增殖和凋亡的作用機(jī)制,本研究通過生物信息學(xué)軟件預(yù)測(cè)顯示,TCTN1的3′UTR與miR-22-3p的核苷酸序列存在結(jié)合位點(diǎn),雙熒光素酶活性檢測(cè)證實(shí)miR-22-3p可與TCTN1的3′UTR靶向結(jié)合。同時(shí),上調(diào)皮膚鱗狀細(xì)胞癌A431細(xì)胞中miR-22-3p表達(dá)后,TCTN1蛋白表達(dá)降低,而下調(diào)miR-22-3p表達(dá)后TCTN1蛋白表達(dá)升高,說明miR-22-3p在A431細(xì)胞中靶向負(fù)調(diào)控TCTN1表達(dá)。本研究還顯示,過表達(dá)TCTN1逆轉(zhuǎn)了miR-22-3p對(duì)A431細(xì)胞增殖、凋亡及相關(guān)蛋白表達(dá)的影響,提示過表達(dá)miR-22-3p可能通過靶向下調(diào)TCTN1表達(dá)抑制皮膚鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞的增殖并促進(jìn)其凋亡。
TCTN1是結(jié)構(gòu)蛋白家族成員之一,與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。研究顯示,NSCLC組織中miR-1256表達(dá)下調(diào),TCTN1表達(dá)上調(diào),過表達(dá)miR-1256通過靶向下調(diào)TCTN1表達(dá)抑制NSCLC細(xì)胞增殖和遷移,miR-1256/TCTN1軸可作為NSCLC的治療靶點(diǎn)[18]。TCTN1在甲狀腺癌細(xì)胞中表達(dá)升高,沉默TCTN1表達(dá)可抑制甲狀腺癌細(xì)胞活力、集落形成、細(xì)胞周期進(jìn)展,并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,為甲狀腺癌的治療提供了潛在新途徑[19]。目前,還未見TCTN1影響皮膚鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞生物學(xué)行為的相關(guān)報(bào)道。本研究結(jié)果顯示,皮膚鱗狀細(xì)胞癌組織中TCTN1 mRNA和蛋白表達(dá)升高,沉默TCTN1表達(dá)可抑制皮膚鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞增殖,促進(jìn)細(xì)胞凋亡,并抑制細(xì)胞中Ki-67和CyclinD1蛋白表達(dá),促進(jìn)Cleaved caspase-3蛋白表達(dá),提示TCTN1參與皮膚鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展。
綜上所述,皮膚鱗狀細(xì)胞癌組織中miR-22-3p表達(dá)降低,TCTN1表達(dá)升高;過表達(dá)miR-22-3p可能通過靶向抑制抑制TCTN1表達(dá)降低皮膚鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞的增殖能力,并誘導(dǎo)其凋亡,miR-22-3p/TCTN1可能是皮膚鱗狀細(xì)胞癌靶向治療的新靶點(diǎn)。但本研究存在不足之處,僅在體外細(xì)胞層面研究了miR-22-3p/TCTN1軸對(duì)皮膚鱗狀細(xì)胞癌的影響,接下來將通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)在體內(nèi)探討miR-22-3p/TCTN1對(duì)皮膚鱗狀細(xì)胞癌腫瘤生長(zhǎng)的影響,以期為皮膚鱗狀細(xì)胞癌的靶向治療提供新途徑。