貧血患者外周血CD55+、CD59+的表達(dá)及其臨床意義*

吳祖常，肖平，林蔚，楊少江（佛山市第一人民醫(yī)院，廣東 佛山 528000）

貧血是血液科常見疾病，由于機(jī)體外周血紅細(xì)胞生成減少或溶血導(dǎo)致其容量低于正常范圍下限，引起頭昏、耳鳴、失眠等癥狀［1］。資料顯示［2］，貧血按發(fā)病機(jī)制和病因可分為陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥、再生障礙性貧血、自身免疫性溶血性貧血、缺鐵性貧血和巨幼細(xì)胞性貧血等。其中陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿是一種較為典型的獲得性紅細(xì)胞異常性溶血性病癥［3］，臨床主要表現(xiàn)為陣發(fā)性血紅蛋白尿，該病具有發(fā)病隱襲和病程遷延等特點(diǎn)，不易被診斷發(fā)現(xiàn)。既往采用酸溶血試驗(yàn)診斷陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥，但其特異性和敏感性較低。因此，尋求一種有效的指標(biāo)對(duì)治療陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿有積極的指導(dǎo)意義。相關(guān)文獻(xiàn)指出［4］，紅細(xì)胞和中性粒細(xì)胞表達(dá)的補(bǔ)體調(diào)節(jié)蛋白CD55+和CD59+可作為其有效指標(biāo)。流式細(xì)胞儀可有效檢測(cè)出外周血紅細(xì)胞的CD55+及CD59+，是目前較為常見的檢測(cè)方式。本文將我院收治的90例貧血患者作為研究對(duì)象，采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)其外周血CD55+及CD59+，以期探討其臨床意義。報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2015年8月～2017年8月我院收治的90例貧血患者設(shè)為研究組。另選入同期在我院進(jìn)行體檢的40例健康正常人作為對(duì)照組，其中男22例，女18例，年齡15～75（40.15±4.51）歲。其中男55例、女35例，年齡14～70（38.45±4.15）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）符合貧血相關(guān)疾病診斷標(biāo)準(zhǔn)；（2）臨床資料完整；（3）患者及家屬知情本次研究并同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）合并心、肝、腎等臟器嚴(yán)重障礙者；（2）有嚴(yán)重精神疾病無法配合本次研究者；（3）白血病等嚴(yán)重血液疾病者。根據(jù)臨床診斷對(duì)研究組進(jìn)行分組：陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥組22例，再生障礙性貧血組10例，缺鐵性貧血組24例，自身免疫性溶血性貧血組25例，巨幼細(xì)胞性貧血組9例。兩組性別、年齡等一般資料比較，無顯著差異（P＜0.05），具有可比性。

1.2 方法采用BD FACSCantoII流式細(xì)胞儀，直接熒光元素標(biāo)記的CD55+及CD59+單抗均購自美國BD公司。于早晨采集所有研究對(duì)象的外周血液4～5ml，根據(jù)試劑盒檢測(cè)說明書進(jìn)行紅細(xì)胞和中性粒細(xì)胞檢測(cè)。紅細(xì)胞檢測(cè)：置入乙二胺四乙酸（EDTA）2μl抗凝，加入8μlCD55+單抗，混勻后室溫避光孵育15min，孵育完成后加1ml生理鹽水洗滌，離心去上清，最后加入PBS0.5ml懸浮細(xì)胞，使用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)，CD59+同上步驟。中性粒細(xì)胞檢測(cè)：100μlEDTA抗凝，加入8μlCD55+單抗，混勻后避光孵育15min，再加入溶血素2ml，300r/min離心10min，去上清加入生理鹽水2ml洗滌，最后加入PBS 0.5ml懸浮細(xì)胞，使用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)，CD59+同上步驟。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)采用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料以表示，行t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以n（%）表示，行χ2檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 所有研究對(duì)象CD55+、CD59+檢測(cè)結(jié)果比較對(duì)照組外周血中紅細(xì)胞和中性粒細(xì)胞中的CD55+、CD59+均大于95%；陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥組檢測(cè)結(jié)果為31.25%～72.67%；再生障礙性貧血組檢測(cè)結(jié)果為81.35%～98.67%；自身免疫性溶血性貧血組檢測(cè)結(jié)果為90.79%～99.27%；巨幼細(xì)胞性貧血組檢測(cè)結(jié)果為92.34%～99.91%；缺鐵性貧血組檢測(cè)結(jié)果均大于95%。見附表。

3 討論

陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥是由于個(gè)別造血干細(xì)胞獲得性PIG-A基因突變引起的非惡性克隆性疾?。?］。CD55+為衰變加速因子，而CD59+為反應(yīng)性溶血膜抑制物，兩者同時(shí)參與調(diào)節(jié)補(bǔ)體介導(dǎo)的溶膜反應(yīng)。臨床資料顯示［6］，PIG-A基因突變可導(dǎo)致糖基磷酸酰肌醇（GPI）合成出現(xiàn)異常，從而導(dǎo)致CD16、CD55、CD59等缺失，引發(fā)陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥。一般將CD55+、CD59+表達(dá)缺失的細(xì)胞命名為陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿細(xì)胞，大量研究表明［7，8］，部分干細(xì)胞疾病患者外周血存在陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿細(xì)胞，且骨髓增生異常、淋巴增殖性疾病、再生障礙性貧血等也存在該細(xì)胞。

附表所有研究對(duì)象CD55+、CD59+檢測(cè)結(jié)果比較

丁磊等［9］對(duì)80例健康正常人的外周血進(jìn)行了檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)不同類型的血細(xì)胞CD55+、CD59+的表達(dá)不同，分析了陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥的診斷指標(biāo)和發(fā)病機(jī)制。徐永新等［10］對(duì)120例貧血患者進(jìn)行了外周血CD55+、CD59+的表達(dá)檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿患者CD55、CD59+異常表達(dá)為100%，而再生障礙性貧血CD55+異常表達(dá)為10%、CD59+為50%，肯定了流式細(xì)胞儀的可靠性。本研究結(jié)果中，對(duì)照組外周血中紅細(xì)胞檢測(cè)和中性粒細(xì)胞檢測(cè)的CD55+、CD59+表達(dá)百分率均大于95%，而陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥組CD55+、CD59+表達(dá)百分率均小于75%（紅細(xì)胞：31.25%～72.31%，中性粒細(xì)胞：39%.92～72.01%），提示陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥患者較正常健康人CD55+、CD59+表達(dá)百分率有明顯下降。而自身免疫性溶血性貧血組和巨幼細(xì)胞性貧血組較對(duì)照組，其紅細(xì)胞的CD55+、CD59+有不同程度的缺失，且其程度較陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥組輕。再生障礙性貧血組外周血中紅細(xì)胞和中性粒細(xì)胞檢測(cè)的CD55+、CD59+表達(dá)百分率為81.35%～98.67%，提示再生障礙性貧血也有克隆性造血。缺鐵性貧血組與對(duì)照組相同檢測(cè)結(jié)果均大于95%，提示CD55+、CD59+表達(dá)百分率與正常人無法區(qū)分。

綜上所述，貧血患者外周血CD55+、CD59+表達(dá)可有效區(qū)分陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥與其他貧血癥，對(duì)貧血患者治療有積極的臨床意義，可正確分型再生障礙性貧血與陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥，值得臨床推廣應(yīng)用。