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    CC級(jí)單囊胚凍融移植周期臨床結(jié)局分析

    2021-07-20 07:38:04高曉艷徐利葛鳳菊祁秀娟黃亞
    生殖醫(yī)學(xué)雜志 2021年7期
    關(guān)鍵詞:低質(zhì)量活產(chǎn)囊胚

    高曉艷,徐利,葛鳳菊,祁秀娟,黃亞

    (上海永遠(yuǎn)幸婦科醫(yī)院,上海 200131)

    在輔助生殖治療中,為提高妊娠率往往會(huì)通過增加移植胚胎數(shù)來實(shí)現(xiàn),與此同時(shí)多胎妊娠的問題也日益凸顯。研究表明,在一定條件下,移植1枚胚胎也可獲得較好的妊娠結(jié)局[1-2]。相對(duì)于卵裂胚,囊胚培養(yǎng)可以進(jìn)一步篩選發(fā)育潛能更好的胚胎,同時(shí)移植時(shí)囊胚與子宮內(nèi)膜同步性更好,因此囊胚的移植成功率更高[3-6],越來越多的生殖中心采用單囊胚移植的策略。CC級(jí)囊胚一般因?yàn)橘|(zhì)量和結(jié)局差而被大多數(shù)生殖中心所丟棄[7-8],相關(guān)性研究比較少,其臨床應(yīng)用價(jià)值也存在很多爭(zhēng)議。本研究著重探討CC級(jí)囊胚在凍融胚胎移植(FET)中的應(yīng)用價(jià)值,同時(shí)從患者年齡、囊胚級(jí)別和發(fā)育天數(shù)等多個(gè)方面來分析單囊胚FET的臨床結(jié)局,以期為單囊胚的FET策略提供依據(jù)。

    資料和方法

    一、研究對(duì)象

    本研究回顧性分析2017年1月至2019年12月在我院接受單囊胚FET的645個(gè)周期的臨床資料。

    納入標(biāo)準(zhǔn):移植復(fù)蘇后擴(kuò)張的D5、D6、D7囊胚的單囊胚FET周期。

    排除標(biāo)準(zhǔn):反復(fù)種植失敗、子宮畸形、有宮腔病變以及失訪的患者等。

    所有囊胚均采用玻璃化冷凍技術(shù)進(jìn)行冷凍,冷凍的囊胚均為完全擴(kuò)張期囊胚。根據(jù)Gardner囊胚評(píng)分,分為兩組:CC組(142周期)和非CC組(優(yōu)于CC組,503周期)。

    同時(shí),根據(jù)患者年齡,將CC級(jí)和非CC級(jí)囊胚分別細(xì)分為3個(gè)年齡亞組,即≤35歲組、36~40歲組、>40歲組;根據(jù)囊胚發(fā)育時(shí)間,將CC級(jí)囊胚細(xì)分為3個(gè)亞組,即D5、D6、D7組。

    二、研究方法

    1.囊胚培養(yǎng)與評(píng)分:患者取卵日為第0天(D0)、第1天(D1)觀察到雙原核為正常受精,培養(yǎng)至第3天(D3)時(shí)將胚胎轉(zhuǎn)移至囊胚培養(yǎng)液中,繼續(xù)觀察至第5、6、7天(D5、D6、D7),根據(jù)囊胚形態(tài)及直徑來決定是否進(jìn)行冷凍。囊胚評(píng)分結(jié)合Gardner評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)[9]及中華醫(yī)學(xué)會(huì)專家指南共識(shí):內(nèi)細(xì)胞團(tuán)(ICM)形態(tài)規(guī)則、大小均勻、融合且直徑≥60 μm為A級(jí),ICM形態(tài)不規(guī)則、大小不均、部分融合但直徑≥60 μm為B級(jí),ICM明顯小于正常大小且卵裂球數(shù)目極少為C級(jí);滋養(yǎng)層細(xì)胞(TE)大小均勻、形態(tài)清晰且數(shù)目超過10個(gè)為A級(jí),TE大小不均勻、部分形態(tài)清晰且細(xì)胞數(shù)目10個(gè)左右為B級(jí),TE大小明顯不均勻、形態(tài)不清晰、數(shù)目少于10個(gè)為C級(jí)。我院冷凍標(biāo)準(zhǔn)為D5/D6囊胚直徑≥160 μm,D7囊胚直徑≥180 μm;AA~CC所有符合標(biāo)準(zhǔn)的囊胚均進(jìn)行冷凍。

    2.囊胚冷凍方法:囊胚冷凍前進(jìn)行激光輔助孵化皺縮。操作方法根據(jù)日本KITAZATO試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)操作程序,關(guān)閉操作臺(tái)溫度,待囊胚皺縮后放置ES液中,靜置不超過15 min,再轉(zhuǎn)入VS液中,反復(fù)混勻洗滌數(shù)次,90 s內(nèi)放置冷凍載桿的前端,迅速投入液氮中,套上套管,于液氮中保存。

    3.囊胚解凍方法:收到臨床醫(yī)生解凍通知方可解凍。操作方法根據(jù)日本KITAZATO試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)操作程序,解凍前關(guān)閉操作臺(tái)溫度,將裝有囊胚的載桿從液氮迅速放入提前37℃預(yù)熱的TS液中計(jì)時(shí)1 min,轉(zhuǎn)入DS液中計(jì)時(shí)3 min,轉(zhuǎn)入WS1液中計(jì)時(shí)5 min,WS2液中自然沉降兩次后轉(zhuǎn)入提前平衡好的囊胚培養(yǎng)皿中。激光輔助孵化,將囊胚透明帶進(jìn)行脫除,三氣培養(yǎng)箱中培養(yǎng)≥3 h,待囊胚擴(kuò)張后進(jìn)行移植。

    4.凍融囊胚移植:采用人工周期和自然周期準(zhǔn)備內(nèi)膜。(1)人工周期內(nèi)膜準(zhǔn)備方案:月經(jīng)第3天開始,口服芬嗎通(雅培,荷蘭)紅片2 mg,一日兩次,連用12 d;經(jīng)陰道B超監(jiān)測(cè)內(nèi)膜厚度達(dá)到8 mm以上開始轉(zhuǎn)化內(nèi)膜,轉(zhuǎn)化當(dāng)天計(jì)為D0,開始口服芬嗎通(雅培,荷蘭)黃片2 mg,一日兩次,連用15 d,D1開始同時(shí)安琪坦(Besins,比利時(shí))0.2 g陰道用藥,連用14 d;D5進(jìn)行囊胚移植。(2)自然周期內(nèi)膜準(zhǔn)備方案:排卵日當(dāng)天計(jì)為D0,D0開始口服地屈孕酮片(雅培,荷蘭)10 mg,一日3次,連用15 d;D5進(jìn)行囊胚移植。

    移植后10 d查血β-HCG。移植后4周進(jìn)行B超檢查,子宮腔內(nèi)見孕囊或原始心管搏動(dòng)為臨床妊娠。臨床妊娠率=臨床妊娠周期數(shù)/移植周期總數(shù)×100%;活產(chǎn)率=活產(chǎn)周期數(shù)/移植周期總數(shù)×100%;早期流產(chǎn)率=妊娠12周內(nèi)流產(chǎn)周期數(shù)/妊娠周期數(shù)×100%;早產(chǎn)率=早產(chǎn)周期數(shù)/活產(chǎn)周期數(shù)×100%。

    三、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    采用SPSS 20.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料間均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)和單因素方差分析,計(jì)數(shù)資料間比較采用卡方檢驗(yàn);P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    結(jié) 果

    一、患者一般資料

    共納入645個(gè)FET周期,患者平均年齡(34.39±4.97)歲。根據(jù)移植囊胚質(zhì)量分組,CC組142個(gè)周期,非CC組503個(gè)周期。CC組年齡顯著大于非CC組(P<0.05),兩組間其他基礎(chǔ)資料比較[體質(zhì)量指數(shù)(BMI)、不孕年限、基礎(chǔ)FSH、移植日內(nèi)膜厚度以及周期方案]均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)(表1)。

    表1 不同級(jí)別囊胚移植患者基礎(chǔ)資料比較[(-±s),n(%)]

    二、囊胚移植臨床結(jié)局

    645個(gè)FET周期的臨床妊娠率為46.20%(298/645),活產(chǎn)率為35.81%(231/645)。CC組臨床妊娠率26.76%、活產(chǎn)率18.31%,均顯著低于非CC組(分別為52.69%、40.76%)(P<0.001)。兩組間患者的早期流產(chǎn)率、早產(chǎn)率以及新生兒出生體重均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)(表2)。

    表2 不同級(jí)別囊胚移植妊娠結(jié)局比較(%)

    三、不同年齡段CC級(jí)囊胚和非CC級(jí)囊胚移植妊娠結(jié)局比較

    根據(jù)患者年齡分為≤35、36~40、>40歲3個(gè)亞組,分析不同年齡段CC級(jí)囊胚和非CC級(jí)囊胚移植妊娠結(jié)局。

    各亞組間患者的基礎(chǔ)資料(平均年齡、BMI、不孕年限、基礎(chǔ)FSH、移植日內(nèi)膜厚度)比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。當(dāng)患者年齡≤35歲和36~40歲時(shí),CC組的臨床妊娠率和活產(chǎn)率均顯著低于非CC組(P<0.05)(表3、表4);當(dāng)患者年齡>40歲時(shí),CC組和非CC組的臨床妊娠率和活產(chǎn)率無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)(表5)。

    表3 ≤35歲年齡組不同級(jí)別囊胚移植妊娠結(jié)局比較[(-±s),n(%)]

    表4 36~40歲年齡組不同級(jí)別囊胚移植妊娠結(jié)局比較[(-±s),n(%)]

    表5 >40歲年齡組不同級(jí)別囊胚移植妊娠結(jié)局比較[(-±s),n(%)]

    四、CC級(jí)囊胚移植妊娠結(jié)局的影響因素分析

    根據(jù)囊胚形成時(shí)間分為D5、D6、D7共3個(gè)亞組,并根據(jù)患者年齡分為≤35、36~40、>40歲3個(gè)亞組,分析可能的影響因素。

    1.囊胚形成時(shí)間:各亞組間平均年齡、BMI、不孕年限、基礎(chǔ)FSH水平和移植日內(nèi)膜厚度均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05);D5亞組臨床妊娠率顯著高于D7亞組(P<0.05),但3個(gè)亞組組間活產(chǎn)率無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)(表6)。

    表6 不同發(fā)育天數(shù)CC級(jí)囊胚移植的臨床結(jié)局比較[(-±s),n(%)]

    2.年齡:≤35歲組的臨床妊娠率顯著高于>40歲組(P<0.05),≤35歲組和36~40歲組的活產(chǎn)率均顯著高于>40歲組(P<0.05)(表7)。

    表7 不同年齡組CC級(jí)囊胚移植臨床結(jié)局比較[(-±s),n(%)]

    討 論

    胚胎質(zhì)量往往被認(rèn)為是著床和妊娠的重要因素,不管是卵裂胚還是囊胚。因?yàn)榈唾|(zhì)量胚胎的妊娠率往往會(huì)低很多,所以對(duì)于反復(fù)胚胎差的患者,是否應(yīng)該移植低質(zhì)量胚胎還存在很大的爭(zhēng)議。本研究著重研究低質(zhì)量囊胚(CC級(jí)囊胚)的臨床結(jié)局。結(jié)果表明,CC級(jí)囊胚的臨床妊娠率、活產(chǎn)率與非CC級(jí)(優(yōu)于CC級(jí))囊胚的妊娠率和活產(chǎn)率均存在顯著性差異(26.76% vs. 52.69%;18.31% vs. 40.76%,P<0.05),但CC級(jí)囊胚與非CC級(jí)囊胚在早期流產(chǎn)率、早產(chǎn)率和新生兒體重方面均沒有顯著性差異,這與之前報(bào)道的研究[10-13]類似。造成這種情況的原因可能是由于低質(zhì)量囊胚的非整倍體率增加[14-15]。

    Li等[10]研究了102個(gè)CC級(jí)囊胚的移植結(jié)局,結(jié)果表明CC級(jí)囊胚有21.6%的臨床妊娠率和16.7%的活產(chǎn)率,與本研究結(jié)果相近,其研究還表明CC級(jí)囊胚著床率、臨床妊娠率和活產(chǎn)率均顯著低于BB級(jí)囊胚,但是兩組間生化妊娠率、異位妊娠率和流產(chǎn)率等均沒有顯著性差異,且兩組間新生兒的出生體重、早產(chǎn)率和出生缺陷等方面均沒有顯著性差異。Nakagawa等[16]、Bouillon等[17]均認(rèn)為,低質(zhì)量的胚胎移植出生的新生兒與高質(zhì)量胚胎移植出生的新生兒相比并沒有表現(xiàn)出異常情況,與本研究結(jié)果類似。同時(shí)Oron等[18]研究表明移植單個(gè)質(zhì)量差的胚胎,無論是卵裂胚還是囊胚,都與產(chǎn)科和圍產(chǎn)期不良結(jié)局的風(fēng)險(xiǎn)增加沒有關(guān)聯(lián);Wintner等[19]研究表明,在同時(shí)移植2個(gè)囊胚的周期中,低質(zhì)量的囊胚也不會(huì)影響高質(zhì)量囊胚的妊娠結(jié)局。但是Huang等[20]則認(rèn)為,低質(zhì)量囊胚會(huì)顯著影響新生兒體重,使低體重新生兒的概率升高。本研究結(jié)果并不支持這一結(jié)論,可能是樣本數(shù)量差異造成的。

    本研究共納入142個(gè)CC級(jí)囊胚移植周期,患者平均年齡(35.73±5.85)歲,顯著高于非CC組的患者平均年齡(34.02±4.65)歲(P<0.05)。對(duì)年齡進(jìn)行分組后,發(fā)現(xiàn)當(dāng)患者年齡≤40歲時(shí),CC組的臨床妊娠率和活產(chǎn)率均顯著低于非CC組;當(dāng)患者年齡>40歲時(shí),CC組和非CC組的臨床妊娠率和活產(chǎn)率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。年齡≤40歲時(shí),囊胚質(zhì)量更影響臨床結(jié)局,當(dāng)患者年齡>40歲時(shí),年齡對(duì)臨床結(jié)局的影響更重要,無論胚胎質(zhì)量如何,其臨床妊娠率和活產(chǎn)率均顯著下降。當(dāng)患者年齡≤35歲時(shí),CC級(jí)囊胚的臨床妊娠率和活產(chǎn)率分別為36.36%和25.76%,顯著高于>40歲患者的臨床妊娠率(9.09%)和活產(chǎn)率(3.03%)(P<0.05),但與36~40歲患者的臨床妊娠率(25.58%)和活產(chǎn)率(18.60%)沒有顯著性差異(P>0.05)。說明FET周期中,可優(yōu)先選擇非CC級(jí)優(yōu)質(zhì)囊胚移植,CC級(jí)囊胚可作為備用移植策略,而非廢棄。

    本研究顯示:當(dāng)CC級(jí)囊胚是D5形成者獲得了比較滿意的結(jié)局,其臨床妊娠率和活產(chǎn)率分別達(dá)到了41.94%和29.03%,而D6形成的CC級(jí)囊胚的妊娠率和活產(chǎn)率分別為25.27%和17.58%,D7形成的CC級(jí)囊胚也有一定的臨床妊娠率(10.00%)和活產(chǎn)率(5.00%)。過去的十幾年來,在D6未達(dá)到囊胚冷凍標(biāo)準(zhǔn)的胚胎都是被廢棄,而最近越來越多的研究表明,D7形成的囊胚仍具有一定的臨床應(yīng)用價(jià)值,有些也可形成評(píng)分很好的囊胚,整倍體率無顯著差異,新生兒也無異常[21-25]。Ueno等[26]首次提出了D7囊胚冷凍標(biāo)準(zhǔn):直徑達(dá)到180 μm即可冷凍,其研究發(fā)現(xiàn),囊胚直徑180 μm、190 μm、200 μm、210 μm和大于220 μm時(shí),其活產(chǎn)率分別為9.0%、11.9%、11.5%、15.6%、20.0%和19.9%,顯著高于移植D2胚胎的結(jié)局。本中心依據(jù)Ueno等[26]提出的冷凍標(biāo)準(zhǔn),對(duì)D7直徑達(dá)到180 μm及以上的囊胚進(jìn)行冷凍,并在適宜條件下進(jìn)行復(fù)蘇移植。結(jié)果表明,D7的CC級(jí)囊胚移植也有一定的臨床妊娠率(10.00%)和活產(chǎn)率(5.00%)。我們的結(jié)果表明,CC級(jí)別囊胚不應(yīng)該直接廢棄,可留作備用,尤其是D5的CC級(jí)囊胚移植依然有較好的臨床結(jié)局;特別是對(duì)于反復(fù)胚胎質(zhì)量差、無可用胚的患者,選擇CC級(jí)囊胚移植不失為一個(gè)較好的移植策略。

    我們對(duì)于囊胚進(jìn)行評(píng)級(jí)的目的是為了評(píng)估胚胎的相對(duì)質(zhì)量和發(fā)育潛能,以期選擇最好的胚胎來達(dá)到妊娠的目的。但是囊胚的形態(tài)評(píng)級(jí)仍具有主觀性,被評(píng)為CC級(jí)并不代表沒有發(fā)育潛力,Morbeck[27]認(rèn)為“C”并不意味著沒有發(fā)育潛力,囊胚評(píng)估不應(yīng)該僅僅看表面形態(tài),也應(yīng)該考慮其生存能力。對(duì)于胚胎數(shù)量較少且反復(fù)胚胎差的患者,非優(yōu)質(zhì)卵裂胚行囊胚培養(yǎng)后形成的CC級(jí)囊胚還是值得冷凍,在合適條件下行復(fù)蘇移植,可獲得比較滿意的臨床妊娠率和活產(chǎn)率。但是鑒于本研究樣本數(shù)量有限,尤其是>40歲以上患者和D7囊胚移植的患者數(shù)量偏少,因此后期還需要大量數(shù)據(jù)的研究來進(jìn)一步確認(rèn)。

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