23%溴氰蟲酰胺·三氟苯嘧啶懸浮劑高效液相色譜分析

李廣澤，王 芳，戴蘭芳，李歐燕

(深圳諾普信農(nóng)化股份有限公司,廣東深圳 518102)

三氟苯嘧啶(triflumezopyrim)是美國杜邦公司開發(fā)的一種新型介離子類殺蟲劑，作用于煙堿型乙酰膽堿受體正構(gòu)結(jié)合位點(diǎn)，抑制乙酰膽堿受體。與現(xiàn)有藥劑不存在交互抗性，安全性好，選擇性強(qiáng)，對(duì)稻飛虱特效且持效期長，是吡蚜酮之后防治稻飛虱的最佳藥劑品種。

溴氰蟲酰胺(cyantraniliprole)是繼氯蟲苯甲酰胺后杜邦公司開發(fā)的第二代魚尼丁受體抑制劑類殺蟲劑，通過激活靶標(biāo)害蟲的魚尼丁受體釋放橫紋肌和平滑肌細(xì)胞內(nèi)貯存的鈣離子，導(dǎo)致肌肉運(yùn)動(dòng)失衡、肌肉麻痹，最終導(dǎo)致害蟲死亡。其殺蟲譜更廣，對(duì)鱗翅目、鞘翅目和半翅目等害蟲均有良好殺蟲效果，且兼具觸殺與內(nèi)吸性，市場前景廣闊[1]。

23%溴氰蟲酰胺·三氟苯嘧啶懸浮劑復(fù)配制劑以二化螟和稻縱卷葉螟等鱗翅目害蟲及稻飛虱為防治靶標(biāo)，具有降低用工成本、方便省事等優(yōu)點(diǎn)，符合國家環(huán)保減量要求，是一種廣譜高效綠色殺蟲劑。

目前，溴氰蟲酰胺原藥[2]和可分散油懸浮劑[3]中有效成分分析方法已有報(bào)道， 10%三氟苯嘧啶懸浮劑[4]和20%三氟苯嘧啶水分散粒劑的高效液相色譜分析方法也有報(bào)道[5]，但關(guān)于溴氰蟲酰胺和三氟苯嘧啶混配制劑的分析方法尚未公開報(bào)道。本文采用反相高效液相色譜，使用ODS-BP反相柱和可調(diào)波長紫外檢測器，對(duì)溴氰蟲酰胺和三氟苯嘧啶同時(shí)進(jìn)行分析和定量。該方法簡便快速，分離效果好，準(zhǔn)確度和精密度均達(dá)到定量分析的要求，適用于產(chǎn)品的質(zhì)量分析。

1 試驗(yàn)部分

1.1 試劑和溶液

乙腈(色譜純)、磷酸(分析純)、水(超純水，電阻率18.2 MΩ·cm)、溴氰蟲酰胺標(biāo)準(zhǔn)品(質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.2%)、三氟苯嘧啶標(biāo)準(zhǔn)品(質(zhì)量分?jǐn)?shù)98.8%)均由杜邦公司提供；23%溴氰蟲酰胺·三氟苯嘧啶懸浮劑由深圳諾普信農(nóng)化股份有限公司提供。

1.2 儀器

U3000型高效液相色譜儀配DAD檢測器、紫外檢測器和自動(dòng)進(jìn)樣器，變色龍色譜工作站(美國賽默飛世爾科技有限公司)；SinoChrom ODS-BP色譜柱(大連依利特分析儀器有限公司，200 mm×4.6 mm，內(nèi)裝5 μm填充物)；過濾器及濾膜(孔徑0.22 μm，天津津騰科技有限公司)。

1.3 高效液相色譜操作條件

檢測器：紫外檢測器；流動(dòng)相：乙腈+0.05%磷酸水(40+60，體積比)；流速：1.0 mL/min；柱溫：25 ℃；檢測波長：260 nm；進(jìn)樣體積：5 μL。在該色譜條件下，三氟苯嘧啶和溴氰蟲酰胺的保留時(shí)間分別約為6.7 min和11.5 min。

溴氰蟲酰胺、三氟苯嘧啶及其混劑樣品的典型液相色譜圖見圖1和圖2。

圖1 溴氰蟲酰胺和三氟苯嘧啶混合標(biāo)樣的高效液相色譜圖

圖2 23%溴氰蟲酰胺·三氟苯嘧啶懸浮劑試樣的高效液相色譜圖

1.4 測定步驟

1.4.1 標(biāo)樣溶液的配制

分別稱取溴氰蟲酰胺標(biāo)樣0.08 g、三氟苯嘧啶標(biāo)樣0.05 g (精確至0.000 02 g)于同一50 mL容量瓶中，加入30 mL乙腈超聲溶解，冷至室溫后用乙腈定容至刻度，搖勻。用移液管移取上述溶液10 mL于50 mL容量瓶中，乙腈定容，過濾備用。

1.4.2 試樣溶液的配制

稱取試樣0.12 g(精確至0.000 02 g)于50 mL容量瓶中，加入30 mL乙腈超聲溶解，冷至室溫后用乙腈定容至刻度，搖勻，過濾備用。

1.4.3 測定

在上述操作條件下，待儀器基線穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，待相鄰2針三氟苯嘧啶和溴氰蟲酰胺標(biāo)樣溶液的峰面積相對(duì)變化小于1.5%時(shí)，按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)行測定。

1.4.4 計(jì)算

將測得的2針試樣溶液以及試樣前后2針標(biāo)樣溶液中三氟苯嘧啶和溴氰蟲酰胺的峰面積，分別進(jìn)行平均。三氟苯嘧啶和溴氰蟲酰胺的質(zhì)量分?jǐn)?shù)ω(%)，按式(1)計(jì)算：

式中：A1為標(biāo)樣溶液中三氟苯嘧啶或溴氰蟲酰胺峰面積的平均值；A2為試樣溶液中三氟苯嘧啶或溴氰蟲酰胺峰面積的平均值；m1為三氟苯嘧啶或溴氰蟲酰胺標(biāo)樣的質(zhì)量，g；m2為試樣的質(zhì)量，g；P為標(biāo)樣中三氟苯嘧啶或溴氰蟲酰胺的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%；5為標(biāo)準(zhǔn)溶液的稀釋倍數(shù)。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜條件的選擇

溴氰蟲酰胺和三氟苯嘧啶的紫外波長掃描圖分別見圖3和圖4。從圖中可以看出，溴氰蟲酰胺的最大吸收波長為197 nm附近，次吸收波長在265 nm附近；三氟苯嘧啶的最大吸收波長在20 5 nm附近，次吸收波長在233 nm附近?？紤]到200 nm附近溶劑吸收可能會(huì)對(duì)分析造成影響，因此將檢測波長選為260 nm。

圖3 溴氰蟲酰胺紫外光譜圖

圖4 三氟苯嘧啶紫外光譜圖

選用SinoChrom ODS-BP 200 mm×4.6 mm(id)反向柱作為分析色譜柱。分別使用甲醇、乙腈、水、磷酸水作為流動(dòng)相對(duì)試樣進(jìn)行檢測分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，乙腈與磷酸水組合作為流動(dòng)相時(shí)被試物的峰型對(duì)稱性最好，而用0.05%磷酸水和0.1%磷酸水對(duì)分析檢測區(qū)別不大。通過系列比例試驗(yàn)，最終確定流動(dòng)相為Ψ(乙腈∶0.05%磷酸水)=40+60(體積比)，流速1.0 mL/min。該條件下，有效成分可以得到很好的分離，基線平穩(wěn)，峰型對(duì)稱，分析時(shí)間適當(dāng)。

2.2 分析方法的線性相關(guān)性試驗(yàn)

分別稱取溴氰蟲酰胺標(biāo)準(zhǔn)品0.078 90 g、三氟苯嘧啶標(biāo)準(zhǔn)品0.052 34 g于同一50 mL容量瓶中，乙腈超聲溶解定容作為母液。分別移取5 mL母液至10、25、50 mL容量瓶中，再移取1 mL母液至一25 mL容量瓶中，分別用乙腈溶解定容。將5個(gè)容量瓶中的混合標(biāo)樣溶液在上述色譜操作條件下進(jìn)樣5 μL進(jìn)行分析，分別以溴氰蟲酰胺或三氟苯嘧啶質(zhì)量濃度(mg/mL)為橫坐標(biāo)，其相對(duì)應(yīng)峰面積(mAU*min)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，分別得到其線性方程。當(dāng)溴氰蟲酰胺質(zhì)量濃度為0.062 6～1.563 8 mg/mL，其線性方程為y=181.976 1x+0.693 5，線性相關(guān)系數(shù)為1.000 0；當(dāng)三氟苯嘧啶質(zhì)量濃度為0.041 4～1.034 2 mg/mL時(shí)，其線性方程為y=171.669 9x+0.824 1，線性相關(guān)系數(shù)為1.000 0。

2.3 分析方法的精密度試驗(yàn)

在相同的色譜條件下，從同一產(chǎn)品中準(zhǔn)確稱取5個(gè)試樣，在上述色譜操作條件下進(jìn)行分析并求平均值、標(biāo)準(zhǔn)偏差和變異系數(shù)，結(jié)果列于表1?？梢?，溴氰蟲酰胺的標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.083 3，變異系數(shù)為0.56%；三氟苯嘧啶的標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.054 0，變異系數(shù)為0.63%。

表1 分析方法的精密度試驗(yàn)結(jié)果

2.4 分析方法的準(zhǔn)確度試驗(yàn)

取適量已知質(zhì)量分?jǐn)?shù)的23%溴氰蟲酰胺·三氟苯嘧啶懸浮劑試樣(14.93%+8.56%) 5份于5個(gè)50 mL容量瓶中，分別加入混合標(biāo)準(zhǔn)溶液母液各5 mL，在上述色譜操作條件下進(jìn)行分析，結(jié)果列于表2?？梢姡迩柘x酰胺的平均回收率為99.6%，三氟苯嘧啶的平均回收率為100.8%。

表2 分析方法的準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果

3 結(jié) 論

本文采用高效液相色譜技術(shù)建立了一種同時(shí)測定23%溴氰蟲酰胺·三氟苯嘧啶懸浮劑產(chǎn)品中有效成分的方法。該方法具有較高的準(zhǔn)確度和精密度，線性關(guān)系良好，且操作簡便、快速，適于該農(nóng)藥產(chǎn)品質(zhì)量的控制。