6種殺菌劑對黃瓜細菌性角斑病的生長抑制活性及田間防效

徐沛東，魏方林，張 軍，李斯敏，郭 近，王益鋒，許丹倩

(1.浙江新農(nóng)化工股份有限公司，杭州 310023；2.浙江工業(yè)大學，杭州，310014)

黃瓜是我國種植面積最廣的主要食用蔬菜之一。近年來，黃瓜種植面積逐漸增加，尤其是設(shè)施栽培面積增多，受限于有限的土地資源，導(dǎo)致黃瓜生產(chǎn)在同一地塊連續(xù)多年進行種植，造成土壤和生產(chǎn)環(huán)境的惡化，黃瓜病害呈逐年加重的態(tài)勢[1,2]。黃瓜細菌性角斑病是由丁香假單胞桿菌黃瓜致病變種(Pseudomonas syringaepv.lachrymans)引起的細菌性病害[3]，該病原菌主要侵染黃瓜葉片，也可侵染莖稈和果實，并已成為黃瓜的第一大病害，常年中等以上程度發(fā)生，病害發(fā)生嚴重時，病株率可達到100%，使黃瓜減產(chǎn)50%～60%，嚴重影響了黃瓜的產(chǎn)量和經(jīng)濟效益[4]。防治黃瓜細菌性角斑病主要有篩選抗病品種、化學防治等措施。我國目前已有科研工作者開展黃瓜細菌性角斑病抗病種質(zhì)資源篩選，但抗病種質(zhì)資源在黃瓜育種中的應(yīng)用還比較有限，且高抗黃瓜品種還極為缺乏[5,6]。因此藥劑防治仍是控制黃瓜細菌性角斑病最有效、最快捷的方法，但用于防治該病害的藥劑存在明顯的多、亂、雜現(xiàn)象，且防效一般[7-10]。面對日趨嚴重的防治壓力，有些生產(chǎn)者采用倍量使用等不恰當手段，造成了殘留超標等問題[11,12]。因此，進一步探究黃瓜細菌性角斑病的化學防治技術(shù)，篩選出高效、低毒、低殘留的藥劑，規(guī)范黃瓜細菌性角斑病防治藥劑的使用，對于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 供試菌株

黃瓜細菌性角斑病病原菌(Pseudomonas syringaepv.lachrymans)，采自浙江省臺州市仙居縣三里溪楊府黃瓜細菌性角斑病葉片，經(jīng)過離體病組織分離法分離，根據(jù)柯赫氏法則進行回接鑒定，純化后接種到NA固體培養(yǎng)基上于4 ℃冰箱內(nèi)保存。

1.2 供試藥劑

40%春雷·噻唑鋅懸浮劑(浙江新農(nóng)化工股份有限公司)；20%噻唑鋅懸浮劑(浙江新農(nóng)化工股份有限公司)；2%春雷霉素水劑(日本北興化學工業(yè)株式會社；20%噻菌銅懸浮劑(浙江龍灣化工有限公司)；3%噻霉酮水分散粒劑(陜西西大華特科技實業(yè)有限公司)；46%氫氧化銅水分散粒劑(美國杜邦公司)。

1.3 試驗環(huán)境

試驗在浙江省金華市婺城區(qū)蔣堂村拱形保溫蔬菜大棚中進行。黃瓜品種為新超越，種植面積400 m2。黃瓜處于開花期至掛果初期。試驗地土質(zhì)為壤土，pH 5～7，土壤肥力較高，有機質(zhì)含量1.3%左右。

1.4 試驗方法

1.4.1 室內(nèi)毒力測定

試驗參考濁度法，并進行了改進[13,14]，將液體培養(yǎng)基改成固體培養(yǎng)基。將菌液定量均勻涂布在帶藥或不帶藥固體平板培養(yǎng)基上，在適宜溫度下培養(yǎng)一定時間后，將平板上的細菌洗滌下來，形成菌液懸濁液，測試菌液懸濁液的渾濁度，以吸光度(OD450)來表征，計算抑制率。為區(qū)別于標準的濁度法，筆者將改進后的方法命名為“平板生長量-濁度法”，該方法可以消除非水溶性藥劑分散于水中所形成的藥劑濁度對測試結(jié)果的影響。

NA固體培養(yǎng)基配制[13,15]：蛋白胨5.0 g、牛肉浸粉3.0 g、酵母浸粉1.0 g、蔗糖 10.0 g、瓊脂粉20 g，加水定容至1 L，混合均勻后調(diào)節(jié)pH至7.0左右，分裝至三角瓶內(nèi)封口高壓蒸汽滅菌。

NA液體培養(yǎng)基配制：在NA固體培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上去除瓊脂粉。

將藥劑配置成母液，取6 mL母液與54 mL融化的NA固體培養(yǎng)基混合均勻后倒至培養(yǎng)皿中，凝固后形成帶藥平板，待用；挑取黃瓜細菌性角斑病病原菌單菌落至30 mL NA液體培養(yǎng)基中，28 ℃、180 r/min震蕩培養(yǎng)24 h獲得病菌種子液，將種子液稀釋至1×105個/mL細菌菌懸液，待用；吸取0.1 mL菌懸液均勻涂布在帶藥平板上，放于28 ℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)24 h，吸取10 mL無菌水洗下病斑上菌落并混勻，采用紫外分光光度計測定吸光度值(OD450)。根據(jù)試驗設(shè)計配置梯度帶藥平板，并設(shè)不含藥劑改加等量無菌水處理的空白對照，每處理重復(fù)3次，分別接種細菌性角斑病病原菌后培養(yǎng)并洗下測定吸光度值。

根據(jù)公式⑴計算每個藥劑不同濃度對黃瓜細菌性角斑病病原菌生長的抑制率，數(shù)據(jù)采用DPS數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)進行統(tǒng)計，計算出藥劑的毒力回歸方程(Y=b+aX)、相關(guān)系數(shù)(R)、藥劑對病菌的抑制中濃度(EC50)[16,17]。

表1 6種藥劑濃度梯度

1.4.2 田間藥效

試驗處理：試驗共設(shè)7個藥劑處理和1個清水對照，每個處理3次重復(fù)，每個重復(fù)15 m2。處理分別是：40%春雷·噻唑鋅SC稀釋倍數(shù)800倍、1 000倍；20%噻唑鋅SC稀釋400倍；2%春雷霉素SL稀釋300倍；20%噻菌銅SC稀釋400倍；3%噻霉酮SC稀釋500倍；46%氫氧化銅WG稀釋1 000倍；清水對照。

試驗分別于2020年4月22日、4月29日和5月6日各施藥1次，共施藥3次。采用3WBD-16型背負式電動噴霧器于下午2點后進行全株噴霧施藥，葉片正反面均勻噴透，噴液量750 L/hm2。第1次施藥是黃瓜細菌性角斑病發(fā)生初期，調(diào)查藥前病情基數(shù)，于第3次施藥后7 d (5月13日)、14 d (5月20日)各調(diào)查1次，共計調(diào)查3次。每小區(qū)隨機5點取樣，每點調(diào)查3株全部葉片，按照葉片上病斑面積占整葉面積的百分比進行分級，計算病情指數(shù)和防治效果，數(shù)據(jù)采用Duncan’s新復(fù)極差法進行顯著性分析。具體分級標準為：0級：無病斑；1級：病斑面積占整個葉面積的5%及以下；3級：病斑面積占整個葉面積的6%～10%；5級：病斑面積占整個葉面積的11%～20%；7級：病斑面積占整個葉面積的21%～50%；9級：病斑面積占整個葉面積的51%以上[18,19]。根據(jù)公式⑵⑶計算病情指數(shù)和防治效果，采用DPS數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)對數(shù)據(jù)進行分析和差異顯著性檢驗(Duncan’s新復(fù)極差法)[17]。

2 結(jié)果與分析

2.1 室內(nèi)毒力

從表2可以看出，6種殺菌劑中，2%春雷霉素SL和3%噻霉酮WG對黃瓜細菌性角斑病病原菌的EC50較小，分別為8.39、13.90 mg/L，二者的抑制效果最大，離體活性最高；其次是40%春雷·噻唑鋅SC，抑制中濃度EC50為26.93 mg/L；其余3個殺菌劑對細菌性角斑病的離體活性一般，20%噻唑鋅SC、46%氫氧化銅WG和20%噻菌銅SC的EC50分別為60.74、73.35、108.86 mg/L。

表2 6種殺菌劑對黃瓜角斑病菌的毒力回歸方程(24h)

2.2 田間藥效

從表3可以看出，末次藥后7 d，40%春雷·噻唑鋅SC 800倍對黃瓜細菌性角斑病的防效為89.26%，極顯著優(yōu)于其他藥劑處理；40%春雷·噻唑鋅SC 1 000倍、20%噻唑鋅SC 400倍、20%噻菌銅SC 400倍、46%氫氧化銅WG 1 000倍的防效分別為82.11%、80.54%、79.44%、83.15%，4個處理間差異不顯著，但極顯著優(yōu)于2%春雷霉素SL 300倍(74.25%)、3%噻霉酮WG 500倍(73.44%)處理。末次藥后14 d，40%春雷·噻唑鋅SC 800倍對黃瓜細菌性角斑病的防效為80.89%，顯著好于其他藥劑處理，極顯著優(yōu)于2%春雷霉素SL 300倍(67.14%)處理；其余6個藥劑處理的防效為67.14%～73.54%，處理間無顯著差異。另外，試驗過程中未發(fā)現(xiàn)任何藥害癥狀，表明供試藥劑在測試劑量下對黃瓜安全。

表3 6種殺菌劑對黃瓜角斑病菌的防治效果

3 結(jié) 論

本研究測定了生產(chǎn)上常用的6種殺菌劑對黃瓜細菌性角斑病病原菌的室內(nèi)毒力，同時進行田間藥效試驗對比。結(jié)果表明，40%春雷·噻唑鋅SC的離體活性和田間防治均較佳，原因在于春雷霉素和噻唑鋅作用機制不同，二者復(fù)配可以協(xié)同增效，是用于防治黃瓜細菌性角斑病的理想藥劑，田間以800～1 000倍稀釋、間隔7 d、連續(xù)使用3次為宜，持效期可達14 d及以上，能保證黃瓜綠色安全生產(chǎn)。20%噻唑鋅SC、20%噻菌銅SC和46%氫氧化銅WG 3個藥劑對細菌性角斑病病原菌的離體活性一般，但田間藥效表現(xiàn)較好，可用于黃瓜細菌性角斑病的防治。2%春雷霉素SL和3%噻霉酮WG 2個藥劑在室內(nèi)毒力測定中表現(xiàn)效果最佳，但在田間細菌性角斑病的防治上表現(xiàn)卻相對較差，可能原因是這2種殺菌劑田間單獨使用頻繁，已產(chǎn)生了抗藥性，在用于防治黃瓜細菌性角斑病時要注意輪換使用或與其他殺細菌劑桶混使用，以延緩抗藥性的進一步發(fā)展。