6%苯唑草酮·唑啉草酯顆粒劑高效液相色譜分析

李彥飛，馮澤騰，張小軍

(中農(nóng)立華生物科技股份有限公司，北京 100052)

苯唑草酮(topramezone)，化學名稱為[3-(4,5-二氫-1,2-噁唑-3-基)-4-甲磺酰基-2-甲基苯基](5-羥基-1-甲基吡唑-4-基)甲酮，是巴斯夫開發(fā)的一種苯甲酯吡唑酮類除草劑。該劑主要抑制植物體內(nèi)對羥基苯基丙酮酸酯雙氧化酶(HPPD)活性，并對耐三嗪類、草甘膦、ALS抑制劑和ACCase抑制劑的雜草有良好的防除效果，能有效防除玉米田闊葉雜草及禾本科雜草，但對莎草科雜草效果較差[1-5]。唑啉草酯(pinoxaden)，化學名稱為8-(2,6-二乙基-4-甲基苯基)-1,2,4,5-四氫-7-氧-7H-吡唑[1,2-d][1,4,5]氧二氮-9-基-2,2-二甲基丙酸酯，是先正達開發(fā)的一種苯基吡唑啉類除草劑。其可抑制乙酰輔酶A羧化酶的活性，阻礙脂肪酸的生物合成和細胞膜形成，導致雜草生長停止并最終死亡。唑啉草酯為內(nèi)吸傳導型、選擇性禾本科雜草除草劑，廣譜，高效，被莖葉吸收[6-9]。

當前國內(nèi)有關苯唑草酮和唑啉草酯的復配及混劑分析方法尚無報道?；诖?，本文研究了用高效液相色譜法同時檢測6%苯唑草酮·唑啉草酯顆粒劑中的苯唑草酮和唑啉草酯的方法，旨在為該混配制劑生產(chǎn)的質(zhì)量控制和標準制定提供技術支撐。

1 試驗部分

1.1 儀器與試劑

1220型高效液相色譜儀配紫外檢測器和色譜工作站(美國Agilent)；TU-1901型紫外可見分光光度計(北京普析通用儀器有限責任公司)；AL204型電子分析天平(梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司，精度為0.000 1 g)。

乙腈(色譜純，Thermofisher)；冰乙酸(分析純，國藥集團化學試劑有限公司)；新蒸二次蒸餾水；苯唑草酮標樣(質(zhì)量分數(shù)≥99%，北京勤誠亦信科技開發(fā)有限公司提供)；唑啉草酯標樣(質(zhì)量分數(shù)≥99%，北京勤誠亦信科技開發(fā)有限公司提供)；6%苯唑草酮·唑啉草酯顆粒劑，自制。

1.2 色譜條件

液相色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18不銹鋼柱(250 mm×4.6 mm，內(nèi)裝5 μm C18填充物)；流動相：乙腈-1%冰乙酸水溶液(體積比55∶45)；流量：0.8 mL/min；柱溫：室溫；檢測波長：254 nm；進樣體積：5.0 μL。在上述色譜操作條件下，唑啉草酯和苯唑草酮的保留時間分別約為3.5、15.7 min。標樣及樣品的高效液相色譜圖分別見圖1、2。

圖1 唑啉草酯(進樣濃度700 mg/L)及苯唑草酮(進樣濃度300 mg/L)標樣的高效液相色譜圖

圖2 6%苯唑草酮·唑啉草酯顆粒劑的高效液相色譜圖

1.3 溶液的配制

1.3.1 標樣溶液的配制

稱取0.03 g苯唑草酮標樣(精確至0.000 02 g)，0.06 g唑啉草酯標樣(精確至0.000 2 g)，置于100 mL容量瓶中，用乙腈溶解并定容至刻度，搖勻，脫氣后備用。

1.3.2 試樣溶液的配制

稱取1.5 g 6%苯唑草酮·唑啉草酯顆粒劑(預先將顆粒劑粉碎成末，精確至0.000 2 g)，置于100 mL容量瓶中，用乙腈溶解并定容至刻度，搖勻，脫氣后備用。

1.4 測定

待儀器基線穩(wěn)定后，按照以上色譜條件連續(xù)注入數(shù)針標樣溶液，直到相鄰2針標樣響應值的相對變化小于1.5%后，方可按照標樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標樣溶液的次序進行測定。

1.5 計算

試樣中苯唑草酮(或唑啉草酯)的質(zhì)量分數(shù)X(%)按下式計算：

式中：A1為標樣溶液中苯唑草酮(或唑啉草酯)平均峰面積值；A2為試樣溶液中苯唑草酮(或唑啉草酯)平均峰面積值；m1為苯唑草酮(或唑啉草酯)標樣的質(zhì)量(g)；m2為試樣的質(zhì)量(g)；P為標樣中苯唑草酮(或唑啉草酯)的質(zhì)量分數(shù)(%)

2 結果與討論

2.1 流動相的選擇

以不同體系及同一體系中不同比例的2個物質(zhì)作為流動相時，苯唑草酮和唑啉草酯的出峰時間及峰形均有較大變化。當采用乙腈-水作為流動相時，峰型明顯優(yōu)于甲醇-水作為流動相，且加入1%乙酸后峰型和分離度變得更好。當流動相中乙腈比例太高時，唑啉草酯出峰時間過早，經(jīng)過反復測試，在流速0.8 mL/min，乙腈-1%乙酸水溶液的體積比為55∶45時，苯唑草酮和唑啉草酯的出峰時間相對適中，且峰型尖銳對稱無拖尾，分離效果好。

2.2 檢測波長的選擇

利用TU-1901型普析通用紫外可見分光光度計對苯唑草酮和唑啉草酯標樣溶液進行全波長紫外掃描，得到苯唑草酮或唑啉草酯的最大吸收波長與相關濃度響應值的紫外吸收光譜圖(圖3)。經(jīng)驗證，苯唑草酮和唑啉草酯在波長254 nm均有較大紫外吸收，且能夠得到較好的峰型同時避免雜質(zhì)的干擾。因此，最后選定本分析方法的檢測波長為254 nm。

圖3 苯唑草酮和唑啉草酯的紫外吸收譜圖

2.3 分析方法的線性相關性

分別稱取5個不同質(zhì)量的苯唑草酮和唑啉草酯標樣于5個100 mL的容量瓶中，配制成一系列標準溶液，按照本方法所確定的液譜條件進行進樣測定，結果見表1。以苯唑草酮(或唑啉草酯)的進樣質(zhì)量(x)為橫坐標，以苯唑草酮(或唑啉草酯)的峰面積(Y)為縱坐標做圖，得苯唑草酮(或唑啉草酯)的線性相關曲線。其線性方程分別為y苯唑草酮=6 078.9x-48.218，y唑啉草酯=1 022.1x-3.031，相關系數(shù)分別為r2苯唑草酮=0.999 8，r2唑啉草酯=0.999 6，說明該方法在測定范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關系。

表1 分析方法的線性相關性試驗結果

2.4 方法的精密度

從同一批6%的苯唑草酮·唑啉草酯顆粒劑樣品中準確連續(xù)稱取5個試樣，在上述操作條件下進行分析，試驗結果見表2。苯唑草酮和唑啉草酯標準偏差均為0.012，變異系數(shù)分別為0.59%、0.29%。由此可見，該方法的精密度能很好地滿足工業(yè)分析的定量要求。

表2 分析方法的精密度試驗結果

2.5 方法的準確度

準確稱取5個6%苯唑草酮·唑啉草酯顆粒劑試樣，加入一定量的苯唑草酮和唑啉草酯標樣，按1.2節(jié)的液相色譜條件進行測定，并計算回收率，結果見表3。苯唑草酮(99.3%)和唑啉草酯(99.1%)的平均回收率均較高，符合分析標準。

表3 分析方法的準確度試驗結果

3 結 論

本文建立了用高效液相色譜法同時測定苯唑草酮和唑啉草酯混配制劑中的有效成分的定量分析方法。該方法分離效果良好，準確度和精密度均較高，且簡單高效易操作，可用于苯唑草酮和唑啉草酯復配制劑的質(zhì)量控制，具有很強的可行性和實際應用價值。