XRCC2在結(jié)直腸癌中的表達(dá)及其臨床意義

白 聰 ,董志敏

(1.大同市第三人民醫(yī)院病理科,山西大同 037008;2.大同市第二人民醫(yī)院病理科,山西大同037000)

近年來(lái)，結(jié)直腸癌（colorectal cancer）的發(fā)生率隨著人們生活飲食習(xí)慣的改變而逐步呈攀升態(tài)勢(shì)[1]。XRCC2(X 射線修復(fù)交叉互補(bǔ)蛋白2，X-Ray Repair Cross Complementing Protein 2)是一種蛋白，在同源重組修復(fù)過(guò)程中具有十分關(guān)鍵的作用，可在斷裂的DNA 末端招募到Rad51，促使Rad51 提高，保持基因完整。作為同源重組修復(fù)（homology recombination,HR)最為主要的蛋白，Rad51 異常表達(dá)與結(jié)直腸癌進(jìn)展具有密切的關(guān)系[2]。現(xiàn)階段，雖然在人類諸多惡性腫瘤中發(fā)現(xiàn)CRCC2 表達(dá)異常，但是甚少報(bào)道結(jié)直腸癌組織中CRCC2 表達(dá)意義。本研究以300 例結(jié)直腸癌患者作為觀察對(duì)象，重點(diǎn)分析了CRCC2 在結(jié)直腸癌中表達(dá)的意義，為臨床預(yù)測(cè)、防治結(jié)直腸癌提供有效參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集201501-201912月大同市第三人民醫(yī)院和大同市第二人民醫(yī)院300例結(jié)直腸癌手術(shù)患者，包括171 例男性和129 例女性，年齡34～71 歲，中位年齡50 歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：經(jīng)手術(shù)病理證實(shí)為結(jié)直腸癌；術(shù)前不曾接受過(guò)放化療；均為原發(fā)性。排除合并其他惡性腫瘤、復(fù)發(fā)性結(jié)直腸癌、臨床資料缺失不完整而影響統(tǒng)計(jì)的患者。

1.2 方法

檢測(cè)癌組織、癌旁組織（距離癌組織邊緣5 cm 以上的正常黏膜）的XRCC2水平。

1.2.1 qRT-PCR檢測(cè)

切取60 mg 癌旁組織、60 mg 癌組織，逆轉(zhuǎn)錄酶催化之后生成cDNA，采用SYBR Green 法，制備標(biāo)準(zhǔn)曲線。PCR 擴(kuò)增具體條件為：60 s、94 ℃，30 s、60 ℃，45 s、72 ℃為一個(gè)循環(huán)，共循環(huán)35個(gè)。

1.2.2 免疫組化染色

用4%多聚甲醛固定組織，石蠟包埋，然后切成4 μm 薄片。脫蠟、脫水處理后，將枸櫞酸鈉0.01 mol/L加入到沸水之中制成pH=6.0 的緩沖溶液，進(jìn)行高壓熱修復(fù)，小火保持熱度并繼續(xù)維持10 min，給予抗原修復(fù)，孵育30 min，將內(nèi)源性過(guò)氧化物酶封閉，0.5 h后將XRCC2抗體加入其中，在4 ℃環(huán)境下過(guò)夜，第2日置于37 ℃環(huán)境下持續(xù)復(fù)溫60 min，取生物素化二抗加入，在37 ℃環(huán)境下持續(xù)孵育60 min，DAB 顯示顏色之后，復(fù)染、分化。最后脫水、封片，進(jìn)行顯微鏡下觀察。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)處理

利用SPSS22.0 軟件對(duì)研究數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表達(dá)計(jì)量資料并用t 檢驗(yàn)，方差分析多組數(shù)據(jù)；用例數(shù)或構(gòu)成比(%)表達(dá)計(jì)數(shù)資料并用卡方檢驗(yàn)。生存率計(jì)算方法以Kaplan-Meier 法為主。Logrank 檢驗(yàn)影響生存率的單因素，多因素分析則采用Cox模型。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α設(shè)置為0.05。

2 結(jié)果

2.1 結(jié)直腸癌XRCC2表達(dá)情況

qRT-PCR 檢測(cè)提示XRCC2 在癌組織中的表達(dá)水平（1.7±0.3）顯著高于 癌旁組織（0.5±0.1）（P=0.0001）；免疫組化染色提示69.67%（209/300）結(jié)直腸癌組織XRCC2 陽(yáng)性，另30.33%（91/300）為結(jié)直腸癌組織XRCC2陰性。

2.2 結(jié)直腸癌病理特征與XRCC2表達(dá)的關(guān)系

XRCC2的表達(dá)與T分期、TNM分期、M分期、Duke’s分期、腫瘤大小、肝臟轉(zhuǎn)移、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P ＜0.05）；與患者年齡、性別、N分期無(wú)關(guān)（P ＞0.05）。見(jiàn)表1。

表1 結(jié)直腸癌病理特征與XRCC2表達(dá)的關(guān)系

2.3 結(jié)直腸癌預(yù)后與XRCC2表達(dá)的關(guān)系

XRCC2 陽(yáng)性者無(wú)復(fù)發(fā)生存期(Recurrence-free survival,DFS)中位數(shù)38 月、總生存期(Overall survival,OS)中位數(shù)41月，顯著短于XRCC2陰性者49月、55月（P ＜0.05）。Cox 多變量分析，結(jié)直腸癌預(yù)后因素與Duke’s 分期、XRCC2、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、年齡有關(guān)（P ＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 結(jié)直腸癌預(yù)后與XRCC2表達(dá)的關(guān)系

3 討論

qRT-PCR 檢測(cè)方法具有較高的靈敏度，以此來(lái)對(duì)比癌組織、癌旁組織中XRCC2表達(dá)水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)癌組織XRCC2 顯著高于癌旁組織；與此同時(shí)進(jìn)行免疫組化染色檢查，發(fā)現(xiàn)癌組織XRCC2 陽(yáng)性者占比69.67%。這說(shuō)明XRCC2表達(dá)與結(jié)直腸癌的進(jìn)展具有密切的關(guān)系[3]?，F(xiàn)階段，臨床發(fā)現(xiàn)在多種惡性腫瘤中XRCC2 存在異常表達(dá)，比如胃癌、乳腺癌、大腸癌、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、食管癌等[4]。究其原因，通過(guò)同源重組修復(fù)的XRCC2 參與DNA 斷裂，保持基因完整，抑制癌灶形成。若XRCC2 表達(dá)缺失，將無(wú)法有效修復(fù)受損的DNA，進(jìn)而導(dǎo)致染色體異變、畸形，降低細(xì)胞基因組的穩(wěn)定性，最終誘發(fā)癌灶[5]。但是相關(guān)研究學(xué)者認(rèn)為高水平的XRCC2可導(dǎo)致細(xì)胞增殖過(guò)度而引起癌灶[6]?，F(xiàn)階段，隨著臨床深入研究，發(fā)現(xiàn)癌灶的出現(xiàn)與癌細(xì)胞增殖失控有關(guān)之外，還與細(xì)胞調(diào)節(jié)紊亂、細(xì)胞凋亡有關(guān)[7]。這說(shuō)明在腫瘤不斷發(fā)展過(guò)程中，XRCC2調(diào)控機(jī)制十分復(fù)雜。

本研究還分析了XRCC2表達(dá)與結(jié)直腸癌病理的關(guān)系，結(jié)果XRCC2 表達(dá)與Duke’s 分期、TNM 分期、T分期、癌灶大小、M分期、肝臟轉(zhuǎn)移、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，與性別、年齡、N 分期無(wú)關(guān)。除此之外，XRCC2 水平較低患者的無(wú)復(fù)發(fā)生存期、總生存期明顯長(zhǎng)于XRCC2 水平較高者，深入Cox 分析，結(jié)直腸癌預(yù)后因素與Duke’s分期、XRCC、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、年齡有關(guān)?？蓪RCC2表達(dá)作為臨床預(yù)判患者預(yù)后的主要指標(biāo)。

總而言之，檢測(cè)結(jié)直腸癌患者XRCC2表達(dá)水平，有助于臨床準(zhǔn)確評(píng)估結(jié)直腸癌患者預(yù)后，進(jìn)而為臨床有效治療結(jié)直腸癌患者提供參考。