頂空氣相色譜法測定鹽酸奧布卡因中有機溶劑殘留量

魏樂坤，張肖肖，劉宜輝

（1.山東海佑福瑞達(dá)制藥有限公司，山東 臨沂 276700；2.山東省藥學(xué)科學(xué)院，山東 濟(jì)南 250101）

鹽酸奧布卡因（oxybuprocaine hydrochloride），化學(xué)名為2-（二乙胺基）乙基-4-氨基-3-丁氧基苯甲酸酯鹽酸鹽，是一種局部麻醉藥，具有滲透力強、吸收快、表面麻醉作用強等優(yōu)點，被廣泛應(yīng)用于各種檢查及小手術(shù)的表面麻醉、潤滑止痛等方面[1-4]。該原料藥在合成和精制過程中用到二氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇、乙醇、甲基叔丁基醚、二甲基甲酰胺，這些有機溶劑如果殘留在藥品中會對人體健康產(chǎn)生一定危害[5-7]，因此需對產(chǎn)品中的上述溶劑殘留量進(jìn)行檢測。本試驗采用頂空氣相色譜法對鹽酸奧布卡因原料藥中可能存在的6種有機溶劑的殘留量進(jìn)行檢測，結(jié)果表明，方法操作簡單，靈敏度及準(zhǔn)確度高，可同時檢測鹽酸奧布卡因中6種溶劑殘留量，可用于鹽酸奧布卡因原料藥的質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 7890B氣相色譜儀（配備FID檢測器，7697A頂空進(jìn)樣器，美國安捷倫）；AG系列空氣發(fā)生器（濟(jì)南格潤實驗儀器有限公司）；LM系列氫氣發(fā)生器（濟(jì)南格潤實驗儀器有限公司）；十萬分之一電子天平（瑞士梅特勒）。

1.2 試藥

二氯甲烷，乙酸乙酯，甲醇，乙醇，甲基叔丁基醚，二甲基甲酰胺（分析純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司）；水（超純水）。鹽酸奧布卡因原料藥（山東海佑福瑞達(dá)制藥有限公司，批號：F06-1808001，F(xiàn)06-1808002，F(xiàn)06-1808003）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

Agilent DB-624毛細(xì)管柱（30.0 m×0.53 mm，3.00 μm）；進(jìn)樣口溫度200 ℃；檢測器溫度200 ℃；載氣：氮氣；載氣流速：1.5 ml/min；分流比：10:1；程序升溫：40 ℃保持3 min，10 ℃/min升至120 ℃，保持8 min。頂空條件：平衡溫度88 ℃，平衡時間20 min，定量環(huán)溫度110 ℃，傳輸線溫度120 ℃，自動頂空進(jìn)樣，進(jìn)樣量1 ml。

2.2 溶液的配制

2.2.1 對照品溶液的制備 取二氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇、乙醇、甲基叔丁基醚、二甲基甲酰胺適量，分別置10 ml加有適量水的量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，配制成質(zhì)量濃度分別為6，50，30，50，50，8.8 mg/ml的對照品儲備液，分別精密量取上述儲備液各1 ml，置同一100 ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。取上述對照品溶液2.0 ml，置20 ml頂空進(jìn)樣瓶中，密封。

2.2.2 專屬性溶液的制備 取鹽酸奧布卡因100 mg，精密稱定，置20 ml頂空進(jìn)樣瓶中，精密加入對照品溶液2 ml，密封后搖勻。

2.3 專屬性實驗

取上述空白溶劑（2 ml水）、專屬性溶液分別頂空進(jìn)樣，記錄色譜圖，見圖1。結(jié)果，空白溶劑對各待測組分的測定無干擾，甲醇、乙醇、二氯甲烷、甲基叔丁基醚、乙酸乙酯、二甲基甲酰胺主峰的理論塔板數(shù)分別為6189，17 019，43 034，48 022，118 903，120 278，相鄰峰的分離度分別是4.45，6.48，2.01，9.48，42.12，說明該方法對鹽酸奧布卡因原料中殘留溶劑的測定具有良好專屬性。

圖1 專屬性實驗譜圖

2.4 精密度試驗

精密量取對照品溶液2 ml，置20 ml頂空進(jìn)樣瓶中，密封后搖勻，平行配制6份，進(jìn)行測定，記錄色譜圖，并計算各溶劑峰面積和保留時間的RSD，結(jié)果見表1。由表1可見，甲醇、乙醇、二氯甲烷、甲基叔丁基醚、乙酸乙酯、二甲基甲酰胺峰面積與保留時間的RSD均不大于10.0 %，說明方法的精密度良好。

表1 精密度試驗結(jié)果

2.5 檢測限和定量限

2.5.1 定量限的確定 分別精密量取甲醇、乙醇、二氯甲烷、甲基叔丁基醚、乙酸乙酯、二甲基甲酰胺適量，用稀釋劑（水）逐步稀釋，直至信噪比（S/N）約為10，以確定定量限（LOQ），結(jié)果見表2。

表2 定量限試驗結(jié)果

2.5.2 檢測限的確定 將定量限濃度用稀釋劑逐步稀釋，直至S/N約為3時，即為檢測限（LOD），其結(jié)果見表3。

表3 檢測限試驗結(jié)果

2.6 線性試驗

精密量取甲醇對照品儲備液0.1，0.2，0.5，1.0，1.5 ml，分別置于100 ml容量瓶中，用稀釋劑（水）稀釋制成濃度分別為0.06，0.12，0.24，0.3，0.45 mg/ml的溶液，分別進(jìn)樣，記錄色譜圖。以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得線性回歸方程。乙醇、二氯甲烷、甲基叔丁基醚、乙酸乙酯和二甲基甲酰胺同樣按照以上方法得到線性方程，見表4。

表4 線性試驗結(jié)果

2.7 準(zhǔn)確度試驗

分別精密量取對照品儲備液0.5，1.0，1.5 ml，置100 ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為溶液1～3。取鹽酸奧布卡因100 mg，精密稱定，分別置20 ml頂空進(jìn)樣瓶中，精密加入溶液1～3各2 ml，各3份，密封后搖勻，作為回收率溶液。分別進(jìn)樣測定，按外標(biāo)法計算，結(jié)果甲醇、乙醇、二氯甲烷、甲基叔丁基醚、乙酸乙酯和二甲基甲酰胺的回收率分別為100.05 %，99.21 %，99.65 %，99.34 %，98.79 %，98.99 %，RSD分別為0.51 %，1.1 %，0.89 %，0.75 %，0.99 %，1.1 %。

2.8 樣品的測定

3批鹽酸奧布卡因原料藥殘留溶劑測定結(jié)果見表5。

表5 鹽酸奧布卡因原料藥中殘留溶劑的測定結(jié)果

鹽酸奧布卡因原料殘留溶劑的限度參考2015年版《中國藥典》，甲醇、乙醇、二氯甲烷、甲基叔丁基醚、乙酸乙酯、二甲基甲酰胺殘留量限度分別為3000，5000，600，5000，5000，880 ppm。由表5可見，3批樣品中的甲醇、乙醇、二氯甲烷、二甲基甲酰胺、乙酸乙酯均未檢出，甲基叔丁基醚殘留量未超過限度。

3 討論

《中國藥典》2015 年版四部通則 0861 規(guī)定，二氯甲烷、甲醇、二甲基甲酰胺為第二類殘留溶劑，乙醇、甲基叔丁基醚、乙酸乙酯為第三類殘留溶劑，這6種殘留溶劑對人體有一定的危害，應(yīng)限量使用。

基于DB624毛細(xì)管柱對殘留溶劑檢測的良好分離效能，我們使用該色譜柱通過對頂空進(jìn)樣、程序升溫、流速等色譜條件的調(diào)整，確定了本文的檢測方法，鹽酸奧布卡因樣品中6種殘留溶劑在該方法條件下均得到良好分離，且峰形良好。

本試驗通過專屬性、精密度、檢測限與定量限等項目的驗證，表明該頂空氣相色譜法分離度好、靈敏度高，適用于實際生產(chǎn)中鹽酸奧布卡因原料殘留溶劑（甲醇、乙醇、二氯甲烷、甲基叔丁基醚、乙酸乙酯、二甲基甲酰胺）的測定。