飼料中蛋白質(zhì)水平對澳洲淡水龍蝦生長、肉質(zhì)及免疫力的影響

張寶龍，曲木，趙子續(xù)，唐子鵬，侯樹旺，翟勝利

（天津現(xiàn)代晨輝科技集團有限公司 天津市水族動物功能性飼料企業(yè)重點實驗室，天津 301800）

澳洲淡水龍蝦（Cherax quadricarinatus）是一種原產(chǎn)于澳大利亞外形酷似龍蝦、個體較大的淡水養(yǎng)殖經(jīng)濟品種，因其營養(yǎng)豐富、肉質(zhì)細(xì)膩滑脆、味道鮮美香甜、風(fēng)味獨特等優(yōu)勢成為目前世界上的名貴經(jīng)濟蝦種之一[1]。王廣軍等人[2]發(fā)現(xiàn)澳洲淡水龍蝦的出肉率及肌肉中所含的氨基酸及Ca、Fe等元素顯著高于克氏原螯蝦。目前，澳洲淡水龍蝦在我國的養(yǎng)殖范圍已經(jīng)逐步擴大，在其養(yǎng)殖成本中，飼料占據(jù)將近50%。飼料中適當(dāng)?shù)牡鞍缀繉λa(chǎn)動物可以起到一定的促進作用，盲目升高蛋白含量會造成飼料成本的上升，對養(yǎng)殖動物的生長起抑制作用，同時也會加大養(yǎng)殖水體的環(huán)境負(fù)擔(dān)；而飼料蛋白質(zhì)含量過低，會使水產(chǎn)動物生長緩慢、抗病力差，進而延誤生產(chǎn)時機[3]。因此，確定澳洲淡水龍蝦飼料中適宜的蛋白水平對研制低成本、高營養(yǎng)澳洲淡水龍蝦飼料具有一定的參考意義。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

本試驗所用指標(biāo)測定試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。

GZX-9070MBE電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱，上海博迅實業(yè)有限公司；HH-2水浴鍋，上海力辰儀器科技有限公司；HKL-220環(huán)模顆粒機，滕州三濃機械廠；JP-020超聲波清洗器，深圳市潔盟清洗設(shè)備有限公司；JW-3021HR低溫高速離心機，安徽嘉文儀器裝備有限公司；WH-2微型旋渦混合儀，上海滬西分析儀器廠有限公司；FSH-2A可調(diào)高速均質(zhì)機，青島致仕工業(yè)技術(shù)有限公司；UV-1800紫外分光光度計，翱藝儀器(上海)有限公司；BSM電子分析天平，上海卓精電子科技有限公司；SKY全波長酶標(biāo)儀，Thermo。

1.2 飼料配方

以全蝦粉10.00%、豆粕23.00%、啤酒酵母4.00%、花生粕8.00%、豆油1.50%、魚油1.50%、大豆卵磷脂0.50%、膽固醇0.50%、膨潤土1.00%、乳酸鈣2.00%、粘合劑0.50%、氯化膽堿0.50%、1.00%蝦用預(yù)混料1.00%、4.00%蝦用預(yù)混料4.00%為不變量，通過改變魚粉、面粉、苜蓿草粉、細(xì)麩皮、米糠的含量來配置蛋白含量（CP%）分別為29.48%、30.50%、32.61%、34.64%、36.70%、38.75%、40.80%的飼料配方（表1），用制粒機制成配合飼料，在陰涼干燥處風(fēng)干后，測定其營養(yǎng)成分。

表1 不同蛋白含量的飼料配方及飼料營養(yǎng)成分

1.3 試驗材料與養(yǎng)殖管理

試驗所用蝦購自蘇州傲龍生態(tài)水產(chǎn)養(yǎng)殖有限公司，每個處理3個平行，每個平行放置70尾蝦，試驗蝦養(yǎng)殖于水泥池中（水泥池面積2 m×2 m）。試驗初期，稱其總重，選擇20尾蝦測定其腹長、全長、體長、體寬、體重、螯足長等指標(biāo)。每天記錄投喂量用于生長指標(biāo)計算。每隔3 d測定1次水質(zhì)，養(yǎng)殖過程中水體氨氮含量≤0.1 mg/L，亞硝酸鹽含量≤0.2 mg/L，溶解氧含量為10 mg/L，pH為8.4，總硬度為120 mg/L。

1.4 指標(biāo)測定

1.4.1 樣品采集

養(yǎng)殖試驗結(jié)束后，每個池子分別取15尾蝦，取其血漿，保存于2 mL離心管中，之后取其肝胰臟、肌肉組織，將組織（g）、0.85%生理鹽水（mL）按1∶4的比例用勻漿機（FSH-2A）勻漿，之后在4 ℃、4 000 r/min條件下離心15 min，然后取上清制成20%勻漿液，保存于-20 ℃冰箱中待測。

1.4.2 指標(biāo)測定

1.4.2.1 生長指標(biāo)測定

分別于養(yǎng)殖初始和養(yǎng)殖56 d用數(shù)顯游標(biāo)卡尺和直尺測定龍蝦的腹長、全長、體長、體寬及螯足長，并根據(jù)公式（1）～（4）計算增重率（WGR）、特定生長率（SGR）、餌料系數(shù)（FCR）以及蛋白質(zhì)效率（PER）。

式（1）～（4）中，Wt為最終體重，g；W0為初始體重，g；t為試驗天數(shù)，d；F為飼料攝入量干重，g；CP為飼料粗蛋白質(zhì)含量，%。

1.4.2.2 肉質(zhì)測定

（1）肌肉滴水損失率測定

取澳洲淡水龍蝦肌肉，干紗布擦干表面水分，稱重記錄，放于10 mL離心管中，離心管底部放有適當(dāng)?shù)奈?，? ℃、4 000 r/min條件下離心20 min后取出，擦干背肌表面水分，稱重記錄，并根據(jù)公式（5）計算滴水損失率（DL）。

（2）肌肉蒸煮損失率測定

取澳洲淡水龍蝦肌肉，干紗布擦干表面水分，稱重記錄，裝入密封袋中，放入70 ℃的恒溫水浴鍋中蒸煮15 min，取出冷卻至室溫，擦干背部肌肉表面水分，稱重記錄，根據(jù)公式（6）計算蒸煮損失率（CL）。

（3）水分

剪取澳洲淡水龍蝦肌肉1 g左右，用吸水紙吸干表面水分，將肌肉放入水分皿中，于60 ℃電熱鼓風(fēng)干燥箱中烘干至恒重，根據(jù)公式（7）計算水分含量。

式（7）中，M1為烘干前水分皿及肌肉總質(zhì)量，g；M2為烘干后水分皿及肌肉總質(zhì)量，g；M0：水分皿質(zhì)量，g。

（4）總氨基酸含量測定

肌肉總氨基酸含量采用南京建成生物工程研究所的試劑盒測定。

1.4.2.3 免疫指標(biāo)測定

養(yǎng)殖試驗結(jié)束后，測定澳洲淡水龍蝦血漿及組織中酸性磷酸酶（Acid Phosphatase，ACP）、過氧化氫酶（Catalase，CAT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（Glutamic Oxalacetic Transaminase，GOT）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（Glutamic-Pyruvic Transaminase，GPT）、谷胱甘肽過氧化物酶（Glutathion Peroxidase，GSH-PX）、谷胱甘肽-S轉(zhuǎn)移酶（Glutathione S-Transferase，GSHST）、超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase，SOD）的酶活以及丙二醛（Malondialdehyde，MDA）含量、總抗氧化能力（Total Antioxidant Capacity，T-AOC）。血漿室溫融化后直接測定，組織根據(jù)試劑盒需要在20%勻漿液基礎(chǔ)上進行稀釋。

2 結(jié)果與分析

2.1 飼料蛋白水平對生長性能的影響

由表2可知，澳洲淡水龍蝦的增重率及特定生長率在飼料蛋白質(zhì)含量為34.64%時最高且顯著高于其他各組（P＜0.05）；蛋白質(zhì)效率隨飼料蛋白質(zhì)水平的提高呈先上升后下降的趨勢，最大值仍出現(xiàn)在34.64%水平組，與29.48%、32.61%兩組差異不顯著（P＞0.05）；餌料系數(shù)變化趨勢與其他生長指標(biāo)相反，呈先下降后上升趨勢，最低值出現(xiàn)在34.64%水平組，與29.48%、32.61%、40.80%三組無顯著差異（P＞0.05）。

表2 飼料蛋白水平對澳洲淡水龍蝦生長性能的影響

由表3可知，不同飼料蛋白質(zhì)水平下，澳洲淡水龍蝦的體長及腰寬無顯著變化（P＞0.05）；全長、螯長最大值均出現(xiàn)在34.64%蛋白組，分別顯著高于30.50%、38.75%蛋白組（P＜0.05），但與其他各組無顯著差異（P＞0.05）；腹長最大值出現(xiàn)在34.64%蛋白組，顯著高于30.50%、38.75%蛋白組（P＜0.05）；澳洲淡水龍蝦體重在飼料蛋白含量為34.64%時最高，且顯著高于其他蛋白組（P＜0.05）。

表3 飼料蛋白水平對澳洲淡水龍蝦形體指標(biāo)的影響

2.2 飼料蛋白水平對肌肉成分及出肉率的影響

由下表知：飼料蛋白水平對澳洲淡水龍蝦肌肉蒸煮損失率無顯著影響（P＞0.05），最低值出現(xiàn)在34.64%蛋白組，且在同組，肌肉滴水損失率也達到最低，顯著低于29.48%蛋白組（P＜0.05）。肌肉水分在34.64%蛋白組最低，與30.50%、36.70%、38.75%蛋白組差異不顯著（P＞0.05），但顯著低于其他組（P＜0.05）；出肉率及肌肉中總氨基酸含量最大值均出現(xiàn)在34.64%蛋白組，與32.61%蛋白組沒有顯著差異（P＞0.05）。

表4 飼料蛋白水平對淡水澳洲龍蝦肉質(zhì)及出肉率的影響

2.3 飼料蛋白水平對組織和血漿中免疫力的影響

2.3.1 ACP活性

由表5可知，澳洲淡水龍蝦組織及血漿中ACP活性最小值均出現(xiàn)在34.64%蛋白組。肌肉中34.64%蛋白組與29.48%、30.50%、32.61%蛋白組無顯著差異（P＞0.05），但顯著低于其他組（P＜0.05）；肝臟中34.64%蛋白組顯著低于其他各組（P＜0.05）；血漿中34.64%蛋白組與29.48%、32.61%蛋白組差異不顯著（P＞0.05）。

表5 飼料蛋白水平對澳洲淡水龍蝦組織和血漿中ACP活性的影響

2.3.2 CAT活性

由表6可知，澳洲淡水龍蝦組織及血漿中CAT活性隨飼料蛋白質(zhì)含量的上升呈先升高再降低趨勢，最大值出現(xiàn)在34.64%蛋白組。肌肉中34.64%蛋白組與32.61%蛋白組差異不顯著（P＞0.05），但顯著高于其他組（P＜0.05）；肝臟、血漿中34.64%蛋白組顯著高于其他組（P＜0.05）。

表6 飼料蛋白水平對澳洲淡水龍蝦組織和血漿中CAT活性的影響

2.3.3 GOT、GPT活性

由表7可知，澳洲淡水龍蝦組織及血漿中GOT、GPT活性最小值均出現(xiàn)在34.64%蛋白組。肝臟中34.64%蛋白組GOT、GPT活性均顯著低于36.70%、38.75%蛋白組（P＜0.05），但與其他組無顯著差異（P＞0.05）。血漿中34.64%蛋白組GOT活性與29.48%、30.50%、32.61%蛋白組差異不顯著（P＞0.05），GPT活性與29.48%、36.70%、38.75%蛋白質(zhì)組無顯著差異（P＞0.05），但顯著低于其他各組（P＜0.05）。

表7 飼料蛋白水平對澳洲淡水龍蝦組織和血漿中GOT、GPT活性的影響

2.3.4 GSH-PX活性

由表8可知，34.64%蛋白組澳洲淡水龍蝦肌肉及肝臟中GSH-PX與32.61%蛋白組差異不顯著（P＞0.05）；血漿中34.64%蛋白組與32.61%、29.48%蛋白組差異不顯著（P＞0.05），但顯著高于其他組（P＜0.05）。

表8 飼料蛋白水平對澳洲淡水龍蝦組織和血漿中GSH-PX活性的影響

2.3.5 GSH-ST活性

由表9可知，澳洲淡水龍蝦組織和血漿中GSH-ST最大值出現(xiàn)在34.64%蛋白組。肌肉及肝臟中34.64%蛋白組與36.70%蛋白組差異不顯著（P＞0.05），但顯著高于其他組（P＜0.05）。飼料蛋白水平的變化對血漿中GSH-ST活性無顯著影響（P＞0.05）。

表9 飼料蛋白水平對澳洲淡水龍蝦組織和血漿中GSH-ST活性的影響

2.3.6 MDA含量

由表10可知，澳洲淡水龍蝦組織和血漿中MDA最小值出現(xiàn)在34.64%蛋白組。肌肉中34.64%蛋白組顯著低于其他組（P＜0.05）。肝臟中34.64%蛋白組與32.61%蛋白組差異不顯著（P＞0.05），但顯著低于其他組（P＜0.05）。血漿中34.64%蛋白組顯著低于其他組（P＜0.05）。

表10 飼料蛋白水平對澳洲淡水龍蝦組織和血漿中MDA含量的影響

2.3.7 SOD活性

由表11可知，澳洲淡水龍蝦肌肉中34.64%蛋白組SOD活性顯著高于其他各組（P＜0.05）；肝臟中34.64%蛋白組與29.48%、32.61%蛋白組無顯著差異（P＞0.05）；血漿中34.64%蛋白組顯著高于36.70%、38.75%組（P＜0.05），與其他飼料組差異不顯著（P＞0.05）。

表11 飼料蛋白水平對澳洲淡水龍蝦組織和血漿中SOD活性的影響

2.3.8 T-AOC含量

由表12可知，澳洲淡水龍蝦肌肉、肝臟及血漿中T-AOC最大值均出現(xiàn)在34.64%蛋白組，32.61%蛋白組無顯著差異（P＞0.05），但顯著高于其他飼料組組（P＜0.05）。

表12 飼料蛋白水平對澳洲淡水龍蝦組織和血漿中T-AOC的影響

2.4 討論

2.4.1 飼料蛋白水平對澳洲淡水龍蝦生長性能的影響

生長性能是衡量經(jīng)濟水產(chǎn)動物可獲得價值的重要指標(biāo)，本試驗測定了澳洲淡水龍蝦生長指標(biāo)及體長、體寬等形體指標(biāo)，發(fā)現(xiàn)飼料蛋白水平會顯著影響其生長，當(dāng)?shù)鞍缀繛?4.64%時生長指標(biāo)達到最佳，這與張佳潤等人[4]和姜松等人[5]對斑節(jié)對蝦及茍妮娜等人[6]對淡水養(yǎng)殖凡納濱對蝦的研究結(jié)果一致。劉永濤等[7]研究發(fā)現(xiàn)在稻田養(yǎng)蝦模式下用添加復(fù)方黃芪多糖蛋白質(zhì)含量≥26%的飼料投喂克氏原螯蝦可得到較好的促生長效果。盧耀鵬等[8]研究發(fā)現(xiàn)紅螯螯蝦幼蝦飼料最適宜的蛋白質(zhì)水平為36.98%。索帥等[9]研究發(fā)現(xiàn)脊尾白蝦飼料蛋白水平為39%、脂肪水平為5%時相對增重率較高，且餌料系數(shù)最低，這與本試驗結(jié)果略有不同，可能是因為蝦的規(guī)格不同導(dǎo)致，幼蝦時期需要較高的蛋白含量來供給自身營養(yǎng)需求，但飼料蛋白水平的升高會提升蝦的生長性能這點結(jié)論是一致的。

2.4.2 飼料蛋白水平對澳洲淡水龍蝦肉質(zhì)的影響

滴水損失率、蒸煮損失率及總氨基酸含量是衡量可食動物肉質(zhì)是否鮮嫩、風(fēng)味好壞的重要指標(biāo)，出肉率可用來衡量其經(jīng)濟價值。凌俊等[10]認(rèn)為飼料的蛋白水平對克氏原螯蝦的出肉率沒有顯著性影響，倪靜靜等[11]比較了不同的飼料對克氏原螯蝦肉質(zhì)的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)不同的飼料對其出肉率和滴水損失率有顯著影響，但對蒸煮損失率沒有顯著影響。本試驗結(jié)果表明，飼料蛋白含量為34.64%時澳洲淡水龍蝦的蒸煮損失率、滴水損失率和肌肉水分顯著降低，出肉率最高，這與吳東等[12]研究結(jié)果相似。

2.4.3 飼料蛋白水平對澳洲淡水龍蝦免疫力的影響

本試驗測定了澳洲淡水龍蝦SOD、CAT、MDA、T-AOC、GOT、GPT、ACP、GSH-PX、GSH-ST 九個免疫相關(guān)指標(biāo)，結(jié)果表明飼料蛋白水平在34.64%時各組織及血漿中SOD、CAT、T-AOC、GSH-PX、GSH-ST活性顯著升高，而MDA含量及GOT、GPT、ACP活性有所降低。范陳偉等[13]對脊尾白蝦的研究結(jié)果表明，在水泥池養(yǎng)殖條件下飼喂34%蛋白水平飼料的白蝦GOT活力最低而SOD的活力顯著升高，范斌[14]研究發(fā)現(xiàn)日本沼蝦的SOD、CAT活性隨所投喂的飼料蛋白含量的升高而上升，最適蛋白水平為48%。這與本研究結(jié)果基本相同，但目前針對飼料蛋白水平對蝦類免疫力影響的研究較少，其更多作用機理仍需進一步研究。

3 結(jié)論

綜合澳洲淡水龍蝦生長、肉質(zhì)及免疫相關(guān)指標(biāo)，水泥池養(yǎng)殖澳洲淡水龍蝦（養(yǎng)殖密度為17.5尾/m2）時，飼料中最適宜的蛋白水平為34.64%。