鳳丹牡丹鮮花原液清除DPPH自由基功效研究

毛文岳，孫春燕，紀(jì)海鵬，鄭立波，劉繼國

（1.天寶牡丹生物科技有限公司，山東菏澤 274000；2.北京日化協(xié)會化妝品功效評價專業(yè)技術(shù)會，北京 100048；3.菏澤市牡丹產(chǎn)業(yè)發(fā)展中心，山東菏澤 274000）

2013年，鳳丹牡丹（Paeonia ostii T.Hong et J.X.Zhang）花及種子油均被國家批準(zhǔn)為新食品原料，在相關(guān)文件中又稱油用牡丹；牡丹花水也被列入我國《已使用化妝品原料名稱目錄》[1]。目前，對牡丹花的研究主要集中在栽培育種、資源調(diào)查、品種分類及花期調(diào)控等方面，牡丹花的活性成分分析與提取及產(chǎn)品開發(fā)等方面的探索還較少，尚未進(jìn)行規(guī)?；木C合開發(fā)利用[2]。研究表明，牡丹花含有豐富的類黃酮、精油及酚類物質(zhì)等，具有較強的清除自由基的能力，可用于高端化妝品的生產(chǎn)原料，具有美容護(hù)膚功效[3-4]。陳佳齡等[5]采用水提法得到的牡丹花水提液，可有效清除羥自由基，對酪氨酸酶單酚酶和二酚酶活性均有良好的抑制作用；牡丹花水提液質(zhì)量濃度為1.00 g/L時，自由基清除率達(dá)91.67%。郭香鳳等人[6]的研究表明，牡丹花水提液具有顯著清除氧自由基的活性。本研究測定了不同工藝制備的牡丹鮮花原液清除DPPH自由基的能力，并與玫瑰鮮花純露進(jìn)行了比較，以期為進(jìn)一步高值化開發(fā)牡丹花提供參考。

1 材料與方法

1.1 樣品材料

鳳丹牡丹鮮花，天寶牡丹生物科技有限公司；大馬士革玫瑰鮮花純露，法國Florihana·馥家，基依國際化妝品公司。

1.2 儀器與試劑

ST360型酶標(biāo)儀，上?？迫A生物工程股份有限公司；FA1004型電子天平，寧波華豐電子儀器廠；ZY-60HM9微波儀，廣州志雅工業(yè)用微波設(shè)備有限公司；LYZ-20H1螺旋榨機，山東曲阜圣銘機械有限公司。

1,1-二苯-2-苦基肼（DPPH），純度97%，武漢卡諾斯科技有限公司；無水乙醇，分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；維生素C，分析純，天津大茂化學(xué)試劑廠；去離子水，天寶牡丹生物科技有限公司自制。

1.3 試驗方法

1.3.1 牡丹鮮花原液制備

（1）蒸餾法：蒸餾法制備的牡丹鮮花原液Ⅰ；（2）微波聯(lián)合壓榨過濾法：對牡丹鮮花花瓣進(jìn)行微波（頻率 2 445～2 455 MHz，75～80 ℃）滅酶 5 min，處理后用螺旋榨機壓榨[2-5]，過濾，所得濾液為牡丹鮮花原液Ⅱ[6]。

1.3.2 溶液配制

（1）DPPH乙醇溶液的配置：準(zhǔn)確稱取DPPH 20 mg，加入無水乙醇溶解并定容于250 mL容量瓶中，獲得濃度為2.0×10-4mol/L的DPPH乙醇溶液；0～4 ℃下避光保存，現(xiàn)配現(xiàn)用，4 h內(nèi)有效。

（2）測試液配制：將玫瑰鮮花純露原液、牡丹鮮花原液Ⅰ均用去離子水稀釋，得到5%、10%、15%、20%、30%、50%、75%、100%的測試液；將牡丹鮮花原液Ⅱ用去離子水稀釋，得到0.5%、1.0%、3.0%、5.0%、7.0%、100%的測試液。

1.3.3 DPPH自由基清除率計算

準(zhǔn)確量取1 mL待測液、1 mL無水乙醇分別與1 mL DPPH乙醇溶液混勻，反應(yīng)30 min后，在517 nm處測吸光度值（分別記為A1、A2）；量取1 mL待測液與1 mL無水乙醇混勻，反應(yīng)30 min后，在517 nm處測吸光度值（記為A3）。根據(jù)公式（1）計算待測液的DPPH清除率。

用分析天平準(zhǔn)確稱取10 mgVc，加入去離子水稀釋定容至1 L，得到濃度為10 mg/L的測試液，記為陽性對照組；用去離子水作為陰性對照，記為陰性對照組。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同濃度樣品對自由基清除率的影響

如圖1所示，陽性對照組（0.1%的維生素C）對DPPH自由基的清除率為91.44%；隨著玫瑰鮮花純露濃度的增大，DPPH自由基的清除率呈上升趨勢，原液（濃度100%）對DPPH自由基的清除率為46.33%；測試樣品玫瑰鮮花純露在生產(chǎn)實踐中常用濃度為5%～10%，該條件下的DPPH自由基清除率為5%～18%。

圖1 不同濃度樣品對自由基清除率的影響

測試樣品牡丹鮮花原液Ⅰ和玫瑰鮮花純露清除率曲線交替上升，對DPPH自由基的清除能力基本處于同一水平；測試樣品牡丹鮮花原液Ⅱ的清除率曲線基本呈線性增加，曲線斜率顯著大于另外兩個樣品，說明壓榨過濾法制備的牡丹鮮花原液對DPPH自由基的清除能力明顯高于測試樣品玫瑰鮮花純露和蒸餾法制備的牡丹鮮花原液Ⅰ。牡丹鮮花原液Ⅱ在生產(chǎn)實踐常用濃度1.0%～7.0%條件下，對DPPH自由基清除率為24.87%～89.50%。

3 結(jié)論

牡丹鮮花原液對DPPH自由基具有很好的清除作用，且牡丹鮮花原液質(zhì)量濃度越大，對DPPH自由基的清除作用越好；微波聯(lián)合壓榨過濾法制備的牡丹鮮花原液清除DPPH自由基的能力顯著優(yōu)于蒸餾法和對照組玫瑰鮮花純露。在工業(yè)化常用濃度1.0%～7.0%條件下，壓榨過濾法制備的牡丹鮮花原液對DPPH自由基清除率達(dá)到24.87%～89.50%。