凝膠珠固定化細(xì)胞發(fā)酵研究進(jìn)展

周康熙，吳 錚，馮哲瀚，蔡偉鑫，陳 磊，林佳豪，王璐穎，鐘毓瑩，倪 莉*

（1.福州大學(xué)石油化工學(xué)院，福建福州 350108；2.福州大學(xué)食品科學(xué)技術(shù)研究所福建省食品生物技術(shù)創(chuàng)新工程技術(shù)研究中心，福建福州 350108）

根據(jù)培養(yǎng)基的形態(tài)可將細(xì)胞發(fā)酵方式分為固態(tài)發(fā)酵和液態(tài)發(fā)酵[1]。它們各有優(yōu)缺點(diǎn)，固態(tài)發(fā)酵方式菌體及其代謝產(chǎn)物密度高，但勞動強(qiáng)度大，且發(fā)酵不均勻；液態(tài)發(fā)酵方式可控性強(qiáng)，但產(chǎn)量低、菌種回收困難[2]。固定化發(fā)酵結(jié)合了固態(tài)發(fā)酵的菌體密度高、液態(tài)發(fā)酵的可控性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)，用物理或化學(xué)的方法將細(xì)胞固載于一定的結(jié)構(gòu)域內(nèi)，將整個(gè)固定化體系放置于液體環(huán)境中進(jìn)行發(fā)酵，并實(shí)現(xiàn)細(xì)胞的回收再利用[3]。根據(jù)細(xì)胞表面特性及固定化原理的不同，常用的固定化方法有吸附法、包埋法、共價(jià)法、交聯(lián)法等[4]。凝膠珠固定化技術(shù)在部分學(xué)者論文中表述為“微膠囊固定化技術(shù)”，屬于包埋法中的一種，因其生物相容性強(qiáng)、囊膜孔隙可控、制作成本低等優(yōu)點(diǎn)而備受關(guān)注[5]，但該技術(shù)至今尚未得到大規(guī)模的推廣應(yīng)用，說明技術(shù)本身有很大的改進(jìn)空間。本文概述了凝膠珠固定化技術(shù)，并分析其與微膠囊技術(shù)的區(qū)別，論述了凝膠珠的制備原理和方法，在前人研究基礎(chǔ)上列舉了當(dāng)前的應(yīng)用研究概況，同時(shí)提出今后的發(fā)展方向，旨在為更好地利用凝膠珠固定化技術(shù)提供借鑒。

1 凝膠珠固定化技術(shù)

1.1 凝膠珠固定化細(xì)胞技術(shù)簡介

凝膠珠是用多糖、蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)將酶或細(xì)胞等生物催化載體包裹起來的毫米級或微米級顆粒物[6-7]，其模型如下：

生物催化載體作為壁芯、凝膠膜作為壁材。通過改變凝膠膜的種類、濃度、反應(yīng)時(shí)間、聚合類型等參數(shù)，可實(shí)現(xiàn)囊內(nèi)外各種分子不同程度的截留。凝膠成膜時(shí)往往需要螯合金屬離子，因此金屬離子的種類、價(jià)態(tài)與濃度也會對凝膠囊膜的孔隙大小和截留程度造成影響[8]。對于凝膠珠固定化細(xì)胞發(fā)酵體系，囊膜可使氧氣、小分子營養(yǎng)物質(zhì)及代謝產(chǎn)物在濃度梯度的作用下進(jìn)出凝膠球，而多糖、蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)被阻隔于囊內(nèi)或囊外，從而起到催化、發(fā)酵或免疫隔離的目的[9]。同時(shí)，囊膜可以一定程度上保護(hù)酶或細(xì)胞等生物催化載體免受機(jī)械攪拌對其造成的損傷以及外界有毒物質(zhì)或微生物的侵害，從而給生物催化載體提供一個(gè)相對溫和的環(huán)境[10]。經(jīng)過幾十年的發(fā)展，該技術(shù)已在食品與發(fā)酵工業(yè)、污水處理及能源生產(chǎn)等多個(gè)領(lǐng)域中應(yīng)用。

1.2 凝膠珠與微膠囊的聯(lián)系與區(qū)別

凝膠珠與微膠囊固定化技術(shù)都是包埋法固定化技術(shù)中的一個(gè)分支。本文從包埋的原料、方法、大小、用途等方面對兩者的異同點(diǎn)進(jìn)行分析（見表1）。

凝膠珠和微膠囊在制備材料、方法及應(yīng)用領(lǐng)域方面有相似之處，但包埋目的和包埋體的大小存在顯著區(qū)別。包埋體的大小取決于包埋目的，如凝膠珠體積較大，便于回收，同時(shí)內(nèi)部能有足夠的空間使被固定化的催化載體與底物之間進(jìn)行反應(yīng)，可實(shí)現(xiàn)物質(zhì)轉(zhuǎn)化[11-12]；微膠囊體積較小，囊膜與被包埋物質(zhì)緊密接觸，甚至成鍵，減少外界環(huán)境對被包埋物質(zhì)的影響，在光、熱、pH等穩(wěn)定性上有所改善，便于物質(zhì)的儲藏或運(yùn)輸[13]；此外，有些囊膜生物相容性甚好，可制備為載藥微膠囊，在特定條件下可實(shí)現(xiàn)藥物緩釋，且小體積的微膠囊能夠增加比表面積，進(jìn)而提高藥物的吸收代謝效率[14]。此外，凝膠珠和微膠囊在呈現(xiàn)形式上也有區(qū)別，這些區(qū)別還是與包埋目的有關(guān)。例如：用于生物催化或者化學(xué)轉(zhuǎn)化的凝膠珠體系中可能會在多孔結(jié)構(gòu)中或囊膜內(nèi)部充盈液體；用于保藏的微膠囊則偏向于干性體系，尤其對于經(jīng)過噴霧干燥或冷凍干燥所制備的微膠囊，幾乎以粉末形式呈現(xiàn)?，F(xiàn)今對于“凝膠珠”還存在其他形式的名詞描述，如“微膠囊”、凝膠微球[15-17]，盡管它們在應(yīng)用形式上存在差別，但凝膠珠與微膠囊相似之處頗多，難以用某種標(biāo)準(zhǔn)來準(zhǔn)確區(qū)分這兩個(gè)概念。本文主要論述用于固定化發(fā)酵的載體，根據(jù)其用途和特征，用凝膠珠來稱呼更加合適。

表1 凝膠珠與微膠囊固定化技術(shù)比較Table 1 Comparison of immobilization technology between gel beads and microcapsules

2 凝膠珠的制備原理

常見的凝膠珠制備方法有兩種，即聚電解質(zhì)成膜和自凝聚成膜。凝膠珠形成過程參與反應(yīng)的陰離子基團(tuán)

對于聚電解質(zhì)成膜，多聚物通過聚電解質(zhì)陰陽離子基團(tuán)吸引聚集成膜，靜電引力是其制備的關(guān)鍵，而對于囊膜的構(gòu)象及性質(zhì)，氫鍵、范德華力、靜電斥力、親水及疏水作用力等因素會帶來顯著的影響。陳國等[18]認(rèn)為形成凝膠珠的聚合物種類繁多，通過合成或衍生化得到的制備原料更是不在少數(shù)，而聚電解質(zhì)實(shí)際上參與成膜的基團(tuán)卻相對有限，這些有限的基團(tuán)在不同聚合物中的種類、數(shù)量、排布、空間位置的不同，造成聚合而成的囊膜在空間結(jié)構(gòu)和囊內(nèi)外表面特性上的差異。這些差異宏觀上表現(xiàn)為生物相容性、體積大小、物質(zhì)流動與截留性、凝膠珠彈性與脆性等方面的不同。參與聚合反應(yīng)的物質(zhì)除了聚電解質(zhì)外，金屬離子也是一類重要的因素。當(dāng)金屬離子存在時(shí)，這些離子表面的電荷可與陰離子基團(tuán)相互吸引，在空間結(jié)構(gòu)允許的條件下，金屬離子充當(dāng)“鹽橋”的作用，使兩個(gè)或多個(gè)陰離子基團(tuán)搭在一起，從而在沒有聚陽離子存在的情況下亦能成膜，其中最典型的當(dāng)屬海藻酸鈉與鈣離子的結(jié)合模型（圖1）。

圖1 海藻酸鈉與鈣離子結(jié)合示意圖Fig.1 Schematic diagram of sodium alginate binding with calcium ion

對于自凝聚成膜，即多聚物自身具有形成凝膠的能力，分子鏈上的羥基、羧基等基團(tuán)能與自身或水分子之間形成氫鍵，在多聚物分子充分伸展并相互纏繞的情況下，形成網(wǎng)狀多孔凝膠，其凝膠的形成過程靜電引力不占主導(dǎo)地位。在凝膠的制備過程中，出于應(yīng)用需求，還可以復(fù)配其他物質(zhì)進(jìn)行改性，但改性后的凝膠成膜機(jī)理依然以非聚電解質(zhì)成膜為主[19-20]。常見的采用自凝聚成膜的凝膠珠為瓊脂糖凝膠珠。瓊脂糖是以D-半乳糖和3,6-脫水-L-半乳糖為結(jié)構(gòu)單元組成的多聚物[21-22]，其結(jié)構(gòu)單元內(nèi)存在4個(gè)羥基（圖2a），在高溫條件下瓊脂糖分子得以舒展和纏結(jié)，在冷卻過程中，糖鏈上3個(gè)向外的羥基可通過氫鍵與相鄰的螺旋或復(fù)配物或水分子結(jié)合，剩余的一個(gè)羥基在螺旋內(nèi)部與水結(jié)合，最終形成三維網(wǎng)狀凝膠結(jié)構(gòu)[23]（圖2b）。

圖2 瓊脂糖凝膠的結(jié)構(gòu)單元及微觀形態(tài)Fig.2 Structural units and micromorphology of agarose gel

3 凝膠珠的制備方法

3.1 基于聚電解質(zhì)成膜的凝膠珠

以陰陽離子聚合反應(yīng)為基礎(chǔ)的凝膠珠的制備方法較為復(fù)雜。根據(jù)反應(yīng)體系和反應(yīng)過程的不同，將凝膠珠的制備方法分為3種：兩相界面聚合法、液滴成膜法和組裝-去核法[18]。

兩相界面聚合法指的是2種聚電解質(zhì)分別分散于兩種互不相容的溶液中，通過機(jī)械攪拌使兩種物質(zhì)相互接觸進(jìn)而在界面成膜。如TRONGSATITKUL T等[24]在油-水-油的雙乳液體系中，通過聚異丙酰胺（poly（n-isopropyl acry lamide），PNIPAM）與聚乙二醇單甲醚單甲基丙烯酸酯（poly（ethyleneglycol）dimethacrylate，PEGMA）的聚合包埋了酵母菌，酵母菌的存活率比單使用PNIPAM由30%提高至60%；GREEN K D等[25]以1,6-己二胺和聚烯丙胺為原料，經(jīng)十二烷基二氯化物交聯(lián)，通過界面聚合法包埋了面包酵母，其催化活性要高于游離酵母細(xì)胞、海藻酸鈣和κ-卡拉膠凝膠珠。

液滴成膜法即溶液A滴入溶液B中，兩種溶液的溶劑相容，而溶質(zhì)在滴入的瞬間迅速反應(yīng)成膜。在海藻酸鈣凝膠珠的制備中用的就是該方法[26]。此法奇妙之處在于由A滴入B與由B滴入A所制備的凝膠珠性質(zhì)不同。仍以海藻酸鈣凝膠珠為例，海藻酸鈉溶液滴入鈣離子溶液中，兩種溶液的界面處形成海藻酸鈣膜，隨著固定化時(shí)間的延長，鈣離子逐漸滲透進(jìn)入囊中心，最后將形成實(shí)心的凝膠珠。如OYEAGU U等[27]將海藻酸鈉溶液與淀粉或糖溶液混合，再滴入CaCl2溶液中，固定化過程中淀粉或糖會從凝膠珠中滲出，從而避免形成較為致密的實(shí)心海藻酸鈣凝膠珠，可增加固定化細(xì)胞密度。但如果是鈣離子溶液滴入海藻酸鈉溶液中，鈣離子的滲透會在液滴外圍形成囊膜，隨著固定化時(shí)間的延長，囊膜變厚、體積變大、囊內(nèi)卻是充滿水溶液的空心凝膠珠[28]。因此凝膠珠的體積及內(nèi)部容積與固定化方式及固定化時(shí)間關(guān)系密切。

組裝-去核法是先用一種高分子物質(zhì)包埋細(xì)胞制備成預(yù)膠珠，再將預(yù)膠珠投入另一種含有高分子的溶液中，兩種高分子物質(zhì)在預(yù)膠珠的表面反應(yīng)成膜，此時(shí)再用第一種溶液反應(yīng)掉膜表面的基團(tuán)，組裝成更大的凝膠珠，此時(shí)凝膠珠的結(jié)構(gòu)為A-B-A；由于此時(shí)凝膠實(shí)心程度大，囊膜內(nèi)部的空間體積狹小，為保證細(xì)胞的活動空間，用溶解液將內(nèi)部的預(yù)膠珠溶解，形成中空的微膠囊，整個(gè)制作過程包含了組裝和去核兩個(gè)步驟。如王家榮等[29]利用海藻酸鈉與殼聚糖制備成ACA凝膠珠：海藻酸鈉與Ca2+反應(yīng)形成海藻酸鈣預(yù)膠珠，該預(yù)膠珠表面的-COO-與所投入的新溶液中的殼聚糖表面的-NH4+發(fā)生靜電反應(yīng)成水不溶性高聚物，再經(jīng)過海藻酸鈉溶液的處理，組裝成海藻酸鈉-殼聚糖-海藻酸鈉凝膠珠，最后利用檸檬酸鈉溶液螯合掉內(nèi)核中的Ca2+，使內(nèi)部的海藻酸鈣解聚成海藻酸鈉并溶解于水中，變成中空的凝膠珠。

對于包埋細(xì)胞而言，要求包埋條件較為溫和，兩相界面聚合法所用的溶劑可能對細(xì)胞有一定的毒性，因此細(xì)胞的存活率較低；對于液滴成膜法而言，制備過程中容易形成實(shí)心凝膠珠，或者不同凝膠珠之間容易因交聯(lián)劑的滲透而粘在一起，制備過程的精準(zhǔn)控制難度較大；組裝去核法可能是相對而言較佳的方法，它在構(gòu)建珠狀凝膠囊膜的同時(shí)又能騰出細(xì)胞的活動空間，保證細(xì)胞活動的正常進(jìn)行。

3.2 基于自凝聚成膜的凝膠珠

對于自凝聚成膜而形成的凝膠珠，其制備方法較為簡單，通常由制液和造粒兩個(gè)步驟組成。如NóBILE M L等[30]用無菌熔化的瓊脂糖溶液稍微冷卻后與柯氏檸檬酸桿菌菌懸液混合，再滴入低溫的葵花籽油中造粒，由于葵花籽油不與瓊脂糖發(fā)生反應(yīng)，但低溫、無水的性能卻能促使其糖鏈內(nèi)基團(tuán)之間形成氫鍵，進(jìn)而自凝聚成凝膠珠并將菌懸液固定化包埋，之后再將葵花籽油過濾去除，并用正己烷和NaCl溶液清洗即可。對于有特殊需求的凝膠珠，有時(shí)候還需要進(jìn)行改性。如張敏等[20]在瓊脂糖凝膠珠的制備基礎(chǔ)上接枝聚乙烯亞胺，即將瓊脂糖凝膠珠分散在聚乙烯亞胺溶液中使其充分接觸，再加入NaOH溶液使聚乙烯亞胺偶聯(lián)到凝膠珠上，可用于甘油脫氫酶的固定化。

盡管自凝聚成膜的固定化方法也是當(dāng)下的研究熱點(diǎn)，但制液過程中的“高溫”難以適用于對溫度敏感的細(xì)胞，多數(shù)應(yīng)用常見于酶的固定化。故以下對凝膠珠固定化技術(shù)的應(yīng)用僅介紹對溫度要求不高的基于聚電解質(zhì)成膜的凝膠珠。

4 凝膠珠固定化技術(shù)的應(yīng)用

4.1 固定化動物細(xì)胞

由于動物細(xì)胞無細(xì)胞壁，細(xì)胞較易受損，凝膠囊膜可充當(dāng)細(xì)胞壁的作用包裹在細(xì)胞膜外側(cè)，保護(hù)細(xì)胞；此外，動物細(xì)胞在培養(yǎng)過程中容易遭受微生物的污染，而凝膠囊膜的阻隔作用可避免此問題[31]。在凝膠珠固定化動物細(xì)胞領(lǐng)域，固定化雜交瘤細(xì)胞、產(chǎn)單克隆抗體等方面的研究較多。GOTOH T等[32]以海藻酸鈉、牛血清白蛋白和碳酸氫鈉固定化培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞，培養(yǎng)后細(xì)胞濃度可達(dá)到5.7×107個(gè)/mL；IVANA P L等[33]利用海藻酸鈉-聚賴氨酸固定化雜交瘤細(xì)胞，并建立了數(shù)學(xué)模型，該模型能夠預(yù)測各種微環(huán)境限制效應(yīng)對細(xì)胞生長動力學(xué)的影響；JAIN E等[34]分別采用聚丙烯酰胺-殼聚糖（polyacrylamide-chitosan，PAAC）、聚（N-異丙基丙烯酰胺）-殼聚糖、聚丙烯腈（polyacrylonitrile，PAN）和（聚（N-異丙基丙烯酰胺）固定化雜交瘤細(xì)胞，PAAC在單克隆抗體的產(chǎn)生和細(xì)胞生長方面要優(yōu)于其他體系，此外，將該固定化體系放置于整體式生物反應(yīng)器中，其單克隆抗體的最高濃度（115 μg/mL）比細(xì)胞培養(yǎng)瓶要高4倍。

4.2 固定化植物細(xì)胞

植物細(xì)胞在懸浮培養(yǎng)過程中由于細(xì)胞的增殖和堆積，易形成細(xì)胞團(tuán)，當(dāng)細(xì)胞團(tuán)較大時(shí)，會限制團(tuán)塊內(nèi)部細(xì)胞的活力，而凝膠珠固定化植物細(xì)胞可克服上述缺陷。CHAUHAN P等[35]用海藻酸鈣凝膠珠固定化植物細(xì)胞，通過海藻酸鈣濃度的優(yōu)化，使細(xì)胞數(shù)量增加。用凝膠珠固定化植物細(xì)胞還可以保護(hù)細(xì)胞免受剪切力的影響，同時(shí)能夠轉(zhuǎn)移細(xì)胞，進(jìn)行連續(xù)培養(yǎng)。NOHA Y S等[36]利用海藻酸鈣凝膠珠固定化植物細(xì)胞連續(xù)培養(yǎng)表達(dá)人粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子（human granulocyte-macrophage colony stimulating factor，hGM-CSF），但其固定化效果不如聚氨酯泡沫，說明凝膠珠體系需要改善；KWON S等[37]利用海藻酸鈣凝膠珠固定化煙草細(xì)胞，其糖苷類細(xì)胞產(chǎn)物都有相應(yīng)的提高：4-異丙基托泊酮2-O-β-D-葡萄糖苷（11%）、4-異丙基托泊酮2-O-β-D-龍膽苦苷（6%）、6-異丙基托泊龍酮2-O-β-D-葡萄糖苷（20%）以及6-異丙基丙烷2-O-β-D-龍膽苷（10%）。

4.3 固定化微生物

固定化技術(shù)在微生物方面的應(yīng)用要廣于動物和植物細(xì)胞。本文基于凝膠珠固定化微生物發(fā)酵的研究，列舉了凝膠微球的固定化材料、固定化微生物種類、固定化發(fā)酵效果及其對應(yīng)的應(yīng)用領(lǐng)域（見表2）。

表2 凝膠珠固定化微生物應(yīng)用Table 2 Application of gel beads in immobilization of microorganisms

5 凝膠珠固定化技術(shù)發(fā)展方向

多數(shù)情況下凝膠珠固定化細(xì)胞的目的在于重復(fù)使用固定化體系以持續(xù)地獲得細(xì)胞產(chǎn)物。盡管相關(guān)研究較多，但仍未成為發(fā)酵方式的主流，液態(tài)游離發(fā)酵方式仍是眾多學(xué)者的首選，說明凝膠珠固定化發(fā)酵存在技術(shù)瓶頸。這些技術(shù)瓶頸可能在于囊膜阻礙了物質(zhì)傳遞效率、囊內(nèi)細(xì)胞生長空間受限、提取囊內(nèi)目標(biāo)物質(zhì)較為困難三個(gè)方面。因此，突破這三個(gè)技術(shù)瓶頸將會是該固定化技術(shù)的發(fā)展方向。

5.1 改善物質(zhì)傳遞效率

對細(xì)胞包裹的囊膜具有兩面性：一方面保護(hù)了細(xì)胞，免受污染及損傷；另一方面限制了囊內(nèi)外部分物質(zhì)的流通。物質(zhì)傳遞受阻，囊外的大分子物質(zhì)難以運(yùn)送至囊內(nèi)，囊內(nèi)的部分代謝產(chǎn)物難以及時(shí)排到囊外，會造成各種負(fù)面的影響：囊內(nèi)的胞外酶系難以對囊外的營養(yǎng)物質(zhì)進(jìn)行降解和利用、囊內(nèi)的代謝產(chǎn)物濃度升高反抑制細(xì)胞代謝、囊內(nèi)的細(xì)胞因營養(yǎng)供給不足而死亡、自溶的細(xì)胞有害物質(zhì)難以及時(shí)排到囊外可能引起其他正常細(xì)胞的凋亡。這些負(fù)面影響可直觀地表現(xiàn)為代謝產(chǎn)物含量低下、囊內(nèi)活菌數(shù)減少。如SHARMA A等[47]利用海藻酸鈣、殼聚糖復(fù)合海藻酸鈉兩種固定化方式發(fā)酵芽孢桿菌，發(fā)酵前三批的α-淀粉酶含量均低于液態(tài)游離發(fā)酵；DIMITROVSKI D等[48]實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，固定化發(fā)酵乳酸菌的活菌數(shù)為3.2×106CFU/mL，遠(yuǎn)低于游離發(fā)酵時(shí)的2.5×109CFU/mL。為克服上述問題，凝膠珠的囊膜性能需要改善，可施行的調(diào)控方法有：凝膠的改性、囊膜制備方法的改進(jìn)、發(fā)酵體系中某些調(diào)控因子的添加等。如王建龍等[49]在海藻酸鈉溶液中混入氧化石墨烯來進(jìn)行改性，其制備的凝膠珠對重金屬和放射性廢水具有良好的生物吸附性能；史雁飛等[50]通過海藻酸鈉固定化條件的改進(jìn)，使包埋有異常威克漢姆酵母Y5的凝膠珠對白酒的釀造提高了酯化能力；GEDAM P S等[51]在發(fā)酵體系中添加了非離子表面活性劑，有助于提高固定化生孢梭菌產(chǎn)丁醇的量。

5.2 改良固定化方式

固定化發(fā)酵相當(dāng)于將細(xì)胞集中于給定的有限空間內(nèi)，盡管上文提到的組裝-去核法可液化囊心而增加囊內(nèi)細(xì)胞的生長活動空間，但當(dāng)細(xì)胞發(fā)酵至一定程度時(shí)，微升級的囊內(nèi)體積限制了細(xì)胞的進(jìn)一步發(fā)展。為拓寬細(xì)胞生長的空間，部分學(xué)者將細(xì)胞固定于物理載體中，如粘土卵石、多孔泡沫材料、聚氨酯泡沫等[52-54]，或?qū)⑵浒牍潭ㄓ谀z平面中[55]。這樣的固定化方式能夠在固定化體系中保留母菌，這些菌的子代既可以留在固定化體系中，也可以散播到環(huán)境中，從而減輕了在固定化體系空間有限的情況下細(xì)胞競爭行為所帶來的生長代謝抑制。

5.3 探索提取和檢測囊內(nèi)物質(zhì)的方法

通過培養(yǎng)細(xì)胞所獲得的目標(biāo)產(chǎn)物并非完全是胞外產(chǎn)物。在固定化培養(yǎng)結(jié)束后，要對目標(biāo)物進(jìn)行提取往往需要對囊膜進(jìn)行裂解。常見的海藻酸鈣凝膠珠可通過添加金屬離子螯合劑去除鈣離子而使水不溶性的海藻酸鈣轉(zhuǎn)為水溶性的海藻酸鈉；瓊脂糖凝膠珠可通過破壞氫鍵來使瓊脂糖解聚。其他類型的凝膠球可基于其制備原理來進(jìn)行裂解，從而提取和檢測囊內(nèi)物質(zhì)。在聚合物解離時(shí)，高吸水性的結(jié)構(gòu)單元可能會使樣品的粘度變大，在進(jìn)行物質(zhì)分離或測定時(shí)難度增加，因此聚合物的去除方式尤為關(guān)鍵。在提取和檢測囊內(nèi)物質(zhì)方面，倪莉等[56-57]使用檸檬酸鈉溶液在加熱條件下使海藻酸鈉微膠囊溶解，利用定磷法測定了囊內(nèi)菌量；同時(shí)還發(fā)現(xiàn)通過金屬離子螯合劑、超聲、加熱、調(diào)pH和乙醇萃取后，可提取和檢測混在海藻酸鈉凝膠中的紅曲色素。

6 結(jié)語

由聚電解質(zhì)聚集成膜的凝膠珠為細(xì)胞的固定化培養(yǎng)提供了一種廉價(jià)而便捷的載體，這種固定化技術(shù)可實(shí)現(xiàn)連續(xù)發(fā)酵，并在食品、生物醫(yī)藥、污水處理等多個(gè)領(lǐng)域都有其應(yīng)用之處?，F(xiàn)今凝膠珠固定化技術(shù)多數(shù)停留于實(shí)驗(yàn)室研發(fā)階段，技術(shù)本身存在著一些瓶頸，需要改善物質(zhì)傳遞效率、改良固定化方式、探索提取和檢測囊內(nèi)物質(zhì)檢測方法等。隨著現(xiàn)代科技的飛速發(fā)展，相信凝膠珠固定化技術(shù)會越來越完善，并逐步實(shí)現(xiàn)規(guī)?；瘧?yīng)用。