脂聯(lián)素基因多態(tài)性與浙江漢族人群原發(fā)性高血壓的相關(guān)性

范宏彥 鄭文文 翟昌林

高血壓是血管性疾病的主要危險(xiǎn)因素，也是全球健康負(fù)擔(dān)的主要來(lái)源[1]。雖然原發(fā)性高血壓（essential hypertension，EH）的病因?qū)W尚未完全闡明，但基因與環(huán)境因素的相互作用在EH 的病理生理過(guò)程中發(fā)揮了重要作用[2]。脂聯(lián)素是一種脂肪細(xì)胞因子，既往研究發(fā)現(xiàn)在心血管疾病、EH、肥胖和2 型糖尿病等疾病中均有血漿脂聯(lián)素水平的降低[3-5]，提示脂聯(lián)素可能在高血壓的發(fā)病機(jī)制中起著重要作用。國(guó)內(nèi)外關(guān)于脂聯(lián)素基因單核苷酸多態(tài)性（single nucleotide polymorphisms，SNP）與EH 關(guān)聯(lián)研究的結(jié)果并不一致。本研究旨在探討浙江地區(qū)漢族人群脂聯(lián)素基因rs1501299 和rs2241766 位點(diǎn)多態(tài)性與EH之間的相關(guān)性，為EH 機(jī)制的研究提供一定依據(jù)。

1 對(duì)象和方法

1.1 對(duì)象 選擇2018 年1 月至2019 年6 月嘉興市第一醫(yī)院收治的EH 患者236 例為觀察組，其中男118 例，女118 例，均為漢族；另?yè)裢谠诒驹哼M(jìn)行健康體檢的265 例為對(duì)照組，其中男134 例，女131 例。本研究根據(jù)《中國(guó)高血壓防治指南（2018 年修訂版）》標(biāo)準(zhǔn)，高血壓定義為收縮壓≥140 mmHg和（或）舒張壓≥90 mmHg[6]。排除標(biāo)準(zhǔn)：繼發(fā)性高血壓、糖尿病、癌癥、冠心病、腦梗死等嚴(yán)重心腦血管疾病及其他引起高血壓的疾病。本研究經(jīng)過(guò)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（批準(zhǔn)文號(hào)：LS2018-071）及所有受試者的知情同意。

1.2 方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)檢測(cè) 收集患者性別、年齡，身高、體重，并計(jì)算體重指數(shù)（body mass index，BMI）。抽取空腹外周靜脈血5 mL，測(cè)定甘油三酯（triglyceride，TG）、總膽固醇（total cholesterol，TC）、高密度脂蛋白膽固醇（high density lipoprotein cholesterol，HDL-C）及低密度脂蛋白膽固醇（low density lipoprotein cholesterol，LDL-C）。

1.2.2 基因組DNA 提取及分型 采用DNeasy 血液/組織基因組DNA 提取試劑盒（德國(guó)Qiagen 公司）提取外周血全基因組DNA。采用競(jìng)爭(zhēng)性等位基因 特 異 性PCR （kompetitive allele specific PCR，KASP）檢測(cè)所有受試者的脂聯(lián)素基因rs1501299 和rs2241766 位點(diǎn)的基因型，引物序列見(jiàn)表1（引物由北京一道生物科技有限公司提供）。具體步驟：首先檢測(cè)所有DNA 樣本，將質(zhì)檢合格的DNA 進(jìn)行稀釋，最終濃度為5 ng/μL。取2 μLDNA 樣本，在55 ℃45 min 烘干，再配置混合物（mix），3 μL 體系[包括2X KASP master mix（北京梓熙生物科技有限公司）及引物mix]，然后在ABI 7900 儀器上進(jìn)行預(yù)讀，再在ABI 9700 PCR 儀上進(jìn)行PCR 反應(yīng)，94 ℃5 min，94℃20 s，61 ℃1 min，共10 個(gè)循環(huán)；94 ℃20 s，55 ℃1 min，共26 個(gè)循環(huán)；最后72 ℃1 min。完成后，在ABI 7900 儀器上讀出，通過(guò)SDS2.4 進(jìn)行基因分型和判讀。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 20.0 統(tǒng)計(jì)軟件，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以表示，不符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以M（P25，P75）表示，組間比較采用獨(dú)立樣本t 檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以百分率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)?；蛐头植疾捎肏ardy-Weinberg 平衡檢驗(yàn)，采用χ2檢驗(yàn)分析兩組等位基因頻率和基因型頻率，并計(jì)算OR 值和95%CI；采用非條件logistic 回歸分析EH 的危險(xiǎn)因素。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組一般資料比較 見(jiàn)表2。

由表2 可見(jiàn)，觀察組年齡、BMI、TC 水平均高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.01），其余指標(biāo)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P ＞0.05）。

2.2 脂聯(lián)素基因各位點(diǎn)Hardy-Weinberg 平衡檢驗(yàn)本研究選取了脂聯(lián)素基因2 個(gè)SNP 位點(diǎn)（rs1501299、rs2241766），均符合Hardy-Weinberg 平衡（均P ＞0.05），表明樣本具有群體代表性。

2.3 脂聯(lián)素基因各位點(diǎn)基因型和等位基因頻率分布 見(jiàn)表3、4。

由表3、4 可見(jiàn)，脂聯(lián)素基因rs1501299 基因型頻率在觀察組和對(duì)照組間分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.05）；在顯性模型中，觀察組rs1501299 CC+CA 基因型頻率高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.4 脂聯(lián)素基因rs1501299 基因型各臨床指標(biāo)比較見(jiàn)表5。

由表5 可見(jiàn)，在顯性模型下，按總研究人群以及不同性別分類，男性BMI 在脂聯(lián)素基因rs1501299的不同基因型中差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，CC+CA 基因型BMI 高于AA 基因型（P＜0.01）。

2.5 EH 危險(xiǎn)因素的logistic 回歸分析 見(jiàn)表6。

由表6 可見(jiàn)，以是否發(fā)生EH 作為因變量，選擇年齡、TC、BMI、rs1501299 基因型作為自變量，logistic回歸分析顯示，年齡、TC、BMI≥25 kg/m2、rs1501299 CC 及CA 基因型是EH 的危險(xiǎn)因素（均P＜0.05）。

表2 兩組一般資料比較

表3 脂聯(lián)素基因各位點(diǎn)基因型和等位基因頻率分布

表4 脂聯(lián)素基因各位點(diǎn)兩種遺傳模型基因頻率分布

表5 脂聯(lián)素基因rs1501299 基因型各臨床指標(biāo)比較

3 討論

EH 是心腦血管疾病的主要危險(xiǎn)因素之一，影響著全球近27%的人口，預(yù)計(jì)到2025 年，患病人數(shù)將增加約60%，總數(shù)達(dá)到15.6 億[7]。在中國(guó)，患有EH的成年人占總?cè)丝诘?7.9%[8]。目前認(rèn)為脂肪細(xì)胞通過(guò)分泌大量生物活性因子參與體內(nèi)多種生物功能調(diào)節(jié)[9]。脂聯(lián)素是一種脂肪細(xì)胞分泌激素，是目前唯一發(fā)現(xiàn)的對(duì)人體有保護(hù)作用的脂肪細(xì)胞因子[10]。有體外研究表明脂聯(lián)素可以刺激一氧化氮的產(chǎn)生并且改善內(nèi)皮功能，同時(shí)還具有調(diào)節(jié)機(jī)體新陳代謝和免疫反應(yīng)的作用[11-14]。循環(huán)中相對(duì)較高的脂聯(lián)素濃度（5～30 μg/mL）與血壓值以及未來(lái)發(fā)生高血壓的風(fēng)險(xiǎn)呈反比[15-17]。值得注意的是，人類脂聯(lián)素的濃度主要受遺傳因素影響，估計(jì)遺傳力為40%～70%[18]。脂聯(lián)素基因由ADIPOQ 編碼，位于染色體3q27 區(qū)域，包含3 個(gè)外顯子，跨度約17 kb，該基因編碼的蛋白含有244 個(gè)氨基酸，包含4 個(gè)結(jié)構(gòu)域：N 端信號(hào)序列、膠原型結(jié)構(gòu)域、可變區(qū)域、C 端球狀結(jié)構(gòu)域[19]。目前，大量研究均有發(fā)現(xiàn)脂聯(lián)素基因存在EH、2 型糖尿病、代謝綜合征的易感位點(diǎn)。

表6 EH 危險(xiǎn)因素的logistic 回歸分析

大多數(shù)已發(fā)表的研究探討了脂聯(lián)素基因rs2241766、rs1501299 多態(tài)性與發(fā)生EH 風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系[20-25]，但結(jié)果是不一致的。Mousavinasab 等[22]關(guān)于芬蘭人群的研究發(fā)現(xiàn)脂聯(lián)素基因rs2241766 和rs1501299 的多態(tài)性與EH 風(fēng)險(xiǎn)明顯相關(guān)。Ronconi等[23]研究也顯示rs2241766 及rs1501299 與意大利人群EH 相關(guān)。但Yan 等[24]在中國(guó)人群中的研究發(fā)現(xiàn)，rs2241766 和rs1501299 與EH 無(wú)明顯相關(guān)性?？登f等[25]關(guān)于大理白族人群的研究則發(fā)現(xiàn)rs2241766與EH 發(fā)生有關(guān)，而rs1501299 與EH 無(wú)關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)中國(guó)浙江漢族人群脂聯(lián)素基因rs1501299 多態(tài)性與EH 的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)明顯相關(guān)，而rs2241766 與EH無(wú)關(guān)，且經(jīng)過(guò)調(diào)整了混雜因素的logistic 回歸分析進(jìn)一步證明rs1501299 CC、CA 基因型是浙江地區(qū)EH的危險(xiǎn)因素。本研究結(jié)果與既往研究存在差異，考慮原因有以下幾點(diǎn)：（1）因不同地區(qū)、不同種族的遺傳背景、生活環(huán)境及生活習(xí)慣有很大差距，將導(dǎo)致結(jié)果的差異性；（2）本研究將性別、年齡、BMI 等影響EH 的危險(xiǎn)因素均納入了回歸分析，而其他一些研究則忽略了混雜因素的影響，因而可能導(dǎo)致結(jié)果的差異性；（3）本研究樣本含量較小，且只選擇了浙江單地區(qū)的研究人群，缺乏更大樣本量的抽樣調(diào)查，從而可能導(dǎo)致結(jié)果的差異性。

眾所周知，超重和肥胖是EH 的一個(gè)獨(dú)立危險(xiǎn)因素。研究發(fā)現(xiàn)BMI 與血壓水平呈正比，BMI 每增加3 kg/m2，4 年內(nèi)EH 的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，女性增加57%，男性增加50%[6]。而脂聯(lián)素基因作為脂肪細(xì)胞因子，參與調(diào)節(jié)機(jī)體胰島素、血糖、脂質(zhì)代謝，具有胰島素增敏、抗炎以及抗動(dòng)脈粥樣硬化的功能，在肥胖、2 型糖尿病、EH 等代謝性疾病中發(fā)揮重要作用[26]。本研究結(jié)果提示TC、BMI≥25 kg/m2是EH 的危險(xiǎn)因素，這與既往研究相符。本研究還發(fā)現(xiàn)在男性研究人群中攜帶脂聯(lián)素基因rs1501299 CC+CA 基因型者具有更高的BMI 水平，這表明脂聯(lián)素基因變異可能與肥胖密切相關(guān)，而肥胖作為EH 的重要危險(xiǎn)因素，進(jìn)一步表明脂聯(lián)素基因可能通過(guò)脂質(zhì)代謝等途徑參與EH 的發(fā)生、發(fā)展。

綜上所述，本研究初步探討了脂聯(lián)素基因與EH 之間的相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)脂聯(lián)素基因rs1501299 與浙江漢族人群EH 的風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)。但本研究樣本量小、為橫斷面研究，且缺乏血清脂聯(lián)素等更具相關(guān)性的生化指標(biāo)，因此尚需更多關(guān)于脂聯(lián)素基因與EH 發(fā)生發(fā)展的機(jī)制研究。