球毛殼菌Cg-1對(duì)水果采后致病菌的抑制效果

李麗麗

摘要：本文對(duì)球毛殼菌Cg-1菌株應(yīng)用于水果采摘后病害的防治進(jìn)行了綜述，包括防治機(jī)理、防治效果、防治的優(yōu)勢(shì)。球毛殼菌Cg-1是一種植物內(nèi)生菌，該菌株能生活在植物體內(nèi)，經(jīng)誘導(dǎo)產(chǎn)生的粗酶液和抗生物質(zhì)粗提液均具能明顯抑制多種植物病菌菌絲的生長(zhǎng)和孢子萌發(fā)，使采后水果延長(zhǎng)保質(zhì)期。試驗(yàn)表明該菌株對(duì)水果采摘后防病抑病優(yōu)于假絲酵母，無(wú)毒、無(wú)污染，對(duì)多種病害具有較好的抑制效果。

關(guān)鍵詞： 內(nèi)生真菌;采后病害;抑制效果

Abstract： the application of Chaetomium globosum Cg-1 strain in the prevention and control of diseases after fruit picking was reviewed， including prevention and control mechanism， prevention and control effect and advantages. Chaetomium globosum Cg-1 is a kind of endophytic bacteria， which can live in plants. The crude enzyme solution and antibiotic crude extract produced by induction can obviously inhibit the growth of hyphae and spore germination of various plant pathogens， and prolong the shelf life of postharvest fruits. Experiments show that the strain is superior to Candida spp. in preventing and suppressing diseases after fruit picking， and it is non-toxic and pollution-free， and has a good inhibitory effect on various diseases.

Key words： endophytic fungi; Postharvest diseases; Inhibition effect

引言

水果采摘后腐爛大多由真菌引起，水果在采收、包裝、貯存和運(yùn)輸過(guò)程中若受到機(jī)械損傷[1]，霉菌很容易通過(guò)傷口侵蝕水果，并在水果上大量生長(zhǎng)，從而造成水果的腐爛。真菌則是水果最主要的致腐病原菌，前人制定出諸如低溫冷藏、氣調(diào)貯藏、減壓貯藏等對(duì)抑制真菌病害行之有效的環(huán)境控制措施[2]?，F(xiàn)今社會(huì)，對(duì)水果新鮮度的要求更為嚴(yán)格，對(duì)保鮮技術(shù)更為重視，基于此，球毛殼菌Cg-1就目前我國(guó)國(guó)內(nèi)水果采摘后的保鮮和貯存致病菌的防治具有非常好的抑制效果。

1.水果采后真菌病害的分離和鑒定

1.1從健康組織中分離潛伏侵染病原菌

在貯運(yùn)的水果中選取侵染病菌的果實(shí)，取病變的組織部位進(jìn)行分離[3]。

1.1.1分離方法：在無(wú)菌超凈工作臺(tái)上，將所取病變組織部位首先放入70%的酒精中浸泡30s，迅速用滅菌濾紙吸除酒精后，移入2%的次氯酸鈉溶液浸泡1min，再用滅菌水清洗3次（本操作可在滅過(guò)菌的培養(yǎng)皿或20ml小燒杯中進(jìn)行），取出后用濾紙吸干組織塊，植入PDA平板培養(yǎng)基中25℃下培養(yǎng)2～3d，當(dāng)培養(yǎng)出的菌落直徑生長(zhǎng)至1cm時(shí)，用接種針挑取菌絲尖端植入另一皿PDA培養(yǎng)基內(nèi)培養(yǎng)同上;重復(fù)上述操作3次即可作為純化菌種回接種果實(shí)，進(jìn)行病原致病性能的再鑒定，最后轉(zhuǎn)接入試管，4℃冰箱保存，并鑒定到屬和種。

1.1.2對(duì)分離菌株進(jìn)行病原致病性再鑒定

分離純化后的菌株必須經(jīng)過(guò)再次回接寄主試驗(yàn)才能確認(rèn)它們是否具有導(dǎo)致水果采后腐爛的致病性能。即將分離菌株回接在寄主水果上，如果發(fā)病癥狀與貯運(yùn)中腐敗癥狀相符合，

便可作為采后病原菌進(jìn)一步研究其致病條件與控制方法。采用已純化后的病原菌株回接被測(cè)果實(shí)，通過(guò)接種觀察病斑發(fā)展速度和發(fā)病程度，可判斷被接菌株致病能力的大小。

2水果的選擇和予處理

2.1水果的選擇

選擇市場(chǎng)上常見(jiàn)的秋子梨，拉丁學(xué)名：Pyrus ussuriensis Maxim.，選擇大小均勻一致、外觀無(wú)病害的購(gòu)買。

2.2予處理

將梨先用自來(lái)水清洗，再侵泡在0.1%的次氯酸鈉溶液中消毒1分鐘，取出，用自來(lái)水沖洗，沖掉殘余次氯酸鈉，再用在酒精燈上滅過(guò)菌的打孔器打洞，位置選在果實(shí)的赤道部位，打一個(gè)直徑5毫米深5毫米的洞。

3球毛殼菌Cg-1對(duì)水果致病菌的抑制效果實(shí)驗(yàn)

3.1球毛殼菌Cg-1的培養(yǎng)：

球毛殼菌Cg-1菌株的子囊孢子產(chǎn)孢培養(yǎng)基組成：馬鈴薯200g，葡萄糖20g，瓊脂18g，水1000ml，pH值自然。新鮮馬鈴薯去皮后，切成邊長(zhǎng)0.5cm的小方塊，加水1000ml，煮沸后再加熱30min，然后用四層紗布過(guò)濾，保留濾液，加入20g葡萄糖，18g瓊脂，定容1000ml，121℃滅菌25min備用。將活化的球毛殼菌Cg-1菌株的菌絲餅接種于PDA平板上，25℃培養(yǎng)12-15天，可獲得大量子囊孢子;經(jīng)過(guò)一段時(shí)間的低溫冷藏后，子囊孢子即可用1/2濃度的馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基配制成濃度為1*106的孢子菌懸液備用。

3.2病原菌及孢子懸液制備：

梨灰霉?。˙otytis cinerea Pers）

用接種環(huán)在培養(yǎng)好的梨灰霉病試管斜面上刮取適量孢子，轉(zhuǎn)移至無(wú)菌生理鹽水中，用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，并用無(wú)菌生理鹽水調(diào)整濃度至所需要的濃度，待用。

3.3抑制病斑過(guò)程：

將球毛殼菌Cg-1分別配置1*106，1*107，1*108的濃度，以假絲酵母和無(wú)菌水做對(duì)照。果實(shí)打孔后，按要求用移液槍加入上述各濃度的球毛殼菌Cg-1菌懸液30ul，放置一小時(shí)后再加入15ul的致病菌孢子懸浮液，其中梨的傷口處加入5*104個(gè)/ml的梨灰霉孢子懸浮液。果實(shí)風(fēng)干后置于塑料筐中，用保鮮膜進(jìn)行封閉，以保持筐內(nèi)的濕度。將果實(shí)置于培養(yǎng)室內(nèi)進(jìn)行貯藏，其中，梨果的貯藏溫度為25℃[4]，貯藏7天。

每個(gè)處理分三組，每組隨機(jī)挑選5個(gè)水果，實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次。經(jīng)過(guò)若干天的培養(yǎng)，用游標(biāo)卡尺測(cè)定水果病斑，記錄病斑直徑并計(jì)算發(fā)病率。

抑制率=（CK病斑直徑-處理病斑直徑）/CK病斑直徑*100%

4.結(jié)果與分析

4.1在設(shè)定的濃度下，待清水對(duì)照組梨的病斑直徑長(zhǎng)到40mm大，分別將試驗(yàn)組梨取出培養(yǎng)箱，用游標(biāo)卡尺量取病斑直徑。病斑直徑大小見(jiàn)表1，球毛殼菌Cg-1對(duì)梨灰霉病的抑制效果隨著濃度的增大病斑直徑明顯減小。在使用濃度1*108下，抑制率達(dá)到58.91%，抑制效果非常明顯（可見(jiàn)附圖）。

4.2在國(guó)內(nèi)，范青等研究了假絲酵母對(duì)水果灰霉病的抑制，當(dāng)接種灰霉孢子濃度為1*105個(gè)/mL時(shí)，在25℃，1*108CFU/mL的酵母懸浮液能完全抑制病害。球毛殼菌Cg-1與對(duì)照組假絲酵母在相同的抑菌濃度下，Cg-1組的病斑直徑明顯小于假絲酵母對(duì)照組的。表明球毛殼Cg-1對(duì)水果灰霉病的抑制效果優(yōu)于假絲酵母。

4.3接種濃度為1*108球毛殼菌Cg-1的梨子，25℃貯存30天未見(jiàn)病斑，相同條件下對(duì)照組超過(guò)20天則出現(xiàn)病斑。

參考文獻(xiàn)

[1]孫儷，仇農(nóng)學(xué)，吳競(jìng)爽.蘋果貯運(yùn)時(shí)的機(jī)械損傷的預(yù)測(cè)模型[J]，農(nóng)業(yè)工程學(xué)報(bào)，1996，12（4）：208～212.

[2]范青，田世平，徐勇.假絲酵母對(duì)蘋果采后灰霉病和青霉病抑制效果的影響[J]，中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)，2001，34（2）：163～168.

[3]范青，田世平，徐勇，等.季也蒙假絲酵母對(duì)采后桃果食軟腐病的抑制效果[J]，植物學(xué)報(bào)，2000，42（10）：1033～1038.

[4]范青，田世平，姜愛(ài)麗，等.采摘后果實(shí)病害生物防治拮抗菌的篩選和分離[J]，中國(guó)環(huán)境科學(xué)，2001，21（4）：313～316.