升溫對(duì)儲(chǔ)存血小板功能的影響

禤健蓉,羅嬌娜,周燕

(1.佛山市順德區(qū)中心血站，廣東 佛山528000；2.梧州市中心血站，廣西 梧州 543002)

血小板輸注是止血復(fù)蘇的重要處理措施，血小板聚集在小血管破裂處形成血小板栓，后者可堵住破裂口，釋放具有收縮血管作用的5-羥色胺(5-HT)、腎上腺素等，進(jìn)而促進(jìn)血液凝固[1]。血栓彈力圖儀(thromboelastogram，TEG)可從血凝塊形成、穩(wěn)固，最終到纖維蛋白溶解的全過程進(jìn)行動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)，且體外的重現(xiàn)性非常好[2]。目前臨床工作中尚未見是否可以采用加溫的方式將血小板輸注進(jìn)入人體，國(guó)內(nèi)也未見加溫對(duì)血小板功能影響的研究。本研究主要選用廣東省佛山市順德區(qū)中心血站以及廣西壯族自治區(qū)梧州市中心血站血庫(kù)中的單采血小板，在體外進(jìn)行上述研究，觀察加溫前后血小板功能是否有明顯變化，旨在為臨床輸注血小板提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

收集廣東省佛山市順德區(qū)中心血站以及廣西壯族自治區(qū)梧州市中心血站血庫(kù)中儲(chǔ)存3～5 d的單采血小板12個(gè)治療量，每治療量約260～270 mL，含血小板≥2.5×1011個(gè)，測(cè)試前的單采血小板均在血小板振蕩器內(nèi)，20～24 ℃振蕩保存。

1.2 儀器和試劑

血小板采集設(shè)備：使用Trima Accel血細(xì)胞分離儀器，所用管道是Trima Accel血細(xì)胞分離儀器配套生產(chǎn)的一次性耗材，設(shè)備與耗材采用美國(guó)Caridian BCT公司生產(chǎn)的Trima血細(xì)胞分離機(jī)及去白細(xì)胞血小板專用耗材。

輸液輸血加溫儀：使用德國(guó)barkey輸液輸血加溫儀，型號(hào)：autocontrol 3XPT。

1.3 方法

1.3.1實(shí)驗(yàn)方法[3]升溫處理：輕輕搖動(dòng)每個(gè)治療量的單采血小板約3～5 min以使其混合均勻，從每個(gè)治療量樣本中抽取2 mL用于基線測(cè)試。隨后取出15 mL注入輸液管，將輸液輸血加溫儀提前預(yù)熱至41 ℃，將儀器的加熱套管包裹輸液管外部進(jìn)行加熱，分別于10、20 min后從輸液管道中取出2 mL樣品待檢。重復(fù)操作2次，取平均值。

1.3.2檢測(cè)方法 對(duì)升溫處理的血小板分別進(jìn)行檢測(cè)。采用全自動(dòng)血液分析儀(型號(hào)XP-300，日本Sysmex公司)以電阻抗法檢測(cè)血小板計(jì)數(shù)(Platelet count，PLT)，并計(jì)算血小板含量。

使用TEG5000血栓彈力圖儀及其配套專用試劑檢測(cè)血栓彈力最大振幅(thrombotic elasticity maximum amplitude，TEG-MA)。TEG要求較高，任何因素的大小震動(dòng)均可影響描記圖像，因此，需放置在平穩(wěn)、固定的臺(tái)面上。首先檢查TEG頂部水平儀的氣泡，保證機(jī)器水平穩(wěn)定；開機(jī)后待溫度升至37 ℃時(shí)再進(jìn)行操作；基線測(cè)試時(shí)保證TEG各通道參數(shù)[纖維蛋白原形成前的時(shí)間(R)、纖維蛋白塊形成及凝塊加固的速度(α角)、纖維蛋白塊達(dá)到某一水平的速度(K)、最終形成的纖維蛋白凝塊的強(qiáng)度和穩(wěn)定性，即最大振幅(maximum amplitude，MA)及MA出現(xiàn)后30 min幅度下降的比例，即凝血塊的溶解(LY30)]差在200以內(nèi)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 不同加溫時(shí)間對(duì)樣本血小板含量的影響

加溫10、20 min后血小板含量與加溫前有高度一致性(趨勢(shì)線回歸方程分別為：y=0.920 2x+80.692，R2=0.992 2；y=0.950 9x+50.424，R2=0.992 4)。加溫10 min前后血小板含量變化范圍為(-5.7～11.89)×109/L，平均2.174×109/L；加溫20 min前后血小板含量變化范圍為(-3.5～11.2)×109/L，平均2.058×109/L。見圖1。

A：加溫10 min后；B：加溫20 min后

2.2 不同加溫時(shí)間對(duì)樣本TEG-MA的影響

加溫10、20 min后TEG-MA與加溫前有高度一致性(趨勢(shì)線回歸方程分別為：y=0.9513x+3.0177，R2=0.9940；y=0.984x+1.2191，R2=0.9919)。加溫10 min前后TEG-MA的變化范圍在(-0.5～0.7)mm，平均-0.092 mm；加溫20 min前后TEG-MA的變化范圍在(-0.6～0.9)mm，平均0.200 mm。見圖2。

757065605550757065605550505560657075加溫前MA(mm)MA(mm)MA(mm)BA

2.3 加溫前與加溫不同時(shí)間樣本血小板含量及TEG-MA變化

與加溫前比較，加溫10、20 min樣本血小板含量及TEG-MA均無(wú)明顯變化，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Ρ>0.05)。

表1 加溫前與加溫不同時(shí)間樣本血小板含量及TEG-MA變化

3 討論

血小板功能檢測(cè)有助于預(yù)測(cè)出血風(fēng)險(xiǎn)、判斷出血原因，還可用于指導(dǎo)臨床止血措施的實(shí)施，尤其對(duì)于外科手術(shù)的患者而言，血小板功能檢測(cè)更是非常重要的[4]。2017年英國(guó)血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)在血小板輸注指南中指出，術(shù)中檢測(cè)血小板含量和TEG-MA可以達(dá)到節(jié)約血小板輸注量的目的[5]。但由于檢測(cè)儀器、時(shí)機(jī)、實(shí)驗(yàn)方法、操作人員技術(shù)等多種因素的影響，實(shí)際工作中是難以得到準(zhǔn)確的血小板功能試驗(yàn)結(jié)果。

早在1962年，Obrien和Born[6]開展了一項(xiàng)血小板聚集測(cè)定的研究，被認(rèn)為是評(píng)價(jià)血小板功能的金標(biāo)準(zhǔn)，但由于受血標(biāo)本質(zhì)量、標(biāo)本老化等因素的影響可產(chǎn)生假性結(jié)果。血小板功能檢測(cè)儀是通過庫(kù)爾特原理連續(xù)計(jì)數(shù)活化前后血小板數(shù)來(lái)評(píng)估血小板功能的一種檢測(cè)方法[7]，但目前尚未有對(duì)該方法質(zhì)量控制的報(bào)道。TEG是血凝塊形成動(dòng)力學(xué)的描記圖，其可以以圖形形式顯示凝血塊形成和溶解所有階段粘彈性狀變化，屬于血液流變學(xué)檢測(cè)中的一種[8]。有統(tǒng)計(jì)顯示，圍術(shù)期低體溫發(fā)生率為50%～70%[9]，低體溫的發(fā)生可引起凝血功能障礙、循環(huán)系統(tǒng)紊亂、麻醉復(fù)蘇延遲等不良現(xiàn)象，而引起圍術(shù)期低體溫的主要因素有大量輸血和(或)大量輸入低溫液體等[10]，因此，術(shù)中適當(dāng)加溫所輸注的血制品或大輸液等對(duì)維持患者體溫恒定有重要意義。臨床使用的恒溫加壓輸液裝置可滿足36 ℃～38 ℃的不同液體溫度需求，在快速輸注大量血制品或大輸液的同時(shí)實(shí)現(xiàn)了同步加熱升溫保溫的目的[11]。

本研究對(duì)血站血庫(kù)中單采血小板樣品(3～5 d)進(jìn)行研究，將樣品在輸液輸血加溫儀中進(jìn)行加溫處理，并對(duì)前后的數(shù)據(jù)進(jìn)行對(duì)比，整個(gè)研究過程順利進(jìn)行，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，加溫10 min前后血小板含量平均變化2.174×109/L，加溫20 min前后其平均變化2.058×109/L，加溫10、20 min前后血小板含量線性回歸方程的R2分別為0.992 2和0.992 4，且經(jīng)過統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示，與加溫前比較，加溫10、20 min樣本血小板含量均無(wú)明顯變化，說明加溫處理后樣本的血小板含量與加溫前有高度一致性，且體外升溫并不會(huì)引起血小板含量的下降。

MA主要反映纖維蛋白凝塊的最終強(qiáng)度和穩(wěn)定性，這個(gè)纖維蛋白凝塊是由纖維蛋白與血小板通過人血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa(GPⅡb/Ⅲa)相互連接而形成的，也是反映血小板功能/凝集的指標(biāo)[12]。在健康成年人體內(nèi)，血小板粘彈性研究報(bào)告中的平均TEG-MA約為(63±5)mm。本研究觀察到樣本在41 ℃條件下加溫10 min后TEG-MA平均變化-0.092 mm，加溫20 min后平均變化0.200 mm，加溫10、20 min前后TEG-MA線性回歸方程的R2分別為0.994 0和0.991 9，且經(jīng)過統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示，與加溫前比較，加溫10、20 min樣本TEG-MA均無(wú)明顯變化，該結(jié)果提示加溫處理后樣本的TEG-MA與加溫前有高度一致性，且體外升溫并不會(huì)引起凝塊強(qiáng)度的降低。

綜上，升溫對(duì)儲(chǔ)存血小板樣品的血小板含量和TEG-MA均無(wú)明顯的影響。但本研究也存在不足，本研究的所有數(shù)據(jù)均是在體外觀察到的，并沒有觀察升溫對(duì)輸注體內(nèi)的血小板的任何反應(yīng)。因此，該研究的數(shù)據(jù)并不能真實(shí)反映輸入體內(nèi)的血小板的實(shí)際狀態(tài)，這仍需根據(jù)臨床患者的實(shí)際情況開展進(jìn)一步的臨床實(shí)驗(yàn)研究。